本發(fā)明涉及細(xì)胞分離培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體是涉及一體式原代細(xì)胞爬片培養(yǎng)瓶。背景技術(shù)：原代細(xì)胞是指從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。原代細(xì)胞培養(yǎng)一般指的是第1代到第10代以內(nèi)的細(xì)胞培養(yǎng)。原代細(xì)胞用途，不僅應(yīng)用于分子、細(xì)胞生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究，還可應(yīng)用于當(dāng)今熱門的生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)等。原代細(xì)胞相較于細(xì)胞株(系)而言，有著不可替代的重要性。現(xiàn)有的原代細(xì)胞提取方法主要有消化分離法和組織塊貼壁法等。現(xiàn)行的組織塊貼壁法缺乏一個(gè)整體性和封閉性更出色的培養(yǎng)瓶。傳統(tǒng)的培養(yǎng)瓶(皿)進(jìn)行原代細(xì)胞爬片培養(yǎng)有許多不便和不足之處。其一是為了保證組織塊的與培養(yǎng)瓶(皿)底部的充分接觸以及良好制動(dòng)，需要使用細(xì)胞爬片，而細(xì)胞爬片需要購(gòu)買無菌包裝或自行高壓滅菌，由于爬片和培養(yǎng)瓶一體性不好，有造成污染的可能性，再者爬片在用鑷子拾取的過程不易，容易碎裂等。其二是在放置爬片的過程中，難以控制爬片與培養(yǎng)瓶(皿)的接觸程度，即接觸面太小，培養(yǎng)基會(huì)滲進(jìn)爬片與培養(yǎng)瓶(皿)之間，在浮力的作用下，爬片會(huì)漂浮，這樣就起不到爬片的作用，若爬片與培養(yǎng)瓶(皿)的間隙很小，就會(huì)影響培養(yǎng)基的滲入，對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖不利。由于上述的局限性。若有原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件及相關(guān)的實(shí)驗(yàn)方案或參考文獻(xiàn)也可提供給我方（保密信息除外）。湖南乳鼠原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

    7)蓋好培養(yǎng)瓶的蓋子，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細(xì)胞分布均勻。若需要?dú)怏w交換可打開蓋子。(8)將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱中（37℃，5%CO2，95%空氣）(9)放入培養(yǎng)箱后第6-16小時(shí)更換一次培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細(xì)胞。5、細(xì)胞培養(yǎng)過程中，多久更換一次培養(yǎng)基？這取決于細(xì)胞生長(zhǎng)的速度。一般而言2-3天更換一次培養(yǎng)基，許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。注意：凍存細(xì)胞復(fù)蘇后，在6-16小時(shí)內(nèi)更換培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和死亡的細(xì)胞。6、我能擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存原代正常人類細(xì)胞嗎？這取決于細(xì)胞的類型。一些細(xì)胞類型像神經(jīng)細(xì)胞，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和一些生長(zhǎng)緩慢的上皮細(xì)胞，不推薦擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存。其它的細(xì)胞類型像成纖維細(xì)胞、星形細(xì)胞、腎系膜細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞等等，可以擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存。然而，需要注意的是再次凍存的過程可能導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)性能的改變。7、培養(yǎng)瓶中應(yīng)該加入多少體積的培養(yǎng)基？我們推薦的用量為：T-25培養(yǎng)瓶5ml，T-75培養(yǎng)瓶15ml，T-150培養(yǎng)瓶30ml。湖南乳鼠原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)本產(chǎn)品經(jīng)過光鏡檢測(cè)形態(tài)，經(jīng)Western blot檢測(cè)蛋白標(biāo)記物的表達(dá)鑒定。

    pricells-原代細(xì)胞分離試劑盒ii分離試劑盒編號(hào)：iso-ii分離試劑盒適用：各種人和哺乳動(dòng)物組織的骨骼肌細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、心肌細(xì)胞、肺組織細(xì)胞、軟骨細(xì)胞及滑膜細(xì)胞的分離。分離試劑盒規(guī)格：1分離試劑盒價(jià)格：￥1980分離試劑盒產(chǎn)地：中國(guó)，pricells分離試劑盒特征：不含有hiv、hbv、hcv、細(xì)菌、支原體、、酵母；不含有內(nèi)；不含有苯；不含有血清。生物安全級(jí)：1級(jí)。運(yùn)輸條件：4oc。儲(chǔ)存條件：4oc，避光。用途范圍：只可用于科研。原代細(xì)胞分離試劑盒ii產(chǎn)品說明書一、主要適用骨骼肌細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、心肌細(xì)胞、肺組織細(xì)胞、軟骨細(xì)胞及滑膜細(xì)胞。二、試劑盒組成1、buffera：100ml×24℃保存2、bufferb：50ml×24℃保存3、bufferc50ml×14℃保存4、bufferd：20ml×14℃保存5、buffere：20ml×14℃保存6、消化液i：2ml×24℃保存7、消化液ii:2ml×14℃保存三、使用方法注意：使用前請(qǐng)認(rèn)真閱讀說明書，按說明書的要求對(duì)試劑進(jìn)行妥善保存。本試劑盒供用于5次組織的原代細(xì)胞分離，每次分離的組織約1g。取消化液i放入50mlbufferb中，放4℃保存。用完后，再新鮮配制。消化液ii放入50mlbufferc中，放4℃保存。1、取組織重約1g，放入無菌培養(yǎng)皿中，取1×pbs（）清洗組織。

    具體實(shí)施方式以下結(jié)合附圖和具體實(shí)施例，對(duì)本實(shí)用新型進(jìn)行詳細(xì)說明。如圖1至圖5所示，一種新型原代細(xì)胞培養(yǎng)箱，包括若干個(gè)用于存放細(xì)胞培養(yǎng)皿的內(nèi)箱盒2、及用于存放所述內(nèi)箱盒的外箱體1，所述外箱體1內(nèi)設(shè)有若干列中空的矩形槽11，各所述矩形槽11的兩側(cè)分別設(shè)有若干層對(duì)稱的滑槽111，若干層所述滑槽111由上至下等間距依次設(shè)置，每一層所述滑槽111的正面及背面各存設(shè)有一內(nèi)箱盒2，所述內(nèi)箱盒2包括底盒21、紫外燈23及上蓋22，所述紫外燈23設(shè)于底盒21內(nèi)，所述底盒21與上蓋22的一側(cè)通過合頁(yè)鉸接，所述底盒21與上蓋22的另一側(cè)通過鎖扣24扣合連接，所述底盒21上設(shè)有推拉把手25，所述底盒21的兩側(cè)分別設(shè)有與滑槽111適配的滑輪211，所述底盒21兩側(cè)的頭部分別設(shè)有與滑槽111適配的滑塊212。如圖1至圖3所示，內(nèi)箱盒2內(nèi)可存放細(xì)胞的培養(yǎng)皿，外箱體1的正面及背面均可存放內(nèi)箱盒2，正背兩面可同時(shí)存放內(nèi)箱盒2的設(shè)計(jì)，提高了細(xì)胞培養(yǎng)箱的空間利用率，使得細(xì)胞培養(yǎng)箱在同一占地面積的情況下可存儲(chǔ)更多的細(xì)胞培養(yǎng)皿。存放時(shí)，只需將內(nèi)箱盒2的滑輪211對(duì)準(zhǔn)滑槽111，手持在底盒21上的推拉把手25，通過滑輪211滑動(dòng)的方式，將內(nèi)箱盒2推送至滑槽111內(nèi)。干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化一方面是干細(xì)胞鑒定的主要方法。

    包括臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、脂肪干細(xì)胞、皮膚成纖維細(xì)胞、軟骨細(xì)胞等各種細(xì)胞的原代培養(yǎng)。本人從2014年研究生畢業(yè)后在一家干細(xì)胞公司從事干細(xì)胞項(xiàng)目研發(fā)工作5年以上，擁有5年以上各種細(xì)胞如臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、脂肪干細(xì)胞、皮膚成纖維細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)經(jīng)驗(yàn)。包括負(fù)責(zé)人脂肪干細(xì)胞、野生型豬和基因敲除豬脂肪干細(xì)胞及軟骨細(xì)胞的分離培養(yǎng)技術(shù)，并多次為301醫(yī)院提供質(zhì)量合格的脂肪干細(xì)胞、軟骨細(xì)胞；負(fù)責(zé)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的制備，將臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞送中國(guó)食品藥品檢定研究院進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)，并順利獲得中國(guó)食品藥品檢定研究院簽發(fā)的關(guān)于細(xì)胞安全性和生物學(xué)效應(yīng)合格的檢定報(bào)告。非常擅長(zhǎng)從臍帶組織、脂肪組織、皮膚組織等各種組織中分離培養(yǎng)獲得臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、脂肪干細(xì)胞、皮膚成纖維細(xì)胞等，一般第4-7天可見細(xì)胞爬出，7-14天可見大量細(xì)胞爬出，21天左右可進(jìn)行原代傳代培養(yǎng)，30天內(nèi)可獲得足夠量的細(xì)胞并進(jìn)行凍存。如需要各種細(xì)胞的組織塊分離培養(yǎng)服務(wù)，也歡迎大家和我聯(lián)系，我將竭誠(chéng)為您服務(wù)。人臍動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自臍帶動(dòng)脈，一般用于生理學(xué)和藥理學(xué)研究。血液原代細(xì)胞服務(wù)

根據(jù)您的需要可以提供經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的多克隆細(xì)胞系或者單克隆細(xì)胞系。湖南乳鼠原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

    原代細(xì)胞培養(yǎng)之分離注意事項(xiàng)1、組織塊培養(yǎng)法1）組織塊接種后，在觀察和移動(dòng)的過程中，注意不要引起液體的振蕩。要避免經(jīng)常翻動(dòng)和振動(dòng)，否則組織塊不易附著于瓶壁上或附著后也會(huì)脫落飄起。2）加入的培養(yǎng)液不宜過多，避免浸泡的組織塊受輕微的波動(dòng)而脫落下來。3）當(dāng)細(xì)胞向外遷徙出來后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細(xì)胞，它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會(huì)影響原代細(xì)胞的生長(zhǎng)。4）為促進(jìn)組織塊盡快粘貼在培養(yǎng)瓶皿上，可以在種植前先將膠原薄層涂在培養(yǎng)瓶底壁上。2、貼壁型原代細(xì)胞1)原代培養(yǎng)的分離細(xì)胞在初次接觸體外環(huán)境時(shí)，它們之間會(huì)互相影響，在這些細(xì)胞之間能產(chǎn)生一些促生長(zhǎng)的活性物質(zhì)，使細(xì)胞彼此互相促進(jìn)存活和生長(zhǎng)。如果接種的細(xì)胞密度過低，細(xì)胞之間的促生長(zhǎng)作用很小，也很難使細(xì)胞適應(yīng)從體內(nèi)的組織環(huán)境到被分散后進(jìn)入生存環(huán)境的變化過程。如果接種的細(xì)胞密度過大，會(huì)導(dǎo)致營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)不足，代謝廢物積累較快需要經(jīng)常換液和傳代。2）適當(dāng)增大原代培養(yǎng)接種的細(xì)胞密度，給培養(yǎng)的細(xì)胞提供更多的類似于在體內(nèi)時(shí)細(xì)胞之間的相互作用，會(huì)極大提高原代培養(yǎng)的細(xì)胞在體外存活率。待細(xì)胞適應(yīng)體外環(huán)境后進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí)再以較低的密度接種和培養(yǎng)。3）盡快使接種的細(xì)胞貼壁。湖南乳鼠原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

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