酒精性肝病(AH)大鼠模型建模方法【方法】1、正常組大鼠自由飲水。2、酒精性脂肪肝(alcoholicfattyliverdisease，AFL)模型組大鼠自由飲用酒精飲料，其酒精濃度從5%開始，每個濃度維持一周，依次改為10%、15%、20%、25%、30%、35%至40%，以40%濃度持續至12周。3、在實驗過程中，各組大鼠均給以普通顆粒飼料，共持續為12周。4、第12，動物禁食12h，稱重，下腔靜脈取血處死，血液離心取上清備用。【檢測】1、生化指標檢測檢測ALT、AST、TC、TG、FFA、LDL-C、HDL-C和血糖的含量。2、組織病理學酒精性脂肪肝模型組大鼠肝臟體積增大，明顯腫脹，包膜緊張，邊緣圓鈍，呈奶黃色，切面油膩，腹腔內尤以有腹膜后脂肪堆積明顯。HE染色顯示，正常組肝臟內無明顯脂肪變性，肝小葉結構正常，肝細胞索圍繞靜脈呈放射排列。模型組肝臟彌漫大量脂肪變性，細胞體積增大，呈氣球樣變。3、標志因子水平ELISA法測定血清中TNF-α和ApoB的含量。四氯化碳誘導急性肝損傷大鼠模型。西藏腦定位動物模型建模

    視網膜外網層及其他相關細胞層出現相應病理改變。因此，視網膜前體細胞中的gm20541基因被敲除的動物可以作為視網膜色素變性疾病模型，用于視網膜色素變性性疾病研究等領域中，為該疾病的研究例如發病過程、機制以及相關藥物的篩選提供一種新的模型。進一步地，在本發明的一些實施方案中，敲除gm20541基因序列是指敲除gm20541基因的外顯子序列。敲除gm20541基因序列可以是敲除gm20541基因全長序列，也可以是敲除gm20541基因部分序列例如部分外顯子序列，無論敲除那種類型(部分或全長)的序列，只要是能夠在前體細胞中沉默gm20541基因的表達，使動物表現出視網膜色素變性性疾病相應特征即落入本發明的保護范圍。進一步地，在本發明的一些實施方案中，所述外顯子序列選自第1外顯子、第2外顯子、第3外顯子中的任意一個或多個外顯子序列。在本發明公開的內容基礎上，即在本發明揭示了gm20541基因與視網膜色素變性疾病的相關關系的前提下，本領域技術人員容易想到敲除gm20541基因的任意一個或多個外顯子序列，以使gm20541基因的功能受損，進而得到類似的視網膜色素變性疾病模型，此類方法，也是屬于本發明的保護范圍。進一步地，在本發明的一些實施方案中。西藏腦定位動物模型建模博萊霉素是具有多種抗腫瘤作用的多組分，其毒副作用之一是引起肺纖維化。

    擴增產物為。其中a2,3,6,9,10,b1為陽性。擴增3’端長臂使用引物：neof:5’-cgccttcttgacgagttcttctga-3’；gm3’lrr:5’-ggtgcttgagtagtgttgaatctcagtggacca-3’結果見圖3中b，擴增產物為。其中：a2,3,6,9,10,b6,9,es1g,es2g為陽性雜合子，+/+為野生型對照。5將步驟4得到的雜合子小鼠動物與轉基因鼠flper鼠交配繁育，得到gm20541基因條件性敲除雜合子小鼠；6將步驟5得到的gm20541基因條件性敲除雜合子小鼠相互交配繁育，得到gm20541基因條件性敲除純合子小鼠；7將步驟6得到的gm20541基因條件性敲除純合子動物與轉six3-cre基因動物交配，得到視網膜前體細胞gm20541基因敲除小鼠。轉基因鼠flper鼠購自美國捷克森實驗室(品系名稱：(rosa)26sortm1(flp1)dym/rainj)。six3-cre轉基因小鼠(mgi：3574771)由美國德克薩斯大學安德森中心贈送。six3是一個前腦腹側和視網膜前體細胞的標志性轉錄因子，其特異性驅動cre基因在視網膜前體細胞表達，cre蛋白可以進入細胞核，識別基因組上loxp位點，實現基因敲除。基因敲除小鼠鑒定步驟：對上述視網膜前體細胞敲除gm20541基因的小鼠的基因型鑒定，操作如下：(1)剪小鼠尾梢少許組織樣本，置于干凈的；(2)在離心管中加入100μl裂解液。

    然后再入固定液，但要注意防止組織損傷。要熟悉采集部位。要能準確的按解剖部位采集，如胰腺，一般取胰島較多的胰腺尾部；肺應取有細支氣管及帶有軟骨片的小支氣管部。如果實驗需進行多組織樣本的采集，采集順序應按照：消化，神經系統，皮膚，肌肉等的順序進行。選好組織塊的切面。熟悉某些組織成分安排，然后決定其切面的走向；如一長管狀以橫切面較好。切除不需要的部分。特別是組織周圍的脂肪等，應盡可能掉，否則給固定、脫水、浸蠟、切片等帶來一些不必要的問題。組織樣品的固定（1）固定的方法：①小塊組織固定法：從動物取下的小塊組織，立即置入液態固定劑（這是應用經常的方法）。②注射/灌注固定法：某些組織塊由于體積過大或固定液極難滲入內部或需要對整個臟器或整個動物進行固定，這時宜采用注射固定法，將固定液注入血管，經血管分支到達整個組織和全身，從而得到充分的固定。另，空腔組織比如肺，肺內含有空氣，固定液難以滲入，建議先做肺灌注，使得肺充盈滿固定液以后再進行保存，如果空腔中氣體沒有有效排出，后續可能影響固定效果（沒有灌注的肺組織會浮在液體表面不利于固定，切片以后也會看到很多的空泡）。③蒸汽固定法：比較細小而薄的標本。卵巢切除致骨質疏松大鼠模型。

    小鼠尾尖用酒精擦拭尾巴，引起輕微的血管擴張；用無菌手術刀、刀片或鋒利的剪刀，快速截斷小鼠尾尖1-2毫米。如果需要多次采，之后每次需截除2-3毫米；從尾部像尾尖方向按摩，增加血流；用采集血液；結束后，按壓傷口或使用止血劑來止血；每次量大約可達。小鼠眼球取血單手保定好小鼠；必要時剪掉小鼠胡須，防止污染血液；輕壓取血側眼部皮膚，使眼球充血突出；用彎頭鑷夾取眼球并快速在摘取；同時用左手中指輕按小鼠心臟部位，以加快心臟泵血速度；當血液流盡時，用脫臼法處死小鼠；大鼠眼眶取血先將小鼠進行麻醉，大鼠翻正反射消失時不在繼續麻醉；抗凝處理過的玻璃毛細采樣管，掰成2-3厘米長度；右手食指和拇指輕按眼眶兩側皮膚，使眼球突出，毛細管從內側的眼球與眼瞼的縫隙處進入，輕輕旋轉毛細管，稍微深入眼球后上方，血液流速快的時候4-5滴即可，溫柔的將毛細管取出；用棉簽按壓大鼠眼眶止血，每次可取血50-100微升，將血液放入冰盒中保存。小鼠心臟取血先將小鼠麻醉，稍靠右側平躺在手術板上固定；左側第三四根肋骨間觸摸心臟，跳動明顯，慢慢進針；針有回血停止進針，開始取血；一次可以300到500微升，小鼠存活，放到加熱墊上待小鼠蘇醒后放入籠中。在肝臟中，肝外膽道系統的阻塞會引發膽汁淤積和炎癥，導致門靜脈周圍區域的強烈纖維化反應。西藏腦定位動物模型建模

通過阿霉素（Adriamycin，ADR）腹腔注射給藥（Adriamycin，ADR）試圖造成小鼠心衰。西藏腦定位動物模型建模

    痙攣型腦性癱瘓(SCP)大鼠模型【目的】痙攣型腦性癱瘓(SCP)大鼠模型建立【動物】SPF級SD大鼠，雄性，周齡6~8W，體重：200~250g【方法】1、大鼠麻醉，顱頂脫毛備皮；2、大鼠腦定位儀固定大鼠，顱頂正中切口，長度約2cm開口暴露前囟及矢狀縫；3、縫線將皮膚左右分開固定，前囟后10mm、矢狀縫左側；4、微量注射器移至開孔處修正骨孔，注射器垂直向顱內插入，緩慢注射無水乙醇15ul，注射完移除注射器，棉球壓迫止血；5、縫合創口后維持25°體溫，等待蘇醒，觀察大鼠狀態。【觀察】術后3天模型大鼠攝食減少、右側肢體跛行、右前肢不負重、右前肢及右前爪屈曲痙攣明顯，順時針繞圈前行，2周后癥狀減輕，大鼠于術后4周開始給予動物行為學觀察【檢測】HE檢測對比觀察腦組織是否出現細胞水腫,排列不規則,結構紊亂,核固縮,染色體分布不均勻,變性壞死,核糖體消失,白質軟化灶和空囊形成,小膠質細胞浸潤,星形膠質細胞肥大、增生等病理表現。曠場測試（OpenFieldTest）：實驗用于評估大小鼠的活動性和探索性行為。動物被放置在一個較大的開放性場地內，然后記錄它們的運動軌跡和停留時間。用來評估動物的活動性、焦慮程度、壓力反應等。水迷宮測試。西藏腦定位動物模型建模