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北京實驗動物模型

來源: 發布時間:2023-12-21

    相較于施用所述候選藥物前,所述視網膜色素變性疾病模型的視力提高;(2)施用所述候選藥物后,相較于施用所述候選藥物前,所述視網膜色素變性疾病模型的視網膜外核層變厚;(3)施用所述候選藥物后,相較于施用所述候選藥物前,所述視網膜色素變性疾病模型的視網膜外節增長。第四方面,本發明實施例提供了一種視網膜色素變性疾病模型的繁育方法,其包括:將由如上所述的方法得到的視網膜色素變性疾病模型進行自交。在由方面所述的構建方法得到了視網膜色素變性疾病模型的基礎上,為了獲得更多的視網膜色素變性疾病模型,本領域技術人員容易想到直接將上述的構建方法得到的視網膜色素變性疾病模型進行自交以繁育或培育出更多數量的視網膜色素變性疾病模型,這也是屬于本發明的保護范圍。附圖說明為了更楚地說明本發明實施例的技術方案,下面將對實施例中所需要使用的附圖作簡單地介紹,應當理解,以下附圖示出了本發明的某些實施例,因此不應被看作是對范圍的限定,對于本領域普通技術人員來講,在不付出創造性勞動的前提下,還可以根據這些附圖獲得其他相關的附圖。圖1:檢測gm20541基因在不同組織中的表達;圖中:a:rt-pcr檢測gm20541基因在不同組織的表達結果。合理建立周圍性面癱動物模型對進一步深入研究具有重要意義。北京實驗動物模型

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    首先,預實驗必須要當做正式實驗來對待(態度要放端正,這是必須的)。預實驗的每一步都需要詳細規劃,多方籌謀。不論是實驗動物的選擇,還是檢測試劑的購買,都盡量和正式實驗統一標準。建議大家先把所有試劑和藥物購買完畢后,再去購買實驗動物。因為動物會長胖,長胖后給藥劑量就要增加,不僅多花錢,并且還容易影響實驗效果。筆者曾經提前將實驗動物買回,但因為特殊原因沒能購買到造模藥物,終只能忍痛割愛將動物贈送他人,白白虧了一筆血汗錢(那批老鼠在我這兒白吃白喝長得太胖,沒辦法用作造模)。動物及試劑購買首先需要考慮:實驗動物品種、體重、性別、周齡(通常根據既往文獻報道可以獲得答案)、數量(需要考慮到實驗有一定動物死亡率或者動物本身會打架互毆,因此需要提前購買足夠的動物)。動物購買的途徑、安置的地點,飲食管理(一般實驗室會有動物房,也可以從其他地方購買),動物免疫證明、倫理證明需要提前準備好。實驗相關的試劑和藥物:比如造模藥物和器械,動物干預所需藥物,陽物選擇及購買(有些藥物購買很困難,必須通過特殊程序才能買到)。如果涉及到有創操作,要提前準備好物(建議提前購買),手術器械。需要了解自身實驗平臺能完成哪些技術。湖南兔動物模型培養它主要影響身體內的大中動脈,如冠狀動脈、頸動脈、腦動脈和腎動脈等,其發病機制的主要過程。

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    痙攣型腦性癱瘓(SCP)大鼠模型【目的】痙攣型腦性癱瘓(SCP)大鼠模型建立【動物】SPF級SD大鼠,雄性,周齡6~8W,體重:200~250g【方法】1、大鼠麻醉,顱頂脫毛備皮;2、大鼠腦定位儀固定大鼠,顱頂正中切口,長度約2cm開口暴露前囟及矢狀縫;3、縫線將皮膚左右分開固定,前囟后10mm、矢狀縫左側;4、微量注射器移至開孔處修正骨孔,注射器垂直向顱內插入,緩慢注射無水乙醇15ul,注射完移除注射器,棉球壓迫止血;5、縫合創口后維持25°體溫,等待蘇醒,觀察大鼠狀態。【觀察】術后3天模型大鼠攝食減少、右側肢體跛行、右前肢不負重、右前肢及右前爪屈曲痙攣明顯,順時針繞圈前行,2周后癥狀減輕,大鼠于術后4周開始給予動物行為學觀察【檢測】HE檢測對比觀察腦組織是否出現細胞水腫,排列不規則,結構紊亂,核固縮,染色體分布不均勻,變性壞死,核糖體消失,白質軟化灶和空囊形成,小膠質細胞浸潤,星形膠質細胞肥大、增生等病理表現。曠場測試(OpenFieldTest):實驗用于評估大小鼠的活動性和探索性行為。動物被放置在一個較大的開放性場地內,然后記錄它們的運動軌跡和停留時間。用來評估動物的活動性、焦慮程度、壓力反應等。水迷宮測試。

    但是目前對znf124的研究還處于初期階段,其小鼠同源基因為gm20541(predictedgene20541,mgi:5142006),該基因位于小鼠17號染色體3,全長2750kb,其cdna全長1406bp,包含3個外顯子,其cdna序列如seqid所示,如下:gaatgcagtgacctatgatgatgtgtgtgtgaacttcactctggaagaatggactttactggatccttcacagaagagtctctacagagatgtgatgcaggaaacctacaggaatctcactgctataggctacaattgggaagatgacaatattgaagactattttcaaagttctagaagacatggaaggcatgaaagaaatcatagtggagagaaaccttatgcttgtaaccaatgtgataaagccttttcatgtcatcatagtctccaaatacataaaagaagacatactggagagaaactctatgaatgtaaccgttgtaataaaggctttccatatcccagtgctctacaaatacataaaaggatacacagtggagagaaaccctatgaatgtaaacaatgtggtaaagcctttgcatgtcacagttctcttcaaaggcatgaaagaatacatactggtgagaaaccttatgaatgtagccaatgtggtaaagcctttacacatcaaaagagtctccaaatacataaaagaactcacagtggagaaaaaccatatgggtgtagtcagtgtggaaaagactttgtaagtcagagtcgtcttctagaacataaaaggacacatactggagagaaaccctatgaatgtaaccaatgtggtaaagcctttgcatattccaacagtctccaaatacatcaaagaacacacactggagagaaaccctatgaatgtaaccagtgtggtaaagcctttgcatatcacaatagtctccaaatacata。臨床上平時不易見到的疾病可用動物隨時復制出來。

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    所用儀器為bio-rad的化學發光凝膠成像系統。結果見圖1中c和d,可以看出,通過免疫印跡(westernblot)的方法證明了gm20541蛋白在小鼠腦、肝臟、視網膜、心臟、腎臟以及脾中均有表達。實施例2本實施例以小鼠為目標動物,對本發明提供的視網膜色素變性疾病模型的構建方法進行說明,gm20541基因敲除的路線如圖2所示,具體操作如下:基因敲除小鼠獲取步驟:1將與小鼠gm20541基因同源的5’臂、含有報告基因gfp的表達框、有neo抗性基因的表達框、兩端有同向排列loxp位點的第3外顯子和3’端臂克隆到bac載體(圖2)以用于替換欲敲除的gm20541基因第3個外顯子;2利用dna同源重組技術將gm20541基因中的第3個外顯子替換,得到gm20541基因條件性敲除的小鼠胚胎干細胞;3利用步驟2得到的胚胎干細胞制備得到含gm20541基因敲除細胞的嵌合體小鼠(圖2);4將步驟3得到的嵌合體小鼠和野生型小鼠交配繁育,在后代中篩選出gm20541基因敲除的雜合子小鼠(圖2)。鑒定:實施例2中長距離pcr鑒定陽性子一代鼠的實驗結果,擴增5’端長臂使用引物對gm5’lrf和sa3’r,擴增產物為。gm5’lrf:5’-ggcaggatcttcacctgttgaccaacatgcct-3’;sa3’r:5’-ccaaccccttcctcctacatagttggcagt-3’。結果見圖3中a。可以嚴格控制實驗條件,增強實驗材料的可比性。上海基因敲除動物模型構建

惡性黑色素瘤是起源于神經嵴的黑色素細胞惡性。北京實驗動物模型

    特發性肺纖維化(IPF)小鼠模型建立【方法】1、BALB/c小鼠麻醉,6-8周齡,體重20~25g,仰臥固定于實驗臺上,頸部去毛后酒精消毒,切開皮膚,逐層暴露氣管;2、將1mL注射器經兩氣管軟骨環間隙朝向心端刺入氣管,回抽無阻力;3、注入博萊霉素(約4~5mg/kg)再向氣管內注入~3次,使藥物在肺部分布均勻;4、以大鼠身體長軸為中心,正反快速旋轉鼠板1~2分鐘。縫合皮膚,局部聚維酮碘消毒(或用青霉素消毒)防止,室溫保持在24~25℃,待動物自然清醒后置籠內常規飼養。肺纖維化模型發展時間:2周可見肺系數(肺重/體重×100%)、羥脯氨酸含量明顯升高。顯微鏡下可見炎癥細胞浸潤,以淋巴細胞、單核吞噬細胞為主,并有肺泡壁增厚、成纖維細胞增生等Ⅱ級肺泡炎表現。4周可見肺間質內有大量散在綠染的膠原纖維,肺泡結構破壞,見有許多纖維細胞等Ⅲ級肺間質纖維化病變。大鼠模型病理組織學與病理生理學改變與人類肺間質纖維化相似。其病變早期表現為滲出性肺泡炎,炎癥細胞在病變處聚集增多。晚期為肺間質纖維化,間質細胞增生,基質膠原聚集取代正常的肺組織結構。【檢測】組織病理切片HE染色。北京實驗動物模型

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