外泌體的功能外泌體可能作為細(xì)胞之間物質(zhì)和信號(hào)通訊的途徑，不同的細(xì)胞通過分泌攜帶不同組分的外泌體實(shí)現(xiàn)細(xì)胞間通訊，這些外泌體被受體細(xì)胞吸收，通過物質(zhì)交換或釋放內(nèi)含物實(shí)現(xiàn)物質(zhì)和信號(hào)的交流。外泌體與受體細(xì)胞的信息交流可能通過以下4種途徑實(shí)現(xiàn):外泌體表面膜蛋白質(zhì)被目的細(xì)胞表面的受體識(shí)別，從而靶細(xì)胞;外泌體在蛋白酶作用下產(chǎn)生的表面膜蛋白質(zhì)碎片可作為目的細(xì)胞表面受體的配體;外泌體脂膜可以與目的細(xì)胞膜融合，將蛋白質(zhì)和RNA等內(nèi)容物釋放進(jìn)去，此類膜融合可能改變靶細(xì)胞的一些膜特性，例如脂質(zhì)和膜蛋白質(zhì)的密度及種類;目的細(xì)胞通過胞吞的形式攝入外泌體經(jīng)由以上幾種途徑，外泌體將其攜帶的生物信息運(yùn)輸?shù)街苓叞屑?xì)胞或經(jīng)血液等體液運(yùn)輸而被遠(yuǎn)處組織細(xì)胞攝取，進(jìn)而影響目的細(xì)胞的基本功能和基因表達(dá)。幾乎所有的細(xì)胞都可以在自發(fā)或在一定刺激條件下產(chǎn)生外泌體，不同的細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體具有不同的功能，這些外泌體參與了一系列生理和病理過程，如發(fā)生與發(fā)展、抗原呈遞、免疫調(diào)節(jié)、組織愈合等。此外，外泌體與疾病的研究表明：外泌體可能在代謝性疾病的出現(xiàn)以及心血管健康中發(fā)揮作用。這種技術(shù)是將蛋白質(zhì)視為抗原，并利用抗體與之進(jìn)行特異性結(jié)合的特性，來進(jìn)行研究。廣西科研技術(shù)服務(wù)技術(shù)

二甲苯Ⅰ、Ⅱ各15min至透明。（2）放入二甲苯和石蠟等量混合液處理15min，再放入石蠟Ⅰ、Ⅱ透蠟各50~60min。透蠟在恒溫箱內(nèi)進(jìn)行，箱內(nèi)溫度保持在55~60℃左右。4、包埋（1）用鑷子夾取蠟?zāi)Ｔ诰凭珶羯仙约訜幔⒌谷肷僭S從溫箱中取出的純石蠟。（2）再將鑷子在酒精燈上稍加熱，夾取材料將切面朝下放入蠟?zāi)Ｖ?，排列整齊，再放上包埋盒，輕輕倒入熔蠟。5、切片、展片、貼片（1）將包埋好的石蠟塊固定在切片機(jī)上，調(diào)整厚度調(diào)節(jié)器到所需的切片厚度，一般為4~6μm。（2）切下的組織薄片要放到加熱的水中燙平，再貼到載玻片上，放45℃恒溫箱中烘干。二、HE染色1、脫蠟、復(fù)水（1）保持水浴鍋溫度為60℃，將切片放入干燥的染色缸內(nèi)，放入水浴鍋中，30min至蠟熔化。（2）石蠟切片經(jīng)二甲苯Ⅰ、Ⅱ脫蠟各5min，然后放入100%、95%、90%、80%、70%各級(jí)酒精溶液中各3~5min，再放入蒸餾水中3min，以便染料可以進(jìn)入組織。2、染色、脫水（1）切片放入蘇木精中染色約10~30min，用流水沖洗約15min，使切片顏色變藍(lán)。（2）將切片放入1%鹽酸乙醇液中褪色，幾秒后見切片變紅、顏色較淺即可，后將切片再放入流水中使其恢復(fù)藍(lán)色。（3）切片放入50%、70%、80%乙醇中各3~5min。云南實(shí)驗(yàn)科研技術(shù)服務(wù)構(gòu)建動(dòng)物疾病模型在科研中發(fā)揮了巨大的作用，但也存在一些挑戰(zhàn)。

|基因組DNA擴(kuò)增|RNA擴(kuò)增|克隆與表達(dá)克隆基因|克隆試劑盒|克隆篩選|感受態(tài)細(xì)胞|突變轉(zhuǎn)染|轉(zhuǎn)化|體外轉(zhuǎn)錄/翻譯|其它表達(dá)分析Northern印跡分析|分支DNA和mRNA定量|差別基因表達(dá)|反義寡核苷酸|RACE試劑盒|SAGE試劑盒|其它抗體蛋白A,GPLUS|抑制/凋亡抗體|信號(hào)分子抗體結(jié)構(gòu)蛋白抗體|磷酸化特異抗體|融合蛋白tag抗體非哺乳動(dòng)物蛋白抗體|細(xì)胞周期蛋白抗體|轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白抗體|抗體制備佐劑|抗體片段|抗體同種型|抗體純化|抗體制備試劑盒|其它第二抗體westernblot二抗|免疫組化二抗|其它試劑盒ELISA試劑盒|免疫組化試劑盒|放射免疫試劑盒|westernblot試劑盒|流式細(xì)胞試劑盒|其它抗體相關(guān)siRNA|重組蛋白|白蛋白|試劑|其它分子生物學(xué)服務(wù)DNA提取/純化|DNA測(cè)序|第二代高通量測(cè)序|DNA保存和活化|基因合成|基因步行|基因組分析生物信息學(xué)|SNP檢測(cè)|實(shí)時(shí)定量PCR服務(wù)|文庫(kù)/載體構(gòu)建|寡核苷酸合成Oligo合成|實(shí)時(shí)PCROligo合成|其它細(xì)胞生物學(xué)服務(wù)細(xì)胞培養(yǎng)|流式細(xì)胞檢測(cè)|細(xì)胞毒性測(cè)試|細(xì)胞因子生物檢測(cè)|影像服務(wù)|篩選/發(fā)育服務(wù)|其它干細(xì)胞技術(shù)服務(wù)干細(xì)胞提取|干細(xì)胞鑒定|干細(xì)胞誘導(dǎo)分化|干細(xì)胞常規(guī)檢測(cè)|干細(xì)胞擴(kuò)增|干細(xì)胞轉(zhuǎn)基因|干細(xì)胞其他相關(guān)實(shí)驗(yàn)|微生物學(xué)服務(wù)微生物鑒定|抑菌作用測(cè)試|內(nèi)測(cè)試|內(nèi)。

2）固定的目的①保持其原有狀態(tài)：使細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、脂肪、糖、酶等成分轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄晕镔|(zhì)，迅速防止、細(xì)胞的死后變化，防止自溶與，防止細(xì)胞過度收縮或膨脹而失去其原有形態(tài)結(jié)構(gòu)，使之盡量保持生前的狀態(tài)和結(jié)構(gòu)。②以便染色后易于鑒別和觀察：不同成分對(duì)染料有不同的親和力，以便染色后易于鑒別和觀察。③使塊硬化，便于制作薄片（塊在脫水、包埋、切片、染色等過程中不易損壞）。（3）固定液固定液種類：一類是單純固定液，即只有一種試劑；另一類是混合固定液，由兩種或兩種以上試劑組成。作為較好的固定液，應(yīng)有下列特性，首先，有強(qiáng)滲透力，能迅速的滲入內(nèi)部；其次，不使過度收縮或膨脹，并能使內(nèi)欲觀察的成分得以凝固為不溶性物質(zhì)；能使達(dá)到一定的硬度并獲得較佳的折光率和對(duì)某些染料具有較強(qiáng)的親和力。固定液通常使用10%的甲醛溶液。特殊要求的，常需要特殊的固定液，取樣之前應(yīng)做好準(zhǔn)備。如眼球樣本應(yīng)使用FAS眼球固定液，脂肪應(yīng)使用脂肪固定液等。此外，在進(jìn)行骨樣本制備的時(shí)候，還應(yīng)注意提前進(jìn)行脫鈣處理，可根據(jù)具體情況選擇慢脫鈣或快脫鈣處理?？偟膩碚f，樣品的采集是實(shí)驗(yàn)中至關(guān)重要的一環(huán)，如果取樣環(huán)節(jié)出現(xiàn)了偏差，往往會(huì)導(dǎo)致后續(xù)檢測(cè)結(jié)果的偏移。原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)傳代。

應(yīng)根據(jù)所檢測(cè)指標(biāo)的要求，需采取不同策略處理。在如今分子學(xué)當(dāng)?shù)赖默F(xiàn)實(shí)背景下，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)除了對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體征及生理指標(biāo)進(jìn)行全的監(jiān)控外，各種分子檢測(cè)甚至是組學(xué)檢測(cè)也開始大行其道，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)束之后的機(jī)制研究成為了實(shí)驗(yàn)的重頭戲。一般來說，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)檢測(cè)對(duì)象主要包括：（1）體液中各類因子定性及定量檢測(cè)由于此類檢測(cè)對(duì)象多為蛋白及各類小分子物質(zhì)，因此在取樣過程中應(yīng)注意防止此類物質(zhì)降解，在獲取后，應(yīng)及時(shí)置于溫（≤-80℃）進(jìn)行保存，在后續(xù)實(shí)驗(yàn)過程中，也應(yīng)當(dāng)注意保存條件的穩(wěn)定性，避免反復(fù)凍融。常用的方法便是酶聯(lián)免吸附測(cè)定（ELISA），除此之外，可利用生化分析儀及不同檢測(cè)方法的（比色法、比濁法等）方法對(duì)各類生化指標(biāo)及因子進(jìn)行定性及定量檢測(cè)。（2）生理變化及免組化檢測(cè)常用的理檢測(cè)多使用H&E染色對(duì)細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核進(jìn)行染色標(biāo)記，以觀察細(xì)胞變化。除此之外，許多特殊染色也在理生理變化中得到了應(yīng)用，如利用Masson染色檢測(cè)纖維化變，Nissl染色檢測(cè)神經(jīng)元損傷，β-半乳糖甘酶染色檢測(cè)細(xì)胞衰老等。此外，還可以通過免組化技術(shù)對(duì)某些特異性標(biāo)記物進(jìn)行免顯色檢測(cè)，達(dá)到原位定性或定量檢測(cè)的目的。。由于大部分研究使用到的是人類來源的細(xì)胞，種植到免疫正常的動(dòng)物體內(nèi)會(huì)發(fā)生免疫排斥反應(yīng)。上海兔科研技術(shù)服務(wù)構(gòu)建

通過不同分組之間的細(xì)胞對(duì)于劃痕區(qū)修復(fù)能力的不同，可以判斷各組細(xì)胞的遷移與修復(fù)能力的差別。廣西科研技術(shù)服務(wù)技術(shù)

注意事項(xiàng)1.病毒包裝的幾個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)主要包括：細(xì)胞因素、載體系統(tǒng)(盡量使用成熟的商業(yè)化載體系統(tǒng))、構(gòu)建重組的質(zhì)粒正確與否、質(zhì)粒抽提純化情況、包裝轉(zhuǎn)染控制(24、48小時(shí)的細(xì)胞及熒光狀態(tài)判斷)、目的基因?qū)Σ《景b影響(基因大小、序列情況、蛋白功能毒性等都會(huì)影響到是否能包裝成功)。，需要觀察包裝病毒后的48h培養(yǎng)基顏色是否橙紅。3.病毒濃縮：病毒一般在48h和72h各收一次。如果不想濃縮病毒的話，也可以直接將收集的病毒上清作為要的細(xì)胞的培養(yǎng)基，但是可能效果會(huì)不太好。并且一般收病毒時(shí)，培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)已經(jīng)損耗了很多，那樣直接培養(yǎng)細(xì)胞會(huì)損害細(xì)胞，所以建議還是進(jìn)行濃縮后再。常見問題1.包裝病毒時(shí)293T細(xì)胞狀態(tài)不好，或者鋪得過密，可以選擇放棄該次實(shí)驗(yàn)。2.目的載體過大，不易。3.避免轉(zhuǎn)染過程以及后續(xù)過程出現(xiàn)的污染。廣西科研技術(shù)服務(wù)技術(shù)