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云南皮下成瘤動物模型

來源: 發布時間:2025-10-14

通過無極調控微負壓裝置來調節飼養倉2內的壓力,通過高原低氧環境模擬裝置來調整飼養倉2內氧含量,當需要燈光時,通過高原光照環境模擬裝置15開啟紫外燈以及照明燈,通過高原溫度環境模擬裝置16來進行調溫,通過高原濕度環境模擬裝置17調節飼養倉2內濕度,通過動物行為學遠程觀察單元18可以監控動物的行為,飼養倉2內若干代謝籠3配備投料斗8、飲水瓶9可以進行攝食量、飲水量測定,聚糞斗10、尿液排出口11、糞便排出口12便于模型動物的尿液和糞便常規檢測,并且本系統設置的多個代謝籠3可以同時培養多種動物,造模動物多。實施例2在實施例1的基礎上提供的一種高原性人類疾病模型制備環境模擬系統,所述無極調控微負壓裝置包括進風系統13、排風系統14和霍尼威爾或西門子調控模塊,所述進風系統13設置在功能設備集成底座1內,所述排風系統14設置在飼養倉2頂部。本實施例的工作原理:本系統進風系統13內集成有進風風機單元、排風系統14集內成有排風風機單元。由于飼養倉2能夠密封,通過改變風機風量的方式來調節壓差,進風風機單元和排風風機單元均與飼養倉2連通,通過調節進、排風的壓力差值,系統內環境能夠形成(~)微負壓,系統配置霍尼威爾或西門子調控模塊。人類疾病的動物模型是指各種醫學科學研究中建立的具有人類疾病模擬表現的動物。云南皮下成瘤動物模型

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經多級乙醇至水洗:二甲苯(i)5min→二甲苯(ⅱ)5min→100%乙醇2min→95%的乙醇1min→80%乙醇1min→75%乙醇1min→蒸餾水洗2min;4)蘇木素染色5分鐘,自來水沖洗;5)鹽酸乙醇分化30秒;6)自來水浸泡15分鐘;7)置伊紅液2分鐘。8)常規脫水,透明,封片:95%乙醇(i)1min→95%乙醇(ⅱ)1min→100%乙醇(i)1min→100%乙醇(ⅱ)1min→二甲苯石碳酸(3:1)1min→二甲苯(i)1min→二甲苯(ⅱ)1min→中性樹脂封固。9)顯微鏡下拍照。結果發現在4個月時,與ctrl(對照)小鼠比較,sixko小鼠的視網膜外核層已經開始變薄,表明感光細胞死亡(圖7)。實施例5視網膜冰凍切片免疫染色:取4月齡的由實施例2得到的gm20541基因敲除純合子小鼠斷頸處死后,快速取眼球,并放入4%的pfa中,冰上固定15min后,在角膜上剪口,然后繼續冰上固定。2h后,pbs緩沖液沖洗3遍,然后將眼球置于30%蔗糖溶液中脫水2h,然后解剖鏡下剪去角膜及晶體,oct包埋并迅速置于-80℃冰箱冷凍。大約10min后,取出oct包埋的眼球,置于冰凍切片機-25℃平衡約30min后即可切片。切片厚度為12μm。切片完成后,選取質量較高的片子于37℃烘箱放置30min,然后免疫組化筆在有視網膜組織的地方畫圈,pbs洗三遍以去除oct。外包動物模型實驗通過建立腦缺血-再灌注動物模型,模擬人類ICVD的病理過程。

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所用儀器為bio-rad的化學發光凝膠成像系統。結果見圖1中c和d,可以看出,通過免疫印跡(westernblot)的方法證明了gm20541蛋白在小鼠腦、肝臟、視網膜、心臟、腎臟以及脾中均有表達。實施例2本實施例以小鼠為目標動物,對本發明提供的視網膜色素變性疾病模型的構建方法進行說明,gm20541基因敲除的路線如圖2所示,具體操作如下:基因敲除小鼠獲取步驟:1將與小鼠gm20541基因同源的5’臂、含有報告基因gfp的表達框、有neo抗性基因的表達框、兩端有同向排列loxp位點的第3外顯子和3’端臂克隆到bac載體(圖2)以用于替換欲敲除的gm20541基因第3個外顯子;2利用dna同源重組技術將gm20541基因中的第3個外顯子替換,得到gm20541基因條件性敲除的小鼠胚胎干細胞;3利用步驟2得到的胚胎干細胞制備得到含gm20541基因敲除細胞的嵌合體小鼠(圖2);4將步驟3得到的嵌合體小鼠和野生型小鼠交配繁育,在后代中篩選出gm20541基因敲除的雜合子小鼠(圖2)。鑒定:實施例2中長距離pcr鑒定陽性子一代鼠的實驗結果,擴增5’端長臂使用引物對gm5’lrf和sa3’r,擴增產物為。gm5’lrf:5’-ggcaggatcttcacctgttgaccaacatgcct-3’;sa3’r:5’-ccaaccccttcctcctacatagttggcagt-3’。結果見圖3中a。

基因/蛋白質表達定性或定量檢測在進行分子檢測的過程中,保持核酸和蛋白質的完整性至關重要,因此在取樣過程中,應盡量避免核酸及蛋白質的降解。如不注意采樣過程,將會導致樣本中的核酸及蛋白質的無差別降解,嚴重影響后續分子檢測結果。在條件允許的情況下,組織樣本在離體后應立刻裝入凍存管內,并立即放入液氮中進行冷凍。在RNA提取樣本的保存過程中,可以選擇非冷凍型RNA保存液或Trizol試劑進行RNA酶的抑制。針對蛋白質提取樣本的保存,我們同樣可以使用商品化的蛋白酶抑制劑進行短期處理。聚合酶鏈式反應(PolymeraseChainReaction,PCR)及免疫印跡(Westernblotting,WB),這兩種實驗手段是分子生物學檢測中不可或缺的一部分,也是發表論文至關重要的分子檢測數據。PCR主要用來對基因在基因組層面或轉錄層面的變化進行定性或定量檢測,而WB則主要用來對某一蛋白質的表達進行定量檢測。(4)轉錄組學、蛋白質組學及代謝組學檢測隨著檢測水平及相關產業的不斷發展,各類組學檢測的價格降低,實驗設計中也常常運用組學檢測來提升實驗設計的檔次。在我們進行轉錄組學及蛋白質組學的檢測過程中,同樣是要首先確保目標RNA或蛋白質的片段完整性。可以克服人類某些疾病潛伏期長,病程長和發病率低的缺點。

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實施例7在實施例6的基礎上提供的一種高原性人類疾病模型制備環境模擬系統,所述動物行為學遠程觀察單元18包括coms高清圖像采集系統、數字視頻傳輸系統、頻硬件解壓卡、視頻顯示系統。本實施例的工作原理:系統內配置coms高清圖像采集系統(支持icp/ip網絡通訊協議)、數字視頻傳輸系統、頻硬件解壓卡(usb或pci接口用戶自選)、視頻顯示系統(用戶自備),保障了實驗過程中實時監控與實驗結束后操作過程的溯源。例如,在飼養倉2上方裝高精密攝像頭,搭載手機app,可360°監控動物的行為,并能實時錄像,圖像采集等,通過監控錄像來實現動物學行為觀察。以上所述為本實用新型的較佳實施例而已,并不用以限制本實用新型,凡在本實用新型的精神和原則之內所作的任何修改、等同替換和改進等,均應包含在本實用新型的保護范圍之內。特發性肺纖維化(IPF)小鼠模型建立。上海基因敲除動物模型構建

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然后5%的nds。含有%triton)封閉通透2h,孵育一抗,4℃過夜。第二天,pbs清洗三次后,孵育相應的熒光二抗,然后再用pbs清洗三次,封片,觀察。結果見圖8,在小鼠4月齡時,通過視網膜冰凍組織切片染色外節抗體rhodopsin以及內節抗體nak-atpase后發現,相較于野生型小鼠,gm20541基因敲除純合子小鼠(圖中sixko)視網膜外節明顯縮短,表現出了明顯退化表征。綜上,可以看出,本發明實施例以小鼠為例,通過cre-loxp基因敲除技術,在小鼠視網膜前體細胞中特異性敲除gm20541基因,小鼠表現出了視力受損,視細胞外節變短退化以及視細胞丟失等視網膜色素變性疾病典型表征。由此充分說明,在視網膜前體細胞敲除gm20541基因,可以使目標動物表現出視網膜色素變性疾病。視網膜前體細胞敲除gm20541基因的動物,可以作為視網膜色素變性疾病模型。該疾病模型可以用于視網膜色素變性疾病研究等領域中,為該疾病的研究例如發病過程、機制以及相關藥物的篩選提供一種新的模型。雖然本發明實施例展示了在小鼠的視網膜前體細胞敲除gm20541基因后的表型,但本領域技術人員容易理解到,小鼠作為哺乳動物的代表性動物,在其他的哺乳類動物中敲除gm20541基因或其同源基因也應當具有相似的表型。云南皮下成瘤動物模型

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