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湖北裸鼠動物模型構建

來源: 發布時間:2025-10-16

本發明實施例提供了由上述的方法所得到的視網膜色素變性疾病模型在視網膜色素變性性疾病研究中的應用。進一步地,在本發明的一些實施方案中,所述研究是以非疾病的為目的。通過本發明的構建方法得到的動物模型其具有典型視網膜色素變性性疾病特征,其具有非常廣闊的應用前景,例如將其用于研究視網膜色素變性性疾病的發病過程、發病機制,為深入了解研究視網膜色素變性性疾病提供基礎。又或者將其用于篩選用于預防或視網膜色素變性性疾病藥物、用于評價藥物的療效或預后等。第三方面,本發明實施例提供了由上述的方法所得到的視網膜色素變性疾病模型在篩選用于預防或視網膜色素變性性疾病藥物中的應用。在本發明方面提供了構建方法的基礎上,本領域技術人員容易想到將由該方法得到的視網膜色素變性疾病模型用于篩選預防或視網膜色素變性性疾病藥物或其他類似領域,這也是屬于本發明的保護范圍。進一步地,在本發明的一些實施方案中,所述應用包括:向所述視網膜色素變性疾病模型施用候選藥物,如果所述視網膜色素變性疾病模型在施用所述候選藥物前后發生如下變化中的至少一種,則指示所述候選藥物可以作為預防或視網膜色素變性性疾病的藥物:(1)施用所述候選藥物后。控制原發病,遏制其誘導的全身失控性炎癥反應,是預防和ALI/ARDS的必要措施。湖北裸鼠動物模型構建

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飼養倉左右箱體上分別設置有小物件傳遞窗和大物件傳遞窗,所述代謝籠還包括設置在代謝籠上的投料斗、飲水瓶和設置在代謝籠下方的聚糞斗、尿液排出口、糞便排出口。進一步地,所述無極調控微負壓裝置包括進風系統、排風系統和霍尼威爾或西門子調控模塊,所述進風系統設置在功能設備集成底座內,所述排風系統設置在飼養倉頂部。進一步地,所述高原低氧環境模擬裝置包括惰性氣源,所述惰性氣源與進風系統連接,所述惰性氣源與進風系統之間設置有比例式氣閥,還包括設置在飼養倉內的嵌入式氧測定儀。進一步地,所述高原光照環境模擬裝置包括可見暖光系統和照明亮度無極控制系統,所述可見暖光系統設置飼養倉頂部。進一步地,所述高原溫度環境模擬裝置包括降溫系統、升溫系統、溫控系統和溫度采集顯示系統。進一步地,所述高原濕度環境模擬裝置包括加濕系統、除濕系統、濕度控制系統和濕度采集顯示系統。進一步地,所述動物行為學遠程觀察單元包括coms高清圖像采集系統、數字視頻傳輸系統、頻硬件解壓卡、視頻顯示系統。綜上所述,由于采用了上述技術方案,本實用新型的有益效果是:1、本實用新型非全自動控制系統,需要人為觀察并手動調節隔離器內部環境。湖北兔動物模型培養動物模型的優越性主要表現在以下幾下方面。

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四氯化碳誘導急性肝損傷大鼠模型【方法】1、將大鼠隨機分配至2組中,每組5只,正常喂食喂水7d后進行試驗;2、大鼠體重為200g±10g,按組別給予藥物:生理鹽水組每只腹腔注射1ml生理鹽水、模型組每只按5ml/kg背部皮下注射四氯化碳3、各組藥物注射24h后取材進行相關檢測(注:注射前按比例混合四氯化碳:橄欖油=1:)【評定】給予四氯化碳后TP含量下降,ALT和AST含量上升【檢測】生理鹽水組肝索結構清晰,血管內無淤血,血管周圍無炎癥病灶,肝小葉結構清晰;給予四氯化碳后肝索排列紊亂,結構不清,存在大量壞死區域且肝索結構消失,有大小不一的空泡結構,多數血管內有淤血并伴有粉染蛋白樣物質,血管周圍有炎癥反應灶,少量紅細胞滲出;西維來司鈉介入后肝索排列不清晰,存在部分壞死區域且肝索結構消失,有大小不一的空泡結構,少數血管內有淤血并伴有粉染蛋白樣物質,血管周圍有炎癥反應灶,極少量紅細胞滲出。

表明在gm20541敲除鼠視網膜外節變短退化。sixko表示gm20541基因敲除純合子小鼠;ctr是指野生型小鼠;dapi(4,6-diamidino-2-phenylindole):細胞核染料4,6-二脒基-2-苯基吲哚;rhodopsin:視紫紅質抗體;merge:兩種顏色重疊。具體實施方式為使本發明實施例的目的、技術方案和優點更加清楚,下面將對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述。實施例中未注明具體條件者,按照常規條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產廠商者,均為可以通過市售購買獲得的常規產品。以下結合實施例對本發明的特征和性能作進一步的詳細描述。實施例11采用rt-pcr方法檢測gm20541基因在不同組織的表達情況。方法:分別提取小鼠腦、肝臟、視網膜、腸、肌肉、心臟、腎臟以及脾的總rna,然后用cdna合成試劑盒(invitrogen,waltham,ma,usa)合成cdna。根據gm20541的cdna序列設計引物:gm20541-cdna-f:5’-tcggtctcatcttcattccc-3;gm20541-cdna-r:5’-ggaaggctctgttccggtat-3。以提取的cdna為模板,進行rt-pcr。擴增后進行電泳,結果見圖1。結果見圖1中a和b,可以看出,通過rt-pcr方法檢測gm20541基因在小鼠腦、肝臟、視網膜、腸、肌肉、心臟、腎臟以及脾中的表達。致使腎小球系膜這以 IgA 為主的免疫復合物沉積,同時使系膜細胞增生,基質增多。

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e:不同光強下gm20541基因敲除小鼠的暗適應視網膜電圖b波統計;scotopicamplitude:暗光測定峰值;flashintensity:閃光強度;a-wave:a波;b-wave:b波。圖6:光適應視網膜電圖(erg)檢測結果;圖中:a-b:不同光強下gm20541基因敲除小鼠的光適應視網膜電圖軌跡圖;c:20cd·s/m2光強下gm20541基因敲除小鼠的光適應閃爍(flicker)視網膜電圖軌跡圖;d:不同光強下gm20541基因敲除小鼠的光適應視網膜電圖a波統計;e:不同光強下gm20541基因敲除小鼠的光適應視網膜電圖b波統計;f:20cd·s/m2光強下gm20541基因敲除小鼠的光適應閃爍(flicker)視網膜電圖統計。sixko或cko表示gm20541基因敲除純合子小鼠;ctr是指野生型;het是指雜合子。圖7:視網膜前體細胞特異敲除gm20541基因小鼠視網膜切片免疫組化染色結果;小鼠年齡:4個月;os:outer-segment(外節);is:inner-segment(內節);onl:outernuclearlayer(外核層);inl:innernuclearlayer(內核層);圖中:a:視網膜前體細胞特異敲除gm20541基因小鼠視網膜石蠟切片的h&e染色結果,外核層及內核層均變薄;b:對不同部位的gm20541敲除鼠視網膜外核層厚度統計。圖8:視網膜前體細胞特異敲除gm20541基因小鼠ihc染色結果。臨床上平時不易見到的疾病可用動物隨時復制出來。裸鼠動物模型技術

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準備碎冰和。把膜置于甲醇溶液中活化1分鐘,然后轉移至轉膜液中平衡3分鐘后備用。2、轉膜組裝轉膜三明治夾,這一步很關鍵,重要的是膠和膜之間不能有氣泡且膜與膠要保證貼合緊密(否則會翻車),可以加多點轉膜液泡著。組裝好后加滿轉膜液,設置電源參數,我習慣恒流轉膜,200-280毫安,1-2小時,根據分子量定,如50KD的分子用60分鐘就夠了。如果一個電源帶兩個轉膜大槽即四塊膠,我就會用恒壓70-110V。這個過程重要的是做好降溫。這里簡單說一下蛋白分子量與玻璃板厚度,分離膠的濃度,轉膜電源參數的選擇問題。如果是能用1毫米的玻璃板就不用,因為轉膜是在電場的作用下蛋白分子從膠上遷移到膜上,1毫米膠的蛋白遷移距離要比。選擇更薄的膠蛋白轉膜時間可以減少,從而減少發熱,以免膠變形,條帶也會更好看。然后是分離膠的濃度,如果是150—200KD的分子選10%以下的的分離膠,200—300KD的選8%的,300KD以上的選6%的,小于30KD的200mA30分鐘,30-100KD的按分子量的數值算,如70KD,250mA70分鐘;100-150KD的250mA100分鐘;150—300KD的分子轉膜條件用280毫安(以上均是對于,),120分鐘足矣,前提是膠的濃度相適應。五、封閉孵一抗1、封閉轉膜結束后。湖北裸鼠動物模型構建

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