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來源: 發布時間:2021-07-09

外泌體與神經退行性疾病:外泌體可能促進或限制大腦中未折疊和異常折疊的蛋白質的聚集。AD病人腦脊液外泌體中均可檢測到Tau和Aβ蛋白。類似的現象也在PD和ALS疾病中發現。PD病人腦脊液外泌體可檢測到α-synuclein,ALS病人外泌體中也可以檢測到SOD1或TDP-43。外泌體與疾病診斷(應用潛能):外泌體生成機制表明,通過分析外泌體的組分,可以幫助識別其來源的細胞類型。這一特性已被應用于開發心血管疾病,神經系統疾病和一些病癥的分子診斷方法,也在肝腎肺相關疾病中進行研發測試。將沉淀物用PBS緩沖液進行懸浮,使外泌體懸浮于液體上層。超離法是較常用的外泌體純化手段,采用低速離心、高速離心交替進行,可分離到大小相近的囊泡顆粒。北京外泌體提取試劑廠家批發價

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外泌體的提取、分離方法:尺寸排阻色譜法和超濾法;尺寸排阻色譜法是利用分子篩理論,較初是根據蛋白質分子大小分離蛋白質的色譜技術。該方法的主要優點是不需要很大的離心力,從而保證了外泌體的完整性。Mol等[13]對比超高速離心和尺寸排阻色譜法得到的外泌體蛋白,結果顯示,后者得到的外泌體的蛋白豐度高于前者。這些基于過濾或尺寸排阻色譜的新方法為外泌體大規模的生產和臨床應用提供了可能。超濾也是根據外泌體的尺寸將其分離出來的一種方法,超濾一般被認為是外泌體分離過程中的一個準備過程,通過超濾除去大分子和小分子的蛋白質。不過連續的超濾可以分離出外泌體,和超高速離心相比,超濾不需要特殊的設備就可以較短時間內分離出外泌體。但是,超濾膜對外泌體的黏附作用會降低外泌體的產量,并且超濾過程中施加的外力可能會使外泌體變形或者破裂。北京外泌體提取試劑廠家批發價早先應用于從血清等樣本中收集細菌,現在也被用來沉淀外泌體,其原理可能與競爭性結合游離水分子有關。

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外泌體的提取分離:1、超速離心法(差速離心)。超離法是常用的外泌體純化手段,采用低速離心、高速離心交替進行(如圖所示),可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡單,獲得的囊泡數量較多而廣受歡迎,但過程比較費時,且回收率不穩定(可能與轉子類型有關),純度也受到質疑;此外,重復離心操作還有可能對囊泡造成損害,從而降低其質量。2、密度梯度離心。在超速離心力作用下,使蔗糖溶液形成從低到高連續分布的密度階層,是一種區帶分離法。通過密度梯度離心,樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,但步驟繁瑣,耗時。

外泌體(exosome),特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。其主要來源于細胞內內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中?,F已證實可以分泌外泌體的細胞有:肥大細胞、淋巴細胞、樹突狀細胞、瘤細胞、間充質干細胞等。外泌體在免疫中抗原呈遞、瘤的生長與遷移、組織損傷的修復等生理病理上起著重要的作用。同時,不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標志物。細胞外囊泡是蛋白質、mRNA、miRNA和脂質運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介,根據它們的大小和發生分為三類,包括外泌體、微泡和凋亡小體。其中,外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,由多種細胞分泌,內含有特定的蛋白質、脂質、細胞因子或遺傳物質。來源于不同的組織的外泌體不光具有其特異性蛋白分子,而且還包含其行使功能的關鍵分子。外泌體的分離純化一直是科研工作者關注的問題,獲得高純度的外泌體對后續的研究至關重要。

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外泌體在肺病進程中的作用:肺病細胞來源外泌體(LCC-exosome)可以通過刺激一些病癥血管的形成來促進一些病癥的生長。據相關報道稱,LCC-exosome中的miR-210可以通過調節基質細胞中酪氨酸受體激酶A3的含量,促進一些病癥血管的生成;而LCC-exosome中的miR-23a則可以通過啟動脯氨酰羥化酶及壓制緊密結合蛋白ZO-1來促進肺病的生血管作用。此外,有研究發現,外泌體中的內容物可以觸發上皮-間質轉化(EMT)。晚期肺病患者血清中外泌體波形蛋白表達增加,促使人正常支氣管上皮細胞出現EMT,從而使肺支氣管正常上皮細胞出現增殖,遷移能力。色譜法。這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,但是需要特殊的設備,應用不普遍。如何高效地提取外泌體是實現這項新興液體活檢技術臨床常規化應用的關鍵。北京外泌體提取試劑廠家批發價

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外泌體的形成與鑒定:首先,細胞膜內陷形成一個杯狀結構,包括細胞表面蛋白和與細胞外環境相關的可溶性蛋白,導致早期胞內體(early-sortingendosome,ESE)的從頭形成,或者是杯狀結構直接和已經存在的ESEs融合;trans-高爾基體和內質網也能協助形成ESEs。ESE成熟后形成晚期胞內體(late-sortingendosomes,LSEs),較終形成MVBs(也稱為多囊內小體)。MVBs是通過endosome限制膜向內凹(即質膜雙凹)形成的,這一過程導致MVBs含有多個ILVs。MVB可以與溶酶體或自噬體融合,較終降解或與質膜融合釋放作為外泌體的ILVs。外泌體表面蛋白包括四聚體蛋白、整合蛋白、免疫調節蛋白等。外泌體可以包含不同類型的細胞表面蛋白、細胞內蛋白、RNA、DNA、氨基酸和代謝物。使用可截留100KD分子量的膜,通過離心截留上清中的外泌體,截留完成后。北京外泌體提取試劑廠家批發價

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