一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法：膠原蛋白是脊椎動物和無脊椎動物支持結構的主要組成。在人的身體中這是皮膚、筋、軟骨、骨骼及結締組織的較主要的蛋白質。膠原蛋白占人體蛋白質總量的三分之一，不論來源于哪一種動物或哪一種組織的膠原都有許多共同特性。氨基酸組成中約有三分之一為甘氨酸，有脯氨酸和羥脯氨酸。根據其遺傳分子結構遺傳基因的差別，膠原蛋白分為20幾個亞型。但較為常見的為Ι、Π、ΙΙΙ型膠原蛋白，即間質膠原蛋白。其中I型較為豐富且品質優良。I型膠原蛋白分布非常普遍，是主纖維束的主要成分，給結締組織以強度；是較豐富的膠原蛋白類型，尤其是在皮膚真皮、骨、筋和腱中。期間不斷攪拌，防止凍結成塊，得到膠原溶脹液。北京鼠尾膠原廠家推薦

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：三維膠原的制備鼠尾膠原蛋白型在濃度1mg/ml以上，pH左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中，在成膠過程中需要加入0.06體積的0.1mol/LNaOH來中和。需要的溶液（均需要無菌、預冷）10mg/L酚紅用于pH指示）0.1mol/LNaOH，0.1mol/L乙酸(一般不用)，雙蒸水200ul鼠尾膠原蛋白型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中，加入690ulH2O12ul0.1mol/LNaOH12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結）立即混勻。再加入100ul10PBS10培養液，混勻后立即加到培養器皿中(混勻后pH左右，如果PBS或培養液中沒有加酚紅，初次使用時需要用pH試紙測試)。廣州正規鼠尾膠原供應商制備鼠尾膠原：離心，4000轉/分，10-15分鐘。

鼠尾膠原醋酸溶解：1．將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。2．建議將溶液轉移到擰口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動或攪拌。在2-8度中放置過夜。在無菌條件下轉移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經發現該方法會導致丟失蛋白。3．稀釋一定數量的膠原溶液。4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養瓶。在室溫或37度結合數小時或者2-8度過夜。5．從包被表面除去多余的液體。過夜干燥。如果膠原溶液不是無菌的，這時候可以在無菌細胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒。在接種細胞前用無菌的水漂洗。

含細胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）準備好懸浮于培養液的細胞，并放置于冰浴中。將200μL本品加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結），立即混勻。再加入23μL10×PBS或10×培養液，混勻后立即加到培養器皿中（混勻后pH為7左右，如果PBS或培養液中沒有加酚紅，初次使用時需要測定pH值）。加入760μL的細胞懸浮液，混勻后立即加到培養器皿中。將培養器皿在室溫放置20min待膠凝固后，加入適當體積的細胞培養液，轉移到培養箱中培養。本品在室溫下pH中性時可迅速成膠，在操作過程中要盡量保持低溫。保存條件4℃保存，切勿凍存，有效期一年。布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄。

一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法：隨著現代醫學的發展，各種醫用耗材的更新換代也是日新月異。止血材料是常見的醫療器械產品。但是現今市面上的止血材料不光存在著容易引起傷口傳染的缺點；同時還存在著容易與傷口粘附不易去除，導致傷口潰爛，或者因為粘附導致傳染；再次就是止血材料多是通過吸收血液及添加凝血酶等外在因素止血，很少有止血材料是使用能夠自身具有止血性質的材料來生產的。現今市面上的可吸收止血材料有氧化纖維素、α-氰基丙烯酸酯類組織膠、醫用止血明膠等，但是都有各自的缺點。如氧化纖維素可引起組織周圍PH值升高；α-氰基丙烯酸酯類組織膠降解過程中釋放出氰和甲醛等有毒物質；醫用止血明膠黏附性較差，易脫落，因其吸收血液后膨脹可能壓迫傷口周圍組織等。鼠尾膠原醋酸溶解：將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中。南京鼠尾膠原直銷廠家

前庭毛細胞貼附于培養皿底壁，易于封接和長時間（約8h)的觀察和記錄。北京鼠尾膠原廠家推薦

鼠尾膠原備用膠凝程序：1）在冰上放置以下物品：膠原蛋白I、無菌10×PBS、無菌蒸餾水、無菌1MNaOH。2）確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積。3）在冰上放置無菌管以收存膠原蛋白I。4）在無菌條件下執行以下步驟。4.1加入10×PBS（終體積/10）mL4.2計算要使用的膠原蛋白I的體積（不要添加到管中直到步驟4.6為止）終體積x終膠原蛋白I濃度（mg/mL）。4.3向10×PBS溶液中加入（要加入的膠原體積×0.023）mL的無菌冰冷1MNaOH。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無菌冰冷蒸餾水：添加蒸餾水體積=V（終）—V（膠原蛋白）—V(10×PBS）—V（1MNaOH）4.5混合管中的物質并放入冰中。4.6加入膠原蛋白I并計算體積，混勻，冰上備用。5）膠原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小時。6）使用時，無菌條件下將溶液加入到細胞培養裝置中37°C凝膠30min。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便，成本低廉。北京鼠尾膠原廠家推薦

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