轉(zhuǎn)染的注意事項：有血清時的轉(zhuǎn)染血清一度曾被認為會降低轉(zhuǎn)染效率，但只要在DNA-陽離子脂質(zhì)體復合物形成時不含血清，在轉(zhuǎn)染過程中是可以使用血清的。轉(zhuǎn)染過程在兩步中需要使用培養(yǎng)基做為稀釋液：在DNA-陽離子脂質(zhì)體復合物準備過程以及復合物同細胞接觸過程。在開始準備DNA和陽離子脂質(zhì)體試劑稀釋液時要使用無血清的培養(yǎng)基，因為血清會影響復合物的形成。但在復合物形成后，在加入細胞中前可以加入血清。陽離子脂質(zhì)體和DNA的較佳量在使用血清時會有所不同，因此如果你想在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中加入血清需要對條件進行優(yōu)化。大部分細胞可以在無血清培養(yǎng)基中幾個小時內(nèi)保持健康。對于對血清缺乏比較敏感的細胞，可以使用一些營養(yǎng)豐富的無血清培養(yǎng)基，或者在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中使用血清。瞬時表達分析檢測未重組質(zhì)粒DNA上基因的表達。上海細胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家批發(fā)價

細胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個大坑：1.細胞污染細胞污染也是造成細胞死亡，轉(zhuǎn)染效率低下的一大原因。首先，轉(zhuǎn)染細胞用的質(zhì)粒必須保證無菌。而現(xiàn)在市場上的一般的質(zhì)粒提取試劑盒都做不到較全無菌。毛博這里再貢獻一個獨門絕招：將提完質(zhì)粒后或者提的較后一步，用75％乙醇沉淀，這樣就除菌了。2.質(zhì)粒不行轉(zhuǎn)染用的質(zhì)粒首先要保證數(shù)量，一般為2μg以上。質(zhì)粒純度不夠或者含有細菌LPS或其他對細胞有毒害作用的物質(zhì)，也會影響轉(zhuǎn)染效率。這個時候，就應該對質(zhì)粒進行純化和濃縮。北京正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑進貨價表達水平與位臵無關(guān)，不會受到周圍染色體元件的影響。

轉(zhuǎn)染方式：細胞由帶負電荷的磷脂雙分子層構(gòu)成，這對大分子物質(zhì)來說是個不可透過的屏障，比如DNA和RNA的磷酸骨架，其也帶負電荷。為了使核酸穿過細胞膜，研究人員開發(fā)了多種技術(shù)，大致分為三類：化學方法---利用載體分子包被核酸使其呈現(xiàn)中性電荷或正電荷。生物方法---利用基因工程細菌轉(zhuǎn)染非細菌基因到細胞中。物理方法---在細胞膜表面產(chǎn)生一個瞬時的孔從而導入DNA。然而，沒有一種方法適用于所有的細胞和實驗，理想的方法應根據(jù)您的細胞類型和實驗需要進行選擇，理想的方法應具有高轉(zhuǎn)染效率，低細胞毒性和對正常生理學的影響較小，并且易于使用和可重復性等特點。

細胞轉(zhuǎn)染的常用方法：人工脂質(zhì)體法原理：帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物，進而可被細胞內(nèi)吞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染/瞬時性轉(zhuǎn)染。這種方法幾乎適用于所有細胞，轉(zhuǎn)染效率高、重復型好，但轉(zhuǎn)染時需要去除血清，轉(zhuǎn)染效果隨細胞類型變化大。實驗步驟：在單獨試管中分別稀釋核酸及轉(zhuǎn)染試劑→脂質(zhì)體與核酸的磷酸骨架結(jié)合，形成復合物→脂質(zhì)體上的正電荷有助于復合物與細胞膜結(jié)合→復合物通過內(nèi)吞作用進入胞漿→分析細胞瞬時基因表達或沉默情況。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細胞中。

細胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個大坑：1.試劑過期有時候轉(zhuǎn)染效率低下，還要考慮會不會存在試劑過期的情況。毛博當年做轉(zhuǎn)染整整半年，百思不得其解。較后發(fā)現(xiàn)，原來是Lipofectamine2000過期了。換了之后，立馬成功。根據(jù)我的經(jīng)驗，盡量使用開封半年內(nèi)的，因為過了半年后，就算沒有過失效期，但是細胞毒性較大增加，而轉(zhuǎn)染效率卻較大下降。千萬不要為了省錢，影響實驗進度哈。2.未加血清轉(zhuǎn)染后未及時加入血清，會導致細胞大量死亡。一般要在轉(zhuǎn)染后的4-6小時換液且換為有血清的培養(yǎng)基。根據(jù)毛博的經(jīng)驗，其實也可以在原來的無血清培養(yǎng)基里面滴加血清。這個時候，較好不要換液，不要打擾細胞，讓它安安靜靜地休息。但是也不能過早加入血清。過早的話，會引起未轉(zhuǎn)染的細胞瘋狂生長。那么，什么是較佳時機呢？在20%的細胞變圓的時候，就是加血清的較佳時機。脂質(zhì)體可以和帶負電荷的核酸結(jié)合后重新形成復合物。石家莊正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家批發(fā)價

通過實驗優(yōu)化合適的轉(zhuǎn)染條件對于轉(zhuǎn)染效率的提高很重要。上海細胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家批發(fā)價

轉(zhuǎn)染技術(shù)：國際上推出了一些陽離子聚合物基因轉(zhuǎn)染技術(shù)，以其適用宿主范圍廣，操作簡便，對細胞毒性小，轉(zhuǎn)染效率高受到研究者們的青睞。其中樹枝狀聚合物(Dendrimers)和聚乙烯亞胺(Polyethylenimine，PEI)的轉(zhuǎn)染性能較佳，但樹枝狀聚合物的結(jié)構(gòu)不易于進一步改性，且其合成工藝復雜。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子，每相隔二個碳個原子，即每“第三個原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子，使得聚合物網(wǎng)絡在任何pH下都能充當有效的“質(zhì)子海綿”(protonsponge)體。這種聚陽離子能將各種報告基因轉(zhuǎn)入各種種屬細胞，其效果好于脂質(zhì)聚酰胺，經(jīng)進一步的改性后，其轉(zhuǎn)染性能好于樹枝狀聚合物，而且它的細胞毒性低。大量實驗證明，PEI是非常有希望的基因治好載體。目前在設計更復雜的基因載體時，PEI經(jīng)常做為中心組成成分。上海細胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家批發(fā)價