原代細胞轉染實驗要點：轉染過程不可添加物品，否則會導致細胞死亡；開始實驗siRNA的用量設置在終濃度10nM、30nM、50nM、100nM進行摸索，后續實驗根據實驗結果修改。RFectPM可用來轉染siRNA、antisenseRNA、microRNA等200bp以內的小分子RNA和DNA，可轉染絕大多數原代細胞。對于大多數原代細胞，RFectPM的細胞轉染陽性率都在80%以上，而轉染細胞死亡率不到10%。RFectPM的使用也極其簡便，先將sRNA與RFectPM室溫混合，再將siRNA-RFectPM混合物直接加入含培養基的細胞，血清對轉染效果沒有影響，不必刻意添加或更換培養液。用70％的酒精沖洗凍存管，然后擦去多余酒精。開封原代細胞分離試劑盒產品介紹

原代細胞的培養和維持：1.消化培養法2.懸浮細胞培養法對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養，或經淋巴細胞分層液分離后接種培養。3.部位培養部位培養是指從供體取得部位或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環境條件下培養，部位培養可保持部位組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯系、排列情況和相互影響，以及局部環境的生物調節作用。南京原代細胞分離試劑盒生產廠家使用這種方式需注意勿使攪拌速度過快，否則即可使培養液溢出又容易造成污染。

原代細胞培養注意事項：1.收到細胞時，要鏡下觀察是否有污染情況；收到細胞的前幾天，要做好各種倍數的鏡下拍照記錄，以防細胞出現問題后，可以跟公司很好地溝通。2.收到細胞后，不要馬上處理。應置于培養箱中靜置4h以上再操作。如果不著急，可靜置過夜。3.細胞的靠前次傳代，一定要密度高一些傳代，原代細胞傳代密度低，很難長起來。建議1:2-1:3傳代。4.原代細胞傳代時（內皮細胞，貼壁為例），0.25%+0.53nM的胰酶消化，1ml消化液37度培養箱內消化30sec，再加入5ml培養基（正常消化貼壁細胞，我們使用胰酶和培養基的量是1:1，但是原代細胞必須用大量培養基中和胰酶）。5.原代細胞不建議凍存，因為凍存很容易復活不成功。如果要凍存的話，建議在P2或P3代凍存，凍存液中的血清越多越好，建議比例9（血清）:1（DMSO）。6.原代細胞復蘇時，置于37-38度水浴融化細胞，并加入10ml培養液（正常貼壁細胞復蘇時，也可以使用這種比例，復蘇成活率會較大提高），離心重懸鋪板。

原代細胞標準化培養：由于每種原代細胞培養的條件迥異，而且每個實驗室都摸索出自己的培養條件，而對于一個特定的組織塊，所用培養條件不一樣，得出的所需細胞族群就不一樣，因為每種組織塊都含有不同種類的細胞群，而每一種細胞群在所選定的培養條件下（比如所選蛋白分解酶的種類和條件，細胞因子的種類，基礎培養基的種類或者是培養時間長短）都會得出不同的結果。由于各實驗室采取不同的培養條件，即使是同一塊心組織就有可能造成A實驗室獲得30%的心肌細胞，70%其他種類細胞，而B實驗室卻能獲得70%所需心肌細胞，30%為成纖維、脂肪等種類。這樣的話，即使是做同一項目的實驗，就有可能得出相反的科學結論。從而獲得與體內生理功能更接近的數據。

細胞凍存：通常我們不推薦重新凍存原代細胞，因為這可以促進細胞衰老和/或導致功能變化。原代細胞非常敏感，重新凍結可能導致細胞死亡或損傷。與細胞系不同，原代細胞增殖有限，我們建議盡早使用原代細胞進行實驗以防止遺傳漂移，如果你正在使用一個增殖困難的細胞類型，你應該密切監測細胞形態，因為少量混雜的細胞（如成纖維細胞）可能隨著時間的推移，大量生長從而成為主要細胞。正常的原代細胞培養，在無污染的情況下，建議培養基中不加抗體，抗體會影響細胞的某些基因變異從而導致實驗數據有差異，所以cellsystems的細胞在分離提取時就考慮到這點，他們不會采用任何抗體去分離和純化的同時，通過酶消化或者離心洗滌的方法讓細胞達到95%以上的純度，這樣得到的實驗數據更為準確相關研究工作已經揭示了生長培養基必須包含的基本成分。廈門正規原代細胞分離試劑盒哪里買

體外分裂增殖的速度較快，營養成分消耗大，換液時間隔一般較短。開封原代細胞分離試劑盒產品介紹

注意事項：所有相關器皿耗材都應為RNase-free產品，操作過程要小心，帶口罩、手套避免環境中RNA酶污染樣品。RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之間，但這并不表示RNA不純，需電泳檢測。使用時一定要根據自己的實驗需要購買提取試劑盒，如果不是試劑盒，或許能提出RNA，但不能確保其質量以及完整性，會影響RT-PCR、Northernblot、Dotblot、RealtimeRTPCR、芯片分析、polyA篩選、體外翻譯、RNase保護分析、分子克隆等后續實驗的結果。當前提取效果好的是RNA提取試劑盒，但其售價較高，單次實驗費用花費太大，對精度要求不高的實驗沒有必要購買，當然還有其它的進口試劑盒，但是均存在價格高、訂貨周期長的問題（如果碰上國內無貨的時候，要從國外發貨，會等很長一段時間）。普通的提取實驗用國產的試劑盒就足以，價格不高，基本上各地均有現貨，如天根（國內生產的試劑盒中銷售面比較廣的一種）等，其價格比進口試劑盒要便宜許多，且效果還不錯，性價比還可以開封原代細胞分離試劑盒產品介紹