細胞轉染操作方法：轉染，是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉染目前已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例；化學介導方法很多，如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術；生物介導方法，有較為原始的原生質體轉染，和現在比較多見的各種細菌介導的轉染技術。理想細胞轉染方法，應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優點。細菌介導的轉染技術，是目前轉染效率較高的方法，同時具有細胞毒性很低的優勢。在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學介導的轉染方法，則各有其特點。蕪湖細胞高效轉染試劑廠家直銷

細胞轉染實驗的方法有哪些：1..電穿孔法。通過短暫的高電場電脈沖處理細胞，沿細胞膜的電壓差異會導致細胞膜的暫時穿孔。DNA被認為是穿過孔擴散到細胞內的。電脈沖和場強的優化對于成功的轉染非常重要，因為過高的場強和過長的電脈沖時間會不可逆地傷害細胞膜而裂解細胞。理論上說電穿孔法可用于各種細胞，且不需要另外采購特殊試劑，但需要昂貴的電轉儀。此法每次轉染需要更多的細胞和DNA，因為細胞的死亡率高。每種細胞電轉的條件都需要進行多次優化。2.細菌介導的傳染。傳染需要將目的基因克隆到特定的細菌體系中，經過包裝細胞的包裝得到改造后的細菌，再進行傳染。優點是轉染效率特別高，尤其是難以轉染的原代細胞、細胞。缺點是構建細菌周期長，環節多，易出錯，費用也高青島細胞高效轉染試劑廠家重新接種于培養皿或瓶，較好在轉染前4小時換一次新鮮培養液。

細胞轉染效率影響因素：1.細胞密度一般來說，當細胞密度達到60%～80%時進行轉染可以取得較高的轉染效率，過低或過高都會影響轉染效果。2.細胞生長狀態這點非常關鍵，很多時候傳代次數太少或者太多都將導致細胞對轉染試劑敏感度的改變。因此，為了提高轉染效率以及轉染穩定性、降低細胞毒性，應盡量使用適度傳代的細胞系，并在不同次實驗時保持細胞傳代次數的一致性。3.細胞種類不同細胞種類的細胞在做轉染時所需要的轉染體系是不同的，不能一種體系用在所有類型細胞的轉染實驗。

細胞轉染效率低下的幾個大坑：1.準備不足做脂質體轉染的時候，在開展正式實驗前要多做預試驗，優化轉染條件。優化轉染條件包括：脂質體的用量、DNA密度、細胞密度、脂質體和DNA混合孵育時間等等。2.電壓過大做電轉的時候，如果電壓太大，往往會發生細胞大量死亡的情況。不同的細胞，需要的電壓是不一樣的。這就要求我們多做預實驗，多摸索條件。對于大多數細胞來說，其較佳電壓位于250-1250v/cm。另外，就是進行轉染的細胞應該處于對數生長期。處于對數生長期的細胞的抗損傷能力是較強的。細胞濃度應該處于5x106到1x107／mL之間。每次轉染的質粒應該控制在4-6μg，如果﹥10μg，轉染效率也較大降低。能與核酸的磷酸根通過靜電作用，將DNA分子包裹入內。

細胞轉染的原理、操作步驟以及小技巧：一、脂質體(Liposome)轉染方法原理脂質體作為體內和體外輸送載體的工具，已經研究的十分普遍，中性脂質體是利用脂質膜包裹DNA，借助脂質膜將DNA導入細胞膜內。帶正電的陽離子脂質體，DNA并沒有預先包埋在脂質體中，而是帶負電的DNA自動結合到帶正電的脂質體上，形成DNA-陽離子脂質體復合物，從而吸附到帶負電的細胞膜表面，經過內吞被導入細胞。優點:與其它方法相比，有較高的效率和較好的重復性，它適用于把DNA轉染入懸浮或貼壁培養細胞中，是目前條件下較方便的轉染方法之一。對于貼壁細胞，一般要求在轉染前一日，用胰酶處理為單細胞懸液。蘇州正規細胞高效轉染試劑廠家批發價

大部分外源DNA會被核酸酶降解或隨細胞分裂而稀釋。蕪湖細胞高效轉染試劑廠家直銷

細胞轉染常用步驟：1.轉染試劑的準備①將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物。②震蕩后將試劑放在－20攝氏度保存，使用前還需震蕩。2.選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質體體積：DNA質量)來轉染細胞。在一個轉染管中加入合適體積的無血清培養基。加入合適質量的MyoD或者EGFP的DNA，震蕩后在加入合適體積的轉染試劑，再次震蕩。3.將混合液在室溫放置10―15分鐘。4.吸去培養板中的培養基，用PBS或者無血清培養基清洗一次。5.加入混合液，將細胞放回培養箱中培養一個小時。6.到時后，根據細胞種類決定是否移除混合液，之后加入完全培養基繼續培養24－48小時蕪湖細胞高效轉染試劑廠家直銷