細胞凍存液的操作步驟：1.配置含10%DMSO或凡士林、10～20%小牛血清的凍存細胞培養液;2.取對數成長期的體細胞，除去舊細胞培養液，用PBS清理。3.除去PBS，添加適量蛋白酶(遮蓋細胞培養皿表層)把單面生長發育的體細胞消化吸收出來;4.抽濾1000rpm，5min;5.除去蛋白酶，添加適量配置好的凍存細胞培養液，用塑料吸管輕輕地吹打使體細胞勻稱，記數，調整凍存液中體細胞的較后相對密度為5牙周106/ml～1牙周107/ml;6.將體細胞分裝進凍存管中，每管1～1.5ml;7.在凍存管上標出體細胞的名字，凍存時間及作業者;8.凍存：標準的凍存程序流程為減溫速度-1～-2℃/min;當溫度達-25℃下列時，可升至-5℃～-10℃/min;到-100℃時，則可快速滲入液態氮中。也可將配有體細胞的凍存管放進-20℃電冰箱2h，隨后放進-70℃電冰箱中留宿，取下凍存管，移進液氮容器內。度保存的無血清凍存液緩慢加入離心后的細胞沉淀中。寧波無血清細胞凍存液廠家

無血清細胞凍存液用途：1.無血清細胞凍存液用于造血干細胞、間充質干細胞等干細胞的儲存。2.無血清細胞凍存液用于T淋巴細胞、NK細胞等免疫細胞的存儲。3.無血清細胞凍存液用于其他類型哺乳動物細胞的儲存。無血清細胞凍存液產品性能：1.不含牛血清，無動物源組分。傳統的凍存液，一般由胎牛血清、DMSO等組分組成。胎牛血清取自牛，因此，難以應用到需要避免接觸動物源的應用領域。用包括人白蛋白等蛋白組分替代血清的用途，無動物源組分。2.2-8℃即可穩定保存，無需冷凍，即取即用。為了避免反復凍融，傳統的細胞凍存液，需要分裝成小管后置于-20℃環境下保存。無血清細胞凍存液，2-8℃保存即可，無需再進行分裝。上海正規無血清細胞凍存液產品介紹當溫度達-25℃以下時，可增至-5 ℃～-10℃/min。之前。

無血清細胞凍存液：解凍解凍后，應該立即鋪板在預先包被好的培養皿中。上述凍存的一管細胞可以成功的鋪板到6孔板的1-2孔。1.開始之前，提前準備好以下材料：試管，恢復至室溫的培養基，預先包被的培養板，確保整個解凍復蘇程序可以在較短的時間內完成。注意：不要在37°C水浴中加熱培養基。2.在37°C水浴中快速解凍，持續溫和的在水中晃動凍存管，直到剩余少量細胞還處于凍存狀態。3.水浴中取出凍存管，用70%的酒精或異丙醇擦拭除菌。4.用2mL的血清移液管把細胞懸液轉移到一個15mL的錐形試管。注意：用2mL的血清移液管代替1mL的頭可以減少細胞聚集體的分解。

無血清細胞凍存液凍存細胞實驗步驟：選擇凍存處于對數生長期的細胞有助于提高復蘇細胞存活率。1.按照常用方法收集懸浮細胞或貼壁細胞于試管中。2.按照培養細胞密度和所用細胞凍存管的尺寸計算所需凍存細胞數。（參考：5×105至5×106cells/ml）。3.取相當于所需細胞數的細胞懸浮液量，置于離心管中，離心收集培養細胞（參考離心條件：1,000~2,000rpm，4℃，3~5min）。移去離心管中的上清液。4.加入適量的無血清型細胞凍存液于離心管中，使細胞濃度為5×105至5×106cells/ml。緩慢地混合均勻，制成細胞混合液。5.將離心管中的細胞混合液分裝于已標示完全的冷凍保存管中。6.直接將含細胞混合液的凍存管放入-80℃冰箱，長期冷凍保存。7.若研究者需要液氮保存時，可將完全凍結的凍存管（放入-80℃冰箱后至少一晝夜）移至-196℃液氮罐。將分裝好的細胞凍存管，直接置于-80 度冰箱過夜保存。

細胞凍存注意事項：1、細胞貼壁少的問題：教科書中說明凍存細胞解凍時1ml細胞液要加10ml－15m培養液，而在我的試驗中的經驗總結為培養基越少細胞越容易貼附。2、復蘇細胞分裝的問題：試驗中我的經驗總結為復蘇1管細胞一般可分裝到1-2只培養瓶中，分裝過多，細胞濃度過低，不利于細胞的貼壁。3、加培養基的量放入問題：這個量的多少的把握主要涉及到的問題是DMSO的濃度，從如果你加培養基的太少，那么DMSO的濃度就會比較大，就會影響細胞生長，從以前的資料來看，DMSO的濃度在小于0.5%的時候對一般細胞沒有什么影響，還有一個說法是1％。所以如果你的凍存液的濃度是10％DMSO的話那么加10ml以上的培養基就恰好稀釋到了無害濃度含血清，細胞污染(細菌、霉菌和支原體等)的風險更高。廈門珠海無血清細胞凍存液

無血清凍存液用途：細胞保藏中心，無血清細胞凍存液用于細胞株的長期保存。寧波無血清細胞凍存液廠家

凍存細胞注意事項：冷凍保護劑可降低培養基的冰點，并可減緩冷卻速度，較大降低冰晶形成的危險(冰晶可損傷細胞，導致細胞死亡)。注：DMSO可促進有機分子進入組織。操作含DMSO的試劑時，應采用與此類物質安全危害相適應的設備和操作規范，并應按照當地法規處置此類試劑。建議可使用廠商生產的無血清細胞凍存液，使用方便，復蘇率高。注意冷凍保護劑DMSO的品質：DMSO應為試劑級等級，無菌且無色，以5-10ml小體積分裝，4℃避光保存，勿作多次解凍寧波無血清細胞凍存液廠家