細胞轉染實驗簡介：實驗原理外源基因進入細胞主要有四種方法：電擊法、磷酸鈣法和脂質體介導法和細菌介導法。電擊法是在細胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質粒進入;磷酸鈣法和脂質體法是利用不同的載體物質攜帶質粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進入細胞;細菌法是利用包裝了外源基因的細菌傳染細胞的方法使得其進入細胞。但是由于電擊法和磷酸鈣法的實驗條件控制較嚴、難度較大;細菌法的前期準備較復雜、而且可能對于細胞有較大影響;所以現在對于很多普通細胞系，一般的瞬時轉染方法多采用脂質體法~一類是瞬時轉染，一類是穩定轉染（很長轉染）。深圳正規細胞高效轉染試劑哪家好

細胞轉染實驗簡介實驗步驟：1、細胞傳代(1)試驗準備：200ul/1mlTip頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號筆，培養皿，離心管。(2)棄掉培養皿中的培養基，用1ml的PBS溶液洗滌兩次。(3)用Tip頭加入1mlTrypsin液，消化1分鐘(37。C，5%CO2)。用手輕拍培養瓶壁，觀察到細胞完全從壁上脫落下來為止。(4)加入1ml的含血清培養基終止反應。(5)用頭多次吹吸，使細胞完全分散開。(6)將培養液裝入離心管中，1000rpm離心5min。(7)用培養液重懸細胞，細胞計數后選擇0.8X106個細胞加入一個35mm培養皿。(8)將合適體積完全培養液加入離心管中，混勻細胞后輕輕加入培養皿中，使其均勻分布。(9)將培養皿轉入CO2培養箱中培養，第二天轉染。貴陽細胞高效轉染試劑廠家直銷通過緩沖液的作用以及脂質與內體膜融合，增大內體的內部滲透壓。

如何提高細胞轉染實驗效率：優化細胞生長狀態密切觀察您的細胞;確保它們狀態良好。在開始轉染細胞之前，先制定一個適當的種板方案，使細胞密度從轉染開始到結束都保持較佳狀態。增加成功幾率—細胞是轉染過程中的一個關鍵元素，它可以是影響結果的一致性和質量的較重要的變量。此外，還常用促有絲分裂刺激物(如，細菌轉化，生長因子，條件培養基，以及滋養細胞)來活化原代培養細胞。貼壁細胞相比較懸浮細胞—在轉染效率方面貼壁細胞和懸浮細胞之間的差異明顯。天生趨于懸浮的細胞(如HL60，Jurkat)非常難以轉染。相反，天生為貼壁的細胞(如HEK，CHO)則可適應懸浮生長的條件。

具有細胞毒性極低、轉染后細胞存活率高，生成可信任的生理學相關數據。2.操作簡便、節省時間，只需對X-tremeGENE9DNA轉染試劑進行簡單稀釋，再與質粒DNA共同孵育，即可直接向細胞添加反應混合物(有無血清均可)。3.對于常用細胞無需進行費時費力的優化工作。X-tremeGENEHPDNA轉染試劑簡介：X-tremeGENEHPDNA轉染試劑是一種高效的無動物源成分的低毒轉染試劑，兼容含血清或不含血清的培養基，可用于轉染各類真核細胞(包括昆蟲細胞)以及多種難轉染細胞系。優勢：瞬時轉染的細胞中，外源基因得以表達但它們并不會整合到細胞的基因組中。

細胞轉染效率低下的幾個大坑：1.不注意細節在轉染之前更換一次37℃預溫的培養基，可提高轉染效率。脂質體和DNA/RNA混合物應當一滴一滴地滴下來，從培養皿一邊滴到另一邊，邊滴邊輕搖培養皿，以確保均勻分布和避免局部高濃度。這些都是一些細枝末節，但是，如果不注意的話，也會造成轉染效率低下。2.細胞狀態不好細胞狀態不好，會導致轉染效率低下。一般進行轉染的細胞應該處于對數生長期。如果是貼壁細胞的話，貼壁率應該在70-80%；如果是懸浮細胞的話，應該是6X105個/孔（24孔板），一般是轉染前現在換液，轉染前用無血清培養基或PBS洗細胞一次。轉染的整個過程都不應該有物品。瞬時轉染與穩定轉染常規轉染技術根據基因表達時間的長短可分為兩大類。深圳正規細胞高效轉染試劑哪家好

瞬時表達分析所需的人力和時間比穩定表達少。深圳正規細胞高效轉染試劑哪家好

細胞轉染實驗的方法有哪些：1.電穿孔法。通過短暫的高電場電脈沖處理細胞，沿細胞膜的電壓差異會導致細胞膜的暫時穿孔。DNA被認為是穿過孔擴散到細胞內的。電脈沖和場強的優化對于成功的轉染非常重要，因為過高的場強和過長的電脈沖時間會不可逆地傷害細胞膜而裂解細胞。理論上說電穿孔法可用于各種細胞，且不需要另外采購特殊試劑，但需要昂貴的電轉儀。此法每次轉染需要更多的細胞和DNA，因為細胞的死亡率高。每種細胞電轉的條件都需要進行多次優化。2.細菌介導的傳染。傳染需要將目的基因克隆到特定的細菌體系中，經過包裝細胞的包裝得到改造后的細菌，再進行傳染。優點是轉染效率特別高，尤其是難以轉染的原代細胞、細胞。缺點是構建細菌周期長，環節多，易出錯，費用也高深圳正規細胞高效轉染試劑哪家好