細胞轉染常用步驟：1.轉染試劑的準備①將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物。②震蕩后將試劑放在－20攝氏度保存，使用前還需震蕩。2.選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質體體積：DNA質量)來轉染細胞。在一個轉染管中加入合適體積的無血清培養基。加入合適質量的MyoD或者EGFP的DNA，震蕩后在加入合適體積的轉染試劑，再次震蕩。3.將混合液在室溫放置10―15分鐘。4.吸去培養板中的培養基，用PBS或者無血清培養基清洗一次。5.加入混合液，將細胞放回培養箱中培養一個小時。6.到時后，根據細胞種類決定是否移除混合液，之后加入完全培養基繼續培養24－48小時是目前實驗室較方便的轉染方法之一，其轉染率較高，優于磷酸鈣法。合肥成都細胞高效轉染試劑

轉染技術：國際上推出了一些陽離子聚合物基因轉染技術，以其適用宿主范圍廣，操作簡便，對細胞毒性小，轉染效率高受到研究者們的青睞。其中樹枝狀聚合物(Dendrimers)和聚乙烯亞胺(Polyethylenimine，PEI)的轉染性能較佳，但樹枝狀聚合物的結構不易于進一步改性，且其合成工藝復雜。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子，每相隔二個碳個原子，即每“第三個原子都是質子化的氨基氮原子，使得聚合物網絡在任何pH下都能充當有效的“質子海綿”(protonsponge)體。這種聚陽離子能將各種報告基因轉入各種種屬細胞，其效果好于脂質聚酰胺，經進一步的改性后，其轉染性能好于樹枝狀聚合物，而且它的細胞毒性低。大量實驗證明，PEI是非常有希望的基因治好載體。目前在設計更復雜的基因載體時，PEI經常做為中心組成成分。南京細胞高效轉染試劑直銷廠家大部分外源DNA會被核酸酶降解或隨細胞分裂而稀釋。

細胞電轉染實驗的幾點建議：1.電場強度要合適合適的電場強度對于電轉染實驗非常重要，電場強度不能過高，過高會增加細胞的死亡率；也不能過低，過低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同細胞系具有不同的較佳場強值，實驗前應測定所轉染細胞系的較佳電場強度。2.細胞狀態要好用于電轉的細胞一般選取處于對數生長期的細胞（15代以內，傳代后2d）。因為處于對數生長期的細胞分裂旺盛，表面結構致密比穩定期的細胞差，電轉后，細胞膜的恢復能力強，而且處于有絲分裂期的細胞更容易接受外源DNA~

細胞轉染的注意事項：物品(PS)物品，比如青霉素和鏈霉素，是影響轉染的培養基添加物。這些物品一般對于真核細胞無毒，但陽離子脂質體試劑增加了細胞的通透性，使物品可以進入細胞。這降低了細胞的活性，導致轉染效率低。所以，在轉染培養基中不能使用物品，甚至在準備轉染前進行細胞鋪板時也要避免使用物品。這樣，在轉染前也不必潤洗細胞。對于穩定轉染，不要在選擇性培養基中使用青霉素和鏈霉素，ICIN選擇性物品的競爭性克制劑。另外，為了保證無血清培養基中細胞的健康生長，使用比含血清培養基更少的物品量一類是瞬時轉染，一類是穩定轉染（很長轉染）。

細胞轉染的注意事項：血清A、DNA-陽離子脂質體復合物形成時不能含血清，因為血清會影響復合物的形成。B、一般細胞對無血清培養可以耐受幾個小時沒問題，轉染用的培養液可以含血清也可以不加，但血清一度曾被認為會降低轉染效率，轉染培養基中加入血清需要對條件進行優化。C、對于對血清缺乏比較敏感的細胞，可以使用營養豐富的無血清培養基，或者在轉染培養基中使用血清。對血清缺乏比較敏感的貼壁細胞，建議使用**轉染試劑。有條件的話，可以用無血清培養基代替PBS洗細胞兩遍，注意洗的時候要輕，靠邊緣緩緩加入液體，然后不要吹吸細胞而是轉動培養板讓液體滾動在細胞表面。如果洗的太厲害，細胞又損失一部分，加了脂質體后，細胞受影響就更大了，死亡細胞會增多直到外源基因在細胞分裂過程中因各種因素丟失為止。深圳正規細胞高效轉染試劑進貨價

對于原代細胞，可用促有絲分裂刺激物進行細胞活化。合肥成都細胞高效轉染試劑

細胞轉染效率低下的幾個大坑：1.準備不足做脂質體轉染的時候，在開展正式實驗前要多做預試驗，優化轉染條件。優化轉染條件包括：脂質體的用量、DNA密度、細胞密度、脂質體和DNA混合孵育時間等等。2.電壓過大做電轉的時候，如果電壓太大，往往會發生細胞大量死亡的情況。不同的細胞，需要的電壓是不一樣的。這就要求我們多做預實驗，多摸索條件。對于大多數細胞來說，其較佳電壓位于250-1250v/cm。另外，就是進行轉染的細胞應該處于對數生長期。處于對數生長期的細胞的抗損傷能力是較強的。細胞濃度應該處于5x106到1x107／mL之間。每次轉染的質粒應該控制在4-6μg，如果﹥10μg，轉染效率也較大降低。電擊后，應該將DNA和細胞混合液在室溫下放置10分鐘，使細胞恢復損傷。合肥成都細胞高效轉染試劑