一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法：1.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸溶液溶解沉淀物，成透明澄清黏稠溶液；在冰水浴中，調(diào)節(jié)pH=6.5，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出，4°C沉淀10小時，去除上清液，去除上清液，絮狀溶液高速冷凍離心處理，收集沉淀；2.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸再次溶液溶解沉淀物，成透明澄清黏稠溶液，冰水浴中，調(diào)節(jié)PH=6.5;溶液依次通過陽離子交換樹脂、陰離子交換樹脂進行脫鹽處理；(8)將脫鹽后的膠原蛋白溶液，-40至-20°C預(yù)凍2?4小時，然后真空冷凍干燥，凍干產(chǎn)品經(jīng)進一步處理得到含水率在3%以下的膠原蛋白微粉，滅菌、包裝，得到成品膠原蛋白粉末。建立利用自制的鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細胞的方法。南京廣州鼠尾膠原

鼠尾膠原在心肌細胞氧化損傷中的保護作用：兩組培養(yǎng)皿中，隨著過氧化氫濃度的增高，均可見細胞凋亡狀態(tài)明顯加重，細胞存活率及細胞內(nèi)過氧化氫活力明顯下降，細胞凋亡率及細胞內(nèi)丙二醛水平明顯增高，Bcl-2/Bax比值明顯降低，呈劑量依賴性。而在相同濃度過氧化氫誘導(dǎo)下，與對照組相比，實驗組細胞凋亡狀態(tài)明顯減弱，細胞存活率、超氧化物歧化酶活力及Bcl-2/Bax比值增高，細胞凋亡率和丙二醛水平明顯減低。表明鼠尾膠原對過氧化氫所致的心肌細胞氧化損傷具有保護作用，其機制可能與提高超氧化物歧化酶活力，減少丙二醛產(chǎn)生及提高Bcl-2的表達有關(guān)。南京廣州鼠尾膠原鼠尾膠原醋酸溶解：稀釋一定數(shù)量的膠原溶液。

利用鼠尾Ⅰ型膠原構(gòu)建與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料。方法通過醋酸酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原蛋白，并重構(gòu)成膠原纖維。然后，將重構(gòu)后的膠原纖維放置在礦化液中模仿骨生物礦化2～6d，通過透射電子顯微鏡和電子衍射觀察骨生物礦化。結(jié)果酸解提取的鼠尾Ⅰ型膠原蛋白能夠重構(gòu)成膠原纖維，并且具有特征性的D-Band結(jié)構(gòu)。透射電子顯微鏡和電子衍射顯示：礦化2d后，羥基磷灰石鈣前體滲入膠原纖維，膠原纖維部分礦化；礦化6d后，膠原纖維內(nèi)部完全礦化，形成Ⅰ型膠原蛋白/羥基磷灰石鈣的仿生骨材料。結(jié)論利用酸解法提取的鼠尾Ⅰ型膠原蛋白可以重構(gòu)成膠原纖維，經(jīng)礦化可形成與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)一致的仿生骨材料。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便，成本低廉。

一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法：一般的生物體中提取的膠原蛋白多為混合型，之前多從牛皮、豬皮、牛腱中提取，但這類膠原蛋白不光有油脂等其他雜質(zhì)，也存在著II型及其他一些膠原蛋白亞型；同時，這種畜牧業(yè)大量飼養(yǎng)的動物存在著例如瘋牛病等一些生物性疾病及病毒傳染，如果用此開發(fā)醫(yī)用產(chǎn)品更加存在著品質(zhì)的不穩(wěn)定及潛在的風(fēng)險及危害；再次，人的真皮中主要含有I型和III型，但III型不易大量獲得，故應(yīng)用單一的I型膠原蛋白是解決體外應(yīng)用的醫(yī)用產(chǎn)品引起的抗原性問題的關(guān)鍵，這也是I型膠原蛋白抗原性低的原因之一。同時，I型膠原蛋白的三重螺旋的氨基酸結(jié)構(gòu)決定了它的一些特有的性能，如機械性能、促進細胞生長、弱抗原性、可生物降解性和膠原的自締合性。一種基于鼠尾膠原蛋白：根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料。

詳細步驟如下：1.75％酒精浸泡大鼠尾巴30min；2.將尾巴剪開、去掉皮毛，并剪成小段（3cm左右），抽出銀色的尾鍵；3.把剪碎的尾鍵置于150ml，0.1％消過毒的醋酸中，4℃放置，并不時振蕩；4.48h后取上清，4000轉(zhuǎn)離心30min后，取上清；5.分裝上清（鼠尾膠）4度（或-20度）保存。有時可繼續(xù)向4。中沉淀中加入10－20ml醋酸，重復(fù)以上步驟，以制備更多的鼠尾膠。在使用時，先將冰存的膠原液在室溫下解凍，再按以下步驟包被培養(yǎng)器皿：1）用吸管吸取膠原液，在無菌的培養(yǎng)器皿的生長面內(nèi)壁上均勻地涂上薄薄的一層膠原溶液。2）若包被的是培養(yǎng)瓶，可向培養(yǎng)瓶通入氨氣或用浸有氨水的棉球封口片刻。讓氨氣充入瓶內(nèi)后，即可旋緊瓶蓋或塞緊瓶塞。若為培養(yǎng)皿或板的話，可將培養(yǎng)皿或板放在已消毒的飯盒內(nèi)，將浸有氨水的棉球放入飯盒內(nèi)，蓋緊飯盒蓋，四周用封口膠封死。通常情況下骨質(zhì)總量中的鈣、鎂、磷等無機物質(zhì)光占總量的百分之幾而膠原蛋白等有機物質(zhì)卻要占超過80%。南京廣州鼠尾膠原

制備鼠尾膠原：吸去生理鹽水，將尾腱稱重（0.5-1克）。南京廣州鼠尾膠原

鼠尾膠原實驗應(yīng)用：鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細胞中的應(yīng)用。目的：建立利用自制的鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細胞的方法。方法:制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細胞的效果。結(jié)果：自制的鼠尾膠原能正常地培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細胞，細胞角蛋白18表達陽性，免疫組織化學(xué)結(jié)果和掃描電鏡證實所培養(yǎng)的細胞具有典型的分泌上皮細胞特征。結(jié)論：成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細胞的方法，并且制作簡便,成本低廉。南京廣州鼠尾膠原