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上海石家莊RNA提取試劑

來源: 發布時間:2024-11-04

RNA提取試劑注意事項:1、必須戴一次性手套操作,且盡量不要對著RNA樣品說話,以防RNA酶污染。建議戴一次性口罩操作。2、TRIReagent含有毒物質苯酚,避免接觸皮膚或吸入。為防止濺入眼睛,請戴防護眼鏡或使用透明保護屏。如皮膚接觸TRIReagent,請立即用大量去垢劑和水沖洗,如仍有不適,請聽取醫生意見。3、TRIReagent抽提總RNA的同時,理論上也可抽提蛋白和DNA,但未經測試。4、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。是基于異硫氰酸胍/苯酚法的一種即用的從細胞和組織中提取總RNA的試劑,在樣品裂解或勻漿過程中取出水相,用異丙醇可沉淀回收RNA;中間層用乙醇沉淀可回收DNA;有機相用異丙醇沉淀可回收蛋白。植物RNA提取試劑產品特點:RNA純度更高,無雜質殘留,特別適合于對純度要求很高的下游實驗。上海石家莊RNA提取試劑

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酵母RNA的提取方法:稀堿法是屬化學破壁法,其方法是在一定堿濃度下,使構成細胞壁的蛋白質、脂肪及糖的化合物得到水解,從而破壞細胞壁,此法對堿的濃度及提取溫度要求比較嚴格,堿的濃度不可過濃,應控制在1%,并且對提取溫度也有一定的要求,提取時間短。因為在過分劇烈的條件下,容易使核糖核酸分子內的酯鍵斷裂,使核糖核酸降解而影響收得率。酵母菌作為重要的模式生物,是遺傳學和分子生物學的重要研究材料。由于酵母菌的細胞壁成分復雜,且較原核生物厚,難于破碎,因此酵母菌總RNA的抽提純化要比原核生物總RNA的抽提純化困難的多。如何有效地破碎細胞壁并保證RNA的完整性,是獲得高質量酵母菌總RNA的關鍵問題。總RNA的提取方法還有很多,如Trizol法、異硫氰酸胍法、十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)法、尿素法、十二烷基硫酸鈉(SDS)法、熱硼酸鹽法等,這些方法各有優缺點,不同的方法適用于不同類型的材料。南京正規RNA提取試劑進貨價rRNA是組成核糖體的組分,是蛋白質合成的工作場所。

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RNA提取:預備工作(1)塑料制品:盡量使用一次性無菌塑料制品。已標明RNase-free的塑料制品,如沒有開封使用過,通常不必再處理。處理的步驟如下:O在玻璃燒杯中注入去離子水,加入DEPC使其終濃度為0.05%~0.1%(DEPC-H2O)。(DEPC二乙基焦碳酸酯為活性很強的劇毒物,須在通風櫥中小心使用)O將待處理的塑料制品放入一個可以高溫滅菌的容器中,注入DEPC-H2O,使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中,在通風柜中37℃或室溫下處理過夜。O將DEPC-H2O小心倒入廢液瓶中,將裝有DEPC-H2O處理過的塑料制品的容器以鋁箔封口,高溫高壓蒸汽滅菌至少30分鐘。O滅菌塑料制品烘烤干燥,置潔凈處備用。(2)玻璃和金屬物品250℃烘烤3小時以上。

酵母RNA的提取方法:濃鹽法。酵母菌外層是厚達1.2μm的細胞壁,其化學成分是葡聚糖(30-40%)和甘露聚糖(30%),此外,脂類8.5-13.5%,蛋白質6-8%,還含有幾丁質,酵母菌的葡聚糖,分子是為240000道爾頓,是一種分枝聚合物,葡聚糖與甘露糖之間由蛋白質維系起來。近10%的甘露聚糖的側鏈通過磷酸二酯鍵與磷酸邊接,所有這些連接方式都使得酵母提取物首要的也是關鍵的是如何破壞細胞壁。破壁方法有自溶破壁、酶法破壁等多種方法,而用高濃度鹽溶液處理,同時加熱,以改變細胞的通透性,就可以使核酸從細胞內釋放出來。由于RNA鈉鹽易溶于水,在含鹽的菌體溶液中,RNA有較高的溶解度,這樣,通過控制溫度使蛋白質變性沉淀,通過離心將RNA及蛋白質和脫核酵母菌體分離,從而達到提取之目的。其中食鹽起到自溶促進劑,以及防腐與脫臭的作用。在裂解液上游加入酶裂解步驟(如蛋白酶 K、溶菌酶等)。

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總RNA提取試劑試劑能促進不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,可見許多介于7kb和15kb之間不連續的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),兩條優勢核糖體~5kb(28S)和~2kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間(tRNA,5S)。當抽提的RNA用TE稀釋時其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,28S的位置大約在2kb,18S大約在1kb的位置,不同濃度的凝膠位置變化較大。注意事項:樣品用總RNA提取試劑勻漿后,如果不即刻加入氯仿之前,置于-70°C下可放置一個月以上。保存在75%乙醇中的RNA沉淀,2-8°C可以保存一周,-20°C條件下可以保存1年。RNA半衰期比較短,容易降解,建議提取后盡快進行后續實驗,如反轉錄成cDNA,NorthernBlot等。再采集樣本之后馬上加入 DNA/RNA Shield,可以快速降解掉 RNase 等蛋白物質。上海石家莊RNA提取試劑

一個核糖核苷酸分子由磷酸,核糖和堿基構成。上海石家莊RNA提取試劑

游離RNA(或稱循環RNA,cell-freeRNA,簡稱cfRNA),即存在于細胞外的轉錄產物,包括mRNA和RNA,在人的多種體液中被普遍研究并成為疾病無創性診斷和研究的新分子標志物。文獻總結了以下兩個方面,一方面游離RNA主要來源于tumour細胞,另一方面tumour細胞來源有凋亡、壞死、主動釋放三種機制,目前認為以凋亡為主。游離RNA的生物學特征:游離RNA的結構RNA相對DNA而言,更易被普遍存在的核糖核酸酶所降解,而且病癥患者血清中含有更高濃度的核糖核酸酶,病癥患者血清中以RNA-蛋白脂復合物化學組成來保護RNA,半衰期大約為2天。本試劑盒采用獨特的配方和添加劑,能高效的分離血清、血漿及其它無細胞體液等樣品中分離出游離的RNA,另外本試劑還可以有效地壓制各種外源性和內源性的RNA酶,同時結合特制的純化柱,能較大限度的保持RNA的完整性、高得率以及純度,并能保留小RNA,為需要進行小RNA研究,如RNA的用戶提供了強有力的工具。上海石家莊RNA提取試劑

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