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來源: 發布時間:2025-05-30

鼠尾膠原:鼠尾膠原是一種天然培養基和一種天然的黏附劑。實驗設備及材料:大鼠尾巴、剪刀、鑷子、止血鉗、彎頭吸管、平皿、三角燒瓶、燒杯、量筒、天平、生理鹽水、75%酒精、0.1%醋酸溶液、蓋玻片、培養瓶、鉆石筆、鼠尾膠原。實驗內容:1、制備鼠尾膠原(兩個同學一組操作)。2、切割小玻片。3、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養瓶內。制備鼠尾膠原:1、取大鼠尾巴洗凈,75%酒精浸泡5分鐘;2、手持尾巴,用止血鉗夾住鼠尾的,折斷尾骨后拉出尾腱;3、將尾腱剪斷置于平皿中,生理鹽水浸泡;4、重復步驟2、3,直至尾腱量夠用;5、吸去生理鹽水,將尾腱稱重(0.5-1克);6、將尾腱置于平皿內剪碎,轉移至三角燒瓶中;7、按每克尾腱50ml的比例,加入0.1%醋酸溶液;8、搖晃,使尾腱分散于醋酸溶液中,4℃放置一星期;9、離心,4000轉/分,10-15分鐘;10、吸取上清,分裝成小瓶,4℃保存。前庭毛細胞貼附于培養皿底壁,易于封接和長時間(約8h)的觀察和記錄。太原鼠尾膠原廠家直銷

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鼠尾膠原蛋白耗子尾汁還能變得更加,一種被稱作鼠尾膠原蛋白的“珍貴”液體就來自大鼠的尾巴,制作過程需要經歷醋酸抽提、氯化鈉沉淀和磷酸氫二鈉沉淀等步驟,才能從鼠尾中獲得珍貴的膠原蛋白。這種膠原蛋白在37℃的條件下會形成3股螺旋結構,可以用來當作細胞培養的基質。細胞培養過程中,細胞需要貼附在培養皿表面(懸浮培養細胞除外)才能完成生長過程,而有一些細胞卻總是不太給力,自己完成不了貼壁過程或者貼壁困難,這個時候鼠尾膠原蛋白就能承擔起讓細胞更容易貼壁的作用。這一步也被稱作涂層(coating),給培養皿涂上了一層膠原蛋白后,細胞就能更好地貼附上去,除了培養皿,一些需要使用海藻碳酸鈣微球培養得細胞,同樣也可以用鼠尾膠原蛋白協助細胞貼壁生長。鼠尾膠原使用溶解有一定比例胃蛋白酶的酸溶液對初步處理的鼠尾腱進行酶解。

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I型鼠尾膠原是借鑒NavneetaRajan,JasonHabermehl法,經過乙酸抽提、離心、滅菌、透析等步驟制備得到的高純度、高活性膠原蛋白,屬于醫藥級別產品,可用于包被細胞培養器皿(單分子層包被),適合多種類型細胞的貼壁如肝臟細胞、神經節細胞、胚胎細胞、肌細胞、肺細胞、神經鞘細胞等。I型膠原蛋白包被細胞培養板,規格為6/24孔板,表面經I型膠原蛋白包被,可以很好的降低蛋白質的吸附。使用這種細胞培養板培養細胞,可以獲得良好的細胞貼壁率,細胞增殖速度快,形態均一,細胞培養成功率高。

鼠尾Ⅰ型膠原:組裝液的配置:1.50mmol/L甘氨酸+200mmol/L氯化鉀100mL,用1mol/L氫氧化鈉調節酸堿度至9.2。2.膠原纖維的重構吸取膠原10μL至小培養皿中,倒入0.5mL自組裝液,室溫放置20min。予自組裝液自組裝24h。吸取0.05%戊二醛2mL至小培養皿中,將自組裝24h的膠原浸泡在戊二醛中。然后將膠原經去離子水、50%乙醇、100%乙醇依次漂洗后進行TEM觀察。3.生物礦化形成仿生骨材料靜滴配置鈣磷礦化液將25mL鈣液(10mmol/L二水氯化鈣+150mmol/L氯化鈉+50mmol/L三羥甲基氨基甲烷+0.02%三氮化鈉)倒入燒杯中,滴入聚丙烯(PAA)至濃度350μg/mL;滴加1mol/L的氯化氫,調節酸堿度至7.4,然后緩慢滴入25mL磷液(6mmol/L磷酸氫二鈉),約16滴/min。生物醫用鼠尾膠原蛋白的提取方法,采用酸法與酶法相結合的工藝,保持恒低溫無菌的環境。

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鼠尾膠原實驗應用:鼠尾膠原在原代培養耳蝸血管紋邊緣細胞中的應用。目的:建立利用自制的鼠尾膠原培養大鼠耳蝸邊緣細胞的方法。方法:制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養出大鼠耳蝸邊緣細胞的效果。結果:自制的鼠尾膠原能正常地培養出大鼠耳蝸邊緣細胞,細胞角蛋白18表達陽性,免疫組織化學結果和掃描電鏡證實所培養的細胞具有典型的分泌上皮細胞特征。結論:成功建立了利用自制鼠尾膠原培養大鼠耳蝸邊緣細胞的方法,并且制作簡便,成本低廉。膠原蛋白是脊椎動物和無脊椎動物支持結構的主要組成。武漢正規鼠尾膠原推薦廠家

將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中,制備成濃度為0.1%的溶液。太原鼠尾膠原廠家直銷

鼠尾膠原包被培養板:胎干細胞在體外可誘導分化為血管內皮細胞,進而形成血管,因而成為血管組織工程理想的種子細胞來源之一。目的:探討建立定向誘導人胚胎干細胞向血管內皮細胞分化的方法。方法:在小鼠胚胎成纖維細胞飼養層上培養人胚胎干細胞H1,將H1細胞團塊轉移到鼠尾膠原包被的培養板,貼壁24-48h后,培養基換為含不同輔助因子和內皮細胞生長添加劑的EGM-2內皮細胞培養基。結果與結論:①在EGM-2內皮細胞培養基誘導下,細胞逐步表達內皮細胞特異性標記基因VEGFR-2、PECAM1、vWF、CD34、VE-cadherin、GATA-2。②分化細胞表達內皮細胞特異性標記VE-cadherin、CD31。③分化細胞具有吞噬低密度脂蛋白功能。說明將人胚胎干細胞接種在鼠尾膠原包被培養板上,通過EGM-2內皮培養體系誘導,可直接分化為功能性血管內皮細胞。為研究胞外基質對誘導胚胎干細胞血管內皮細胞分化的作用以及相關信號分子機制打下了基礎。太原鼠尾膠原廠家直銷

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