無血清細胞凍存液的使用方法及注意事項：1.將分裝好的細胞凍存管，直接置于-80 度冰箱過夜保存，次日投入液氮中保存即可 備注：1、凍存過程中，第2 步在冰袋附近操作時，低溫避免保護劑對細胞造成損傷。 2、細胞凍存管一定要保證完全密封，否則在復蘇過程中有可能會炸 （1）提前開啟水浴鍋，溫度調節到37（2）將凍存的細胞冷凍管從液氮中取出，迅速置于水浴鍋中融化，盡量1min 融化，時間越短，對細胞影響越小。（3）將融化后的含細胞的冷凍保存液迅速析出置于新鮮培養基中充 分混勻，（如細胞冷凍保存液為500ul，則加入到5ml 新鮮培養基中， 如細胞冷凍保存液位1ml，則加入10ml 新鮮培養基中。）（4）混勻后立即離心，800 轉，3min 即可離心結束后棄上清，加入預溫的新鮮培養液。（5）混勻后分瓶置于二氧化碳培養箱中培養。（二氧化碳濃度根據培 養基要求決定，通常為5%【注意事項】細胞系 凍存密度 備注 正常人成纖維細胞 1～310 cells/ml雜交瘤細胞 1～310 cells/ml某些hybridoma 會因冷凍濃度 太高而在解凍24小時后死去。無血清細胞凍存液：降低細胞外溶液的電解質濃度，減少陽離子進入細胞的數量。杭州無血清細胞凍存液哪里買

無血清細胞凍存液：產品優勢：1.化學成分明確，無任何外源蛋白和血清，適用于各類動物細胞株凍存。 2.無需程序降溫，細胞復蘇率90%以上。 3.凍存細胞可直接存放于-80℃冰箱，穩定保存數年。 4.即用型產品，4℃可穩定保存。細胞凍存：1.收集融合率>90%的對數期的貼壁細胞或者懸浮細胞于離心管中。2.1000 rmp離心5分鐘，去除離心管中的上清液，收集細胞沉淀。3.加入適量細胞凍存液于離心管中，使細胞濃度為1x106～1x107 cells/mL。頭輕柔吹打混勻,Z成細胞懸液。4.將離心管中的細胞懸液分裝與細胞凍存管中，每管1mL或1.5mL。5.將分裝好的細胞直接凍存于-80℃冰箱中，可穩定凍存數年。6.如若長期保存，可在次日轉移至液氮中。無錫正規無血清細胞凍存液推薦廠家根據凍存方式不同可以分為慢速凍存（程序降溫法）與快速凍存（非程序降溫法）。

細胞凍存秘籍：1.在倒置相差顯微鏡上每隔幾分鐘檢查酶處理的進展情況。一旦細胞變圓，輕輕敲擊細胞瓶使其脫離塑料表面。加入5 mL含血清的生長培養基滅活胰酶。可能需要劇烈的移液操作來使培養容器底部的剩余細胞脫落，或將細胞團塊分解成單細胞懸浮液。胰酶的去除或失活對于冷凍細胞至關重要。如果游離試劑不能直接滅活，可以通過下一步的離心去除。2.用15ml離心管收集細胞。取出樣本進行細胞計數，剩余的細胞懸液以約100×g離心5分鐘以獲得細胞沉淀。離心時，用細胞計數板對細胞進行計數。使用臺盼藍染液檢查細胞的活性。

凍存溫度：凍存溫度是指能長期保存細胞的較低溫度，在此溫度下，細胞生化反應極其緩慢甚至停止，但經過長期保存，在復蘇后仍能保持正常的結構和功能。 不同的細胞和生物體以及使用不同的冷凍保存方法要取得同樣的冷凍保存效果，冷凍保存溫度可以不同。但從實際和效益的觀點出發，液氮溫度-196℃是 目前較佳的冷凍保存溫度。在-196℃時，細胞的生命活動幾乎完全停止，但復蘇后細胞的結構和功能完好。如果冷凍過程得當，一般生物樣品在-196℃下均可保存十年以上。應用-70℃～-80℃保存細胞，短期內對細胞的活性無明顯影響，但隨著凍存時間延長，細胞存活率明顯降低。在冰點到-40℃范圍內保存細胞的效果不佳。降低細胞外溶液的電解質濃度，減少陽離子進入細胞的數量。

無血清細胞凍存液與含血清細胞凍存液對比：傳統的細胞凍存液是使用培養基、血清和DMSO按照一定的比例混合，其中DMSO的含量是10%，血清的含量是10%，統稱為含血清細胞凍存液。含血清細胞凍存液的一般的凍存方法是梯度降溫凍存法，如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘，然后移至-20℃冰箱30分鐘，再移至-80℃冰箱保存16-18個小時（或隔夜），較后才移至液氮罐中進行長期的儲存。可見，含血清細胞凍存液凍存細胞時遇到的問題：1.凍存細胞時需現配凍存液(如購買市面上通用的含血清細胞凍存液，此步可省略)。2.需要程序降溫（4℃→-20℃→-80℃→液氮），步驟繁瑣，耗時耗力。3.含血清，細胞污染(病毒、霉菌和支原體等)的風險更高。4.血清批次、品質間差異導致凍存液的批次間差異。5.需液氮凍存，且不能原位（如孔板）凍存。根據密度調整細胞凍存 液用量。杭州唐山無血清細胞凍存液

無任何外源蛋白和血清，適用于各類動物細胞株凍存。杭州無血清細胞凍存液哪里買

使用方法：1)細胞超凈臺無菌環境，1.5mlEP管內加入細胞混懸劑均勻混懸細胞，細胞終濃度為5×106個/ml，混懸液體積為200μl。細胞凍存劑冰水混合物中預冷，逐滴加入細胞凍存劑800μl，細胞混懸劑與細胞凍存劑的體積比控制在1:4。2)開啟程序性降溫，降溫速率為1℃/min，較后降溫至-80℃以下進行凍存。將比較例1凍存后細胞的復蘇率與實施例5凍存后細胞的復蘇率進行對比，具體結果如附圖1所示，可見采用本發明的凍存方法能夠明顯提高細胞的復蘇率。其他實施例通過與比較例1進行比較，也得到相同的試驗結果。本發明的凍存方法不僅可以明顯提高凍存后細胞復蘇率，同時還可減少不同批次細胞凍存復蘇率不穩定、以及避免由血清中的支原體，細菌，朊細菌及其他細菌顆粒引發的污染。杭州無血清細胞凍存液哪里買

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