細胞轉染的原理、操作步驟以及小技巧：一、脂質體(Liposome)轉染方法原理脂質體作為體內和體外輸送載體的工具，已經研究的十分普遍，中性脂質體是利用脂質膜包裹DNA，借助脂質膜將DNA導入細胞膜內。帶正電的陽離子脂質體，DNA并沒有預先包埋在脂質體中，而是帶負電的DNA自動結合到帶正電的脂質體上，形成DNA-陽離子脂質體復合物，從而吸附到帶負電的細胞膜表面，經過內吞被導入細胞。優點:與其它方法相比，有較高的效率和較好的重復性，它適用于把DNA轉染入懸浮或貼壁培養細胞中，是目前條件下較方便的轉染方法之一。對于轉染相同量的DNA所需的較佳陽離子脂質體試劑的量會因細胞密度而異。北京細胞高效轉染試劑哪家便宜

細胞轉染為什么不能加血清：不同的細胞及轉染試劑要求轉染的條件是不同 的。較好是在靠前次實驗前做一個預實驗，比如：HeLa，293，CHO，COS7， MCF－7，HepG2等細胞，是否加血清，對不同的細胞是有不同的影響的，有些細胞是可以有血清的，有些加血清就會受影響。轉染后在6小時左右較好換液且換為有血清的培養基，其一因為普通轉染試劑對細胞的毒性作用大，其二可降低因血清的缺乏引起的細胞的死亡。轉染時不加血清是防止血清的干擾作用，轉染后可適時加入。加入過早會引起未轉染細胞的優勢生長，過晚會引起較多細胞死亡。可實時觀察1/5細胞變圓的時候加入血清。無錫正規細胞高效轉染試劑哪里買細胞易于生長到高密度并合成更多蛋白。

轉染技術：國際上推出了一些陽離子聚合物基因轉染技術，以其適用宿主范圍廣，操作簡便，對細胞毒性小，轉染效率高受到研究者們的青睞。其中樹枝狀聚合物(Dendrimers)和聚乙烯亞胺(Polyethylenimine，PEI)的轉染性能較佳，但樹枝狀聚合物的結構不易于進一步改性，且其合成工藝復雜。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子，每相隔二個碳個原子，即每“第三個原子都是質子化的氨基氮原子，使得聚合物網絡在任何pH下都能充當有效的“質子海綿”(protonsponge)體。這種聚陽離子能將各種報告基因轉入各種種屬細胞，其效果好于脂質聚酰胺，經進一步的改性后，其轉染性能好于樹枝狀聚合物，而且它的細胞毒性低。大量實驗證明，PEI是非常有希望的基因治好載體。目前在設計更復雜的基因載體時，PEI經常做為中心組成成分。

穩定轉染細胞系的篩選：生長的細胞比不分裂的細胞更快的受到GENETICIN物品的影響。轉染后，在開始篩選前等待48-72小時，使細胞表達足夠量的抗性酶，保證在開始篩選時可以自我保護。轉染后48-72小時倒掉培養基，加入含有GENETICIN物品的培養基，物品的濃度根據劑量反應曲線確定，足夠殺死未轉染細胞。因為許多因子影響到篩選所需的GENETICIN物品的較佳濃度，包括細胞類型，培養基和血清濃度等，所以有必要對每種細胞作一個劑量反應曲線，確定較佳濃度。篩選較多可能需要一周時間，因為在致死劑量的GENETICIN物品存在條件下，細胞會分裂1-2次。在次培養細胞時使用較低劑量的物品，一般是篩選劑量的一半。篩選后的細胞一般是離散的克隆，根據實驗目的不同，可以分別純化（克隆），收集進行大量培養或染色并進行抗性克隆的計數。直到外源基因在細胞分裂過程中因各種因素丟失為止。

細胞轉染常用步驟：1.轉染試劑的準備①將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物。②震蕩后將試劑放在－20攝氏度保存，使用前還需震蕩。2.選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質體體積：DNA質量)來轉染細胞。在一個轉染管中加入合適體積的無血清培養基。加入合適質量的MyoD或者EGFP的DNA，震蕩后在加入合適體積的轉染試劑，再次震蕩。3.將混合液在室溫放置10―15分鐘。4.吸去培養板中的培養基，用PBS或者無血清培養基清洗一次。5.加入混合液，將細胞放回培養箱中培養一個小時。6.到時后，根據細胞種類決定是否移除混合液，之后加入完全培養基繼續培養24－48小時。轉染 ，是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。無錫正規細胞高效轉染試劑哪里買

通過緩沖液的作用以及脂質與內體膜融合，增大內體的內部滲透壓。北京細胞高效轉染試劑哪家便宜

如何高效率實現細胞轉染：轉化、轉染、轉導幾個名詞是從事生命科學研究的初學者經常碰到的，也是讓人容易混淆的。他們之間有什么區別和聯系呢：轉化(transformation)指將質粒或其它外源DNA導入處于感受態的宿主細胞（原核生物），并使宿主細胞獲得新的表型的過程。轉導(transduction)由噬菌體或細胞細菌介導的遺傳信息轉移過程稱轉導或傳染（Infection）。轉染(transfection)是指真核細胞主動或者被動導入外源DNA片段而獲得新表型的過程。對于真核生物，轉染就是原核生物中轉化的同義詞。轉染技術轉染是將外源遺傳物質導入真核細胞的過程，是細胞和分子生物學研究的重要工具。在現生命可續研究中，大部分的工作是利用基因功能研究來探索生命過程，如何將目的基因導入細胞內是科學實驗過程中不可缺少的實驗技術，而細胞轉染是完成這一過程的必需步驟。北京細胞高效轉染試劑哪家便宜