外泌體相關技術在過去幾年一直在快速發展,預計市場將大幅增長,因為它們可被應用到液體活檢、精細醫學和再生醫學領域。特別是,一些疾病衍生的外泌體通過調節血管生成、轉移和免疫來影響細胞的侵襲性,使其成為用于一些疾病檢測、診斷和治病選擇的極其有用的生物標志物來源。在風險投資方面,有很多市場活動。2016年1月,ExosomeDiagnostics公司在B輪融資中獲得6000萬美元資金,并于2017年7月獲得3000萬美元的C輪融資。同樣,CodiakBiosciences公司于2016年由MDAnderson一些疾病中心與兩家風險投資公司共同成立,以8000多萬美元的A和B輪融資成立該公司。2017年11月29日,CodiakBioSciences公司又增加了7650萬美元的C輪融資。在整個A、B和C輪融資中,CodiakBioSciences公司募集了驚人的1.685億美元。外泌體的提取分離:密度梯度離心。貴陽外泌體提取試劑進貨價

外泌體的提取分離:1、超速離心法(差速離心)。超離法是常用的外泌體純化手段,采用低速離心、高速離心交替進行(如圖所示),可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡單,獲得的囊泡數量較多而廣受歡迎,但過程比較費時,且回收率不穩定(可能與轉子類型有關),純度也受到質疑;此外,重復離心操作還有可能對囊泡造成損害,從而降低其質量。2、密度梯度離心。在超速離心力作用下,使蔗糖溶液形成從低到高連續分布的密度階層,是一種區帶分離法。通過密度梯度離心,樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,但步驟繁瑣,耗時。珠海正規外泌體提取試劑廠家供應外泌體提取:樣本的粘度與分離的外泌體純度有顯著的相關性。

外泌體的提取分離:1、超濾離心。由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,大于一般蛋白質,利用不同截留相對分子質量(MWCO)的超濾膜對樣品進行選擇性分離,便可獲得外泌體。超濾離心法簡單高效,且不影響外泌體的生物活性,是提取細胞外泌體的一種新方法。2、磁珠免疫法。外泌體表面有其特異性標記物(如CD63、CD9蛋白),用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結合,即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡便、不影響外泌體形態完整等優點,但是效率低,外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,不利于下游實驗,難以普遍普及。
具體步驟是:以下所有步驟都在4℃下進行,1、300×g10min,棄沉淀,去除細胞2、2000×g20min,棄沉淀,去除死細胞3、10,000×g30min,棄沉淀,去除細胞碎片等亞細胞成分4、10,000×g70min,棄上清,沉淀即為外泌體5、PBS(每10ml細胞培養液用30mlPBS重懸)清洗沉淀物,混勻,10,000×g70min6、lmlPBS溶解沉淀(外泌體),立即使用或置于-80℃備用。7、一般超速離心法會結合密度梯度離心,這樣得到的外泌體更純,具體做法第4步后蔗糖梯度離心,10,000×g70min,以去除密度大于1.21g/ml的顆粒。優點是:成本低,操作簡單,獲得的囊泡數較多。缺點是:耗時耗力(需用時8-30h,并且每次只能處理6個樣本),獲得的外泌體純度不是很高,高速及重復離心也會對外泌體產生很大的傷害,并且不適用于如血漿和血清等粘性液體生物樣本。外泌體的特殊結構和功能,使得它具有潛在的應用價值,可以作為診斷多種疾病的生物指標。

作為一種分子通斷開關的KRAS發生突變時會處于“開啟”狀態。在80%~95%的胰腺導管腺病(PDAC)當中,這個基因發生突變,這也是這種一些疾病中較為常見的突變。這些研究人員證實iExosome能夠運送特異性地靶向KRAS的siRNA和shRNA分子,并且比他們的合成對應物脂質體(liposome)更加高效。脂質體不具有外泌體表現出的天然復雜性和優勢。德州大學MD安德森一些疾病中心一些疾病生物學助理教授ValerieLeBleu博士說,“我們的研究提示著與脂質體相比,外泌體表現出運送siRNA分子和壓制侵襲性胰腺瘤生長的優異能力。我們也證實外泌體表面上的CD47存在允許它們躲避來自循環單核細胞的吞噬作用。”外泌體的提取方法:色譜法。開封正規外泌體提取試劑產品介紹
外泌體提取:用這種聚合物沉淀具有許多優點,包括對分離的外泌體影響小、pH中性等。貴陽外泌體提取試劑進貨價
外泌體的生物學功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒,而傳統超速離心方法步驟繁瑣、硬件要求高、操作難度大。李記生物自主開發的外泌體快速提取試劑盒,組分經過優化處理,適用于細胞培養上清液、血清、血漿、尿液及其他體液(腦脊液、腹水、羊水、乳汁以及唾液等)中的外泌體提取,并搭配純化過濾裝置,可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒。注意事項:1.對于待測樣品粘度過大時,可將樣本用4℃預冷的1×PBS緩沖液進行等體積稀釋處理。2.當血清、血漿、唾液等樣品收獲的外泌體濃度較高,收獲的外泌體顆粒無法通過EPF柱純化時,可用4℃預冷的1×PBS進行稀釋后再通過EPF柱離心。3.針對外泌體標志蛋白(CD63,CD9,CD81等)進行Westernblot檢測,可以鑒定所提的外泌體。通過超速離心(120000g/分鐘)20小時以上才能獲得足夠的外泌體量。貴陽外泌體提取試劑進貨價