作為一種分子通斷開關(guān)的KRAS發(fā)生突變時會處于“開啟”狀態(tài)。在80%~95%的胰腺導(dǎo)管腺病(PDAC)當(dāng)中,這個基因發(fā)生突變,這也是這種一些疾病中較為常見的突變。這些研究人員證實iExosome能夠運送特異性地靶向KRAS的siRNA和shRNA分子,并且比他們的合成對應(yīng)物脂質(zhì)體(liposome)更加高效。脂質(zhì)體不具有外泌體表現(xiàn)出的天然復(fù)雜性和優(yōu)勢。德州大學(xué)MD安德森一些疾病中心一些疾病生物學(xué)助理教授ValerieLeBleu博士說,“我們的研究提示著與脂質(zhì)體相比,外泌體表現(xiàn)出運送siRNA分子和壓制侵襲性胰腺瘤生長的優(yōu)異能力。我們也證實外泌體表面上的CD47存在允許它們躲避來自循環(huán)單核細胞的吞噬作用。逐漸取代超速離心法并推廣開來。有些試劑盒操作簡便,不用超速離心。蕪湖外泌體提取試劑廠家供應(yīng)

外泌體(exosomes)是活細胞經(jīng)過"內(nèi)吞-融合-外排"等一系列調(diào)控過程而形成的膜性囊泡,來源于晚期核內(nèi)體(也稱為多囊泡體),直徑約為30-150nm,密度在1.13-1.21g/ml,天然存在于血液、唾液、尿液及母乳等體液中,同時外泌體也存在于組織和細胞間隙中。人體中幾乎所有類型的細胞均能產(chǎn)生外泌體,人體中大約有1014個外泌體,大約平均每個細胞產(chǎn)生1000-10000個。外泌體中含有核酸(DNA、miRNA、lncRNA、mRNA、tRF等)、蛋白和脂類,在細胞間物質(zhì)和信息轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用,研究表明其在干細胞、免疫調(diào)控、瘤轉(zhuǎn)移、血管生成以及生物標(biāo)志物等領(lǐng)域都發(fā)揮著不可替代的作用。蕪湖外泌體提取試劑廠家供應(yīng)近年來,隨著人們對外泌體的研究和認識加深。

外泌體的提取分離:1、PEG-base沉淀法。聚乙二醇(PEG)可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒,現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題:比如純度和回收率低,雜蛋白較多(假陽性),顆粒大小不均一,產(chǎn)生難以去除的聚合物,機械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會破壞外泌體等,因此發(fā)表文章時易受質(zhì)疑。2、試劑盒提取。近幾年來,市場上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒,有的是通過特殊設(shè)計的過濾器過濾掉雜質(zhì)成分,有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進行分離純化,也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來。這些試劑盒不需要特殊設(shè)備,隨著產(chǎn)品不斷更新?lián)Q代,提取效率和純化效果逐漸提高,因而逐漸取代超速離心法并推廣開來。有些試劑盒操作簡便,不用超速離心,同時可獲得高純度和高回收率的外泌體。
具膜囊泡,當(dāng)我們使用常規(guī)方法分離這些結(jié)構(gòu)時不推薦使用其他的名稱來稱呼它們。外泌體(exosome)適用于通過特殊手段拿到的由胞內(nèi)體來源的釋放到細胞外的膜泡結(jié)構(gòu)。建議對細胞外囊泡進行細分時使用物理上的界定如小細胞外囊泡(sEV)和中/大細胞外囊泡(m/lEV),或者高密度囊泡(highdensity)和低密度囊泡(lowdensity)等,同時也建議使用表面蛋白來界定如CD63+CD81+細胞外囊泡等。當(dāng)使用exosomes等稱呼時應(yīng)當(dāng)進行嚴謹?shù)膶嶒炞C明使用的“exosomes樣品”是由胞內(nèi)體途徑產(chǎn)生的。小和同學(xué):都是細胞外囊泡,外泌體和微囊泡有啥區(qū)別?小光老師:外泌體和微囊泡的區(qū)別在于其生成的方式不同。從晚期內(nèi)體來源產(chǎn)生的細胞外囊泡稱為外泌體,從細胞膜直接出芽產(chǎn)生的細胞外囊泡稱為微囊泡。外泌體的提取分離:超速離心法(差速離心)。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法,這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊,由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn),也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心,這種操作簡單、省時,不影響外泌體的生物活性,但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高,但是前期準(zhǔn)備工作繁雜,耗時,量少。、外泌體的提取方法學(xué)規(guī)范、統(tǒng)一定量及鑒定等。珠海外泌體提取試劑供應(yīng)商
外泌體提取:差速離心。差速離心仍然是較常見的外泌體分離技術(shù)之一。蕪湖外泌體提取試劑廠家供應(yīng)
外泌體提純試劑盒的特色與優(yōu)勢:純化和富集的完整血漿/血清,尿液和細胞培養(yǎng)基中外泌體的可用于功能研究;樣本輸入量多樣;無需耗時的超速離心,過濾或特殊注射器;無需沉淀試劑,也無需過夜培養(yǎng);無需蛋白酶處理;適用于多種物種;外泌體被純化并且不含任何其他RNA結(jié)合蛋白;可以使用NanoSight?或電子顯微鏡分析純化的外泌體,以評估近似外泌體大小范圍和濃度。外泌體(exosomes)是一種能被機體內(nèi)大多數(shù)細胞分泌的直徑大約為30~150nm的具有脂質(zhì)雙層膜的微小膜泡。它普遍存在并分布于各種體液中,攜帶和傳遞重要的信號分子,形成了一種全新的細胞間信息傳遞系統(tǒng),影響細胞的生理狀態(tài)并與多種疾病的發(fā)生與進程密切相關(guān)。蕪湖外泌體提取試劑廠家供應(yīng)