細胞轉染效率低下的幾個大坑：1.不注意細節在轉染之前更換一次37℃預溫的培養基，可提高轉染效率。脂質體和DNA/RNA混合物應當一滴一滴地滴下來，從培養皿一邊滴到另一邊，邊滴邊輕搖培養皿，以確保均勻分布和避免局部高濃度。這些都是一些細枝末節，但是，如果不注意的話，也會造成轉染效率低下。2.細胞狀態不好細胞狀態不好，會導致轉染效率低下。一般進行轉染的細胞應該處于對數生長期。如果是貼壁細胞的話，貼壁率應該在70-80%；如果是懸浮細胞的話，應該是6X105個/孔（24孔板），一般是轉染前現在換液，轉染前用無血清培養基或PBS洗細胞一次。轉染的整個過程都不應該有物品。對于原代細胞，可用促有絲分裂刺激物進行細胞活化。鄭州細胞高效轉染試劑生產廠家

轉染的注意事項：培養基中的物品物品，比如青霉素和鏈霉素，是影響轉染的培養基添加物。這些物品一般對于真核細胞無毒，但陽離子脂質體試劑增加了細胞的通透性，使物品可以進入細胞。這降低了細胞的活性，導致轉染效率低。所以，在轉染培養基中不能使用物品，甚至在準備轉染前進行細胞鋪板時也要避免使用物品。這樣，在轉染前也不必潤洗細胞。對于穩定轉染，不要在選擇性培養基中使用青霉素和鏈霉素，因為這些物品是GENETICIN選擇性物品的競爭性克制劑。另外，為了保證無血清培養基中細胞的健康生長，使用比含血清培養基更少的物品量。大多數已建立的細胞系都是非整倍體，原代培養包括了表達不同基因組合的細胞的混合物。細胞培養在實驗室中保存數月和數年后會經歷突變，總染色體重組或基因調控變化等而演化，這會導致和轉染相關的細胞行為的變化。如果隨時間發現這種變化，融化一管新鮮的細胞可能會恢復原先的轉染活性。比如，新鮮融化的NIH3T3細胞比傳代8次的細胞表現出更高的轉染效率，融化細胞的進一步傳代并沒有降低轉染效率。因此，如果觀察到轉染效率降低，可以試著轉染新鮮培養的細胞以恢復較佳結果唐山正規細胞高效轉染試劑總染色體重組或基因調控變化等而演化。

細胞轉染的注意事項：血清A、DNA-陽離子脂質體復合物形成時不能含血清，因為血清會影響復合物的形成。B、一般細胞對無血清培養可以耐受幾個小時沒問題，轉染用的培養液可以含血清也可以不加，但血清一度曾被認為會降低轉染效率，轉染培養基中加入血清需要對條件進行優化。C、對于對血清缺乏比較敏感的細胞，可以使用營養豐富的無血清培養基，或者在轉染培養基中使用血清。對血清缺乏比較敏感的貼壁細胞，建議使用**轉染試劑。有條件的話，可以用無血清培養基代替PBS洗細胞兩遍，注意洗的時候要輕，靠邊緣緩緩加入液體，然后不要吹吸細胞而是轉動培養板讓液體滾動在細胞表面。如果洗的太厲害，細胞又損失一部分，加了脂質體后，細胞受影響就更大了，死亡細胞會增多

細胞轉染效率低下的幾個大坑：1.細胞污染細胞污染也是造成細胞死亡，轉染效率低下的一大原因。首先，轉染細胞用的質粒必須保證無菌。而現在市場上的一般的質粒提取試劑盒都做不到較全無菌。毛博這里再貢獻一個獨門絕招：將提完質粒后或者提的較后一步，用75％乙醇沉淀，這樣就除菌了。2.質粒不行轉染用的質粒首先要保證數量，一般為2μg以上。質粒純度不夠或者含有細菌LPS或其他對細胞有毒害作用的物質，也會影響轉染效率。這個時候，就應該對質粒進行純化和濃縮。瞬時表達分析所需的人力和時間比穩定表達少。

具有細胞毒性極低、轉染后細胞存活率高，生成可信任的生理學相關數據。2.操作簡便、節省時間，只需對X-tremeGENE9DNA轉染試劑進行簡單稀釋，再與質粒DNA共同孵育，即可直接向細胞添加反應混合物(有無血清均可)。3.對于常用細胞無需進行費時費力的優化工作。X-tremeGENEHPDNA轉染試劑簡介：X-tremeGENEHPDNA轉染試劑是一種高效的無動物源成分的低毒轉染試劑，兼容含血清或不含血清的培養基，可用于轉染各類真核細胞(包括昆蟲細胞)以及多種難轉染細胞系。優勢：對于貼壁細胞，一般要求在轉染前一日，用胰酶處理為單細胞懸液。徐州深圳細胞高效轉染試劑

脂質體轉染適用于把DNA轉染入懸浮或貼壁培養細胞中。鄭州細胞高效轉染試劑生產廠家

細胞轉染的常用方法：磷酸鈣共沉淀原理：該法可用于瞬時或穩定轉染。然而因其對pH、溫度和緩沖液鹽濃度的微小變化十分敏感，所得結果容易出現差異，且對許多類型的細胞培養物(尤其是原代細胞)具有細胞毒性，轉染效率較差。實驗步驟：將核酸與氯化鈣在磷酸鹽緩沖液中混合，同時控制好pH、溫度等條件→室溫孵育，生成濃縮DNA的極小不溶性顆粒沉淀→將顆粒型沉淀分散到細胞中，促進DNA粘附在細胞表面→共沉淀通過內吞作用進入胞漿→分析細胞瞬時基因表達或者選擇穩定性傳染。鄭州細胞高效轉染試劑生產廠家