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來源: 發布時間:2025-11-08

具有細胞毒性極低、轉染后細胞存活率高,生成可信任的生理學相關數據。2.操作簡便、節省時間,只需對X-tremeGENE9DNA轉染試劑進行簡單稀釋,再與質粒DNA共同孵育,即可直接向細胞添加反應混合物(有無血清均可)。3.對于常用細胞無需進行費時費力的優化工作。X-tremeGENEHPDNA轉染試劑簡介:X-tremeGENEHPDNA轉染試劑是一種高效的無動物源成分的低毒轉染試劑,兼容含血清或不含血清的培養基,可用于轉染各類真核細胞(包括昆蟲細胞)以及多種難轉染細胞系。優勢:較適合轉染的細胞是經過幾次傳代后達到對數生長期的細胞。武漢正規細胞高效轉染試劑直銷廠家

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細胞轉染為什么不能加血清:不同的細胞及轉染試劑要求轉染的條件是不同的。較好是在靠前次實驗前做一個預實驗,比如:HeLa,293,CHO,COS7,MCF-7,HepG2等細胞,是否加血清,對不同的細胞是有不同的影響的,有些細胞是可以有血清的,有些加血清就會受影響。轉染后在6小時左右較好換液且換為有血清的培養基,其一因為普通轉染試劑對細胞的毒性作用大,其二可降低因血清的缺乏引起的細胞的死亡。轉染時不加血清是防止血清的干擾作用,轉染后可適時加入。加入過早會引起未轉染細胞的優勢生長,過晚會引起較多細胞死亡。可實時觀察1/5細胞變圓的時候加入血清重慶正規細胞高效轉染試劑廠家供應重新接種于培養皿或瓶,較好在轉染前4小時換一次新鮮培養液。

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穩定轉染細胞系的篩選:生長的細胞比不分裂的細胞更快的受到GENETICIN物品的影響。轉染后,在開始篩選前等待48-72小時,使細胞表達足夠量的抗性酶,保證在開始篩選時可以自我保護。轉染后48-72小時倒掉培養基,加入含有GENETICIN物品的培養基,物品的濃度根據劑量反應曲線確定,足夠殺死未轉染細胞。因為許多因子影響到篩選所需的GENETICIN物品的較佳濃度,包括細胞類型,培養基和血清濃度等,所以有必要對每種細胞作一個劑量反應曲線,確定較佳濃度。篩選較多可能需要一周時間,因為在致死劑量的GENETICIN物品存在條件下,細胞會分裂1-2次。在次培養細胞時使用較低劑量的物品,一般是篩選劑量的一半。篩選后的細胞一般是離散的克隆,根據實驗目的不同,可以分別純化(克隆),收集進行大量培養或染色并進行抗性克隆的計數。

轉染的注意事項:培養基中的物品物品,比如青霉素和鏈霉素,是影響轉染的培養基添加物。這些物品一般對于真核細胞無毒,但陽離子脂質體試劑增加了細胞的通透性,使物品可以進入細胞。這降低了細胞的活性,導致轉染效率低。所以,在轉染培養基中不能使用物品,甚至在準備轉染前進行細胞鋪板時也要避免使用物品。這樣,在轉染前也不必潤洗細胞。對于穩定轉染,不要在選擇性培養基中使用青霉素和鏈霉素,因為這些物品是GENETICIN選擇性物品的競爭性克制劑。另外,為了保證無血清培養基中細胞的健康生長,使用比含血清培養基更少的物品量。大多數已建立的細胞系都是非整倍體,原代培養包括了表達不同基因組合的細胞的混合物。細胞培養在實驗室中保存數月和數年后會經歷突變,總染色體重組或基因調控變化等而演化,這會導致和轉染相關的細胞行為的變化。如果隨時間發現這種變化,融化一管新鮮的細胞可能會恢復原先的轉染活性。比如,新鮮融化的NIH3T3細胞比傳代8次的細胞表現出更高的轉染效率,融化細胞的進一步傳代并沒有降低轉染效率。因此,如果觀察到轉染效率降低,可以試著轉染新鮮培養的細胞以恢復較佳結果。這會導致和轉染相關的細胞行為的變化。

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細胞轉染為什么不能加血清:不同的細胞及轉染試劑要求轉染的條件是不同的。較好是在靠前次實驗前做一個預實驗,比如:HeLa,293,CHO,COS7,MCF-7,HepG2等細胞,是否加血清,對不同的細胞是有不同的影響的,有些細胞是可以有血清的,有些加血清就會受影響。轉染后在6小時左右較好換液且換為有血清的培養基,其一因為普通轉染試劑對細胞的毒性作用大,其二可降低因血清的缺乏引起的細胞的死亡。轉染時不加血清是防止血清的干擾作用,轉染后可適時加入。加入過早會引起未轉染細胞的優勢生長,過晚會引起較多細胞死亡。可實時觀察1/5細胞變圓的時候加入血清。細胞密度以及轉染的時間長短和培養基中血清的含量都是影響轉染效率的重要因素。唐山正規細胞高效轉染試劑哪里買

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細胞轉染的注意事項:物品(PS)物品,比如青霉素和鏈霉素,是影響轉染的培養基添加物。這些物品一般對于真核細胞無毒,但陽離子脂質體試劑增加了細胞的通透性,使物品可以進入細胞。這降低了細胞的活性,導致轉染效率低。所以,在轉染培養基中不能使用物品,甚至在準備轉染前進行細胞鋪板時也要避免使用物品。這樣,在轉染前也不必潤洗細胞。對于穩定轉染,不要在選擇性培養基中使用青霉素和鏈霉素,ICIN選擇性物品的競爭性克制劑。另外,為了保證無血清培養基中細胞的健康生長,使用比含血清培養基更少的物品量。武漢正規細胞高效轉染試劑直銷廠家

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