細胞外RNA(exRNA)已成為研究界的新寵。近年來,人們在血漿或血清樣本中成功檢測到疾病相關的exRNA,使其有望成為非侵入性的生物標志物。然而,從血漿或血清中分離exRNA仍頗具挑戰(zhàn)性,這一方面是因為exRNA豐度低,另一方面是因為血液中的污染物會壓制PCR。商品化的試劑盒能簡化和加速exRNA提取過程,已成為循環(huán)exRNA研究不可缺少的工具。然而,這些試劑盒的提取效率如何,是否能去除血漿中的污染物,是否會偏向特定的RNA,都沒有經(jīng)過評估,而這類評估對于結果解釋和實驗之間的比較都很關鍵。為了提高裂解效果,可以將裂解緩沖液與機械裂解步驟(研磨珠破碎)匹配。金華成都RNA提取試劑

植物RNA快速提取試劑盒:1.固體組織破碎設備。可用下列裝置之一:1)玻璃勻漿器。泡酸清潔,用高壓滅菌蒸餾水洗滌數(shù)次。2)研缽。適用于液氮凍存組織的研磨,清洗方法同玻璃勻漿器。3)高速機械勻漿器(Polytron,Tekmar或類似產(chǎn)品),打開開關,在蒸餾水中清洗分散器頭數(shù)次。2.高壓蒸汽30分鐘消毒一次性吸頭離心管。RNA沉淀溶解之后,應嚴格使用高壓消毒的一次性用品。然而PlantRNAtrip能在RNA酶污染環(huán)境下工作,在裂解步驟可使用未高壓但潔凈的一次性吸頭和離心管,但光推薦在緊急情況下這樣做。3.普通雙蒸水,高壓消毒20分鐘。用于沖洗器皿,配制瓊脂糖凝膠和電泳用緩沖液。DEPC處理的雙蒸水。加DEPC到水中至終濃度為0.01%v/v,室溫過夜,高壓消毒30分鐘。用于溶解RNA,配制TE緩沖液和75%乙醇。4.濕冰。在冰上進行操作有助于減少RNA降解。5.其它用品。電泳槽,雙蒸水沖洗。離心機和加樣器,無需處理。6.戴手套。注意某些實驗如提取質粒DNA如使用極大量RNA酶,為防污染,須較全仔細清洗實驗器具和實驗區(qū)域。唐山RNA提取試劑生產(chǎn)廠家總RNA提取試劑:自備新開封或專門氯仿,異丙醇,75%乙醇,DEPC處理水。

RNA提取試劑的選擇:首先,要確定材料的可用性。盡管現(xiàn)有的RNA提取試劑都用壓制RNase的成分,但提取的材料仍需謹慎處理。提取的材料的新鮮度是獲取完整RNA的關鍵,但是由于種種原因無法立即從新鮮材料中提取RNA時,使用Takara公司的樣品保護劑SampleProtectorforRNA/DNA可以免去使用液氮或超低溫冰箱的不便,同時也可以有效解決組織、細胞樣品的短時間保存及運輸問題。此外,如果將不同時期收集的樣品都預先存放于本試劑中,可以做到立即終止并固定RNA表達的時序變化,減少實驗組間的誤差
植物RNA快速提取試劑盒:是一種單相RNA快速提取試劑盒,可高效裂解堅固的植物細胞并強烈壓制RNA酶活性。細胞破碎之后,植物多糖立即被PlantRNAtrip獨特的成分結合。離心抽提步驟將RNA與滅活的RNA酶、蛋白、基因組DNA污染分離,并清理植物多糖多酚以及次生代謝產(chǎn)物。在RNA沉淀之前加入PlantRNAAid清理植物多酚,并清理殘余的多糖。提取可在60分鐘內完成,所提取的RNA純度極高,不含DNA和多糖和多酚污染,可用于構建cDNA文庫、RT-PCR、Northern轉印分析、Poly(A)mRNA純化、體外翻譯、和RNA酶保護實驗。適于各種植物組織RNA提取,也特別適合富含糖原的動物肝臟和肌肉組織提取高純度RNA。如果植物組織富含多酚和次生代謝產(chǎn)物,推薦使用PlantRNAExtractionkit(R1050)。Trizol是一種新型總RNA抽提試劑,采用變性劑即內含異硫氰酸胍酚和β-巰基乙醇等變性物質。

RNA指的是核糖核酸。真核生物體的遺傳物質存在于細胞核內,多數(shù)的真核生物使用DNA也就是脫氧核糖核酸來作為遺傳的中心物質,但是少量的病菌遺傳物質可以是RNA。正因為病菌的遺傳物質是RNA,所以可以通過檢測病菌的RNA是否存在,或者其濃度和含量來判斷是否存在相應的病菌傳染,傳染的程度及病菌是否仍在大量復制。一個核糖核苷酸分子由磷酸,核糖和堿基構成。RNA的堿基主要有4種,即A腺嘌呤、G鳥嘌呤、C胞嘧啶、U尿嘧啶,其中,U(尿嘧啶)取代了DNA中的T。RNA是核糖核酸的縮寫。存在于生物細胞以及部分病菌、類病菌中的遺傳信息載體。RNA由核糖核苷酸經(jīng)磷酸二酯鍵縮合而成長鏈狀分子。專門的高鹽緩沖系統(tǒng)允許RNA物質基團結合到旋轉柱的玻璃纖維基質上,同時使污染物通過柱被有效地洗去。異硫氰酸胍屬于解偶劑,是一類強力的蛋白質變性劑,可溶解蛋白質。昆明RNA提取試劑單價
RNA由核糖核苷酸經(jīng)磷酸二酯鍵縮合而成長鏈狀分子。金華成都RNA提取試劑
RNA提取濃度不高或質量不佳原因及解決辦法:1、RNA降解:可能是提取樣本本身降解,或者是在提取過程中導致的降級;應當盡可能使用新鮮樣本進行RNA提取,采集的樣本應當及時置于液氮或者-80℃冰箱凍存,并減少反復凍融。在RNA提取過程中應當使用RNase/DNasefree的吸頭、離心管及其他材料,提取過程盡可能的快,提取后的RNA應置于冰盒上并及時放于-80凍存。如提取后的RNA需要進行凝膠電泳檢測,則應提取好后立刻進行電泳,電泳緩沖液應更換新配制的。2、鹽及有機溶劑殘留:提取試劑中含有酚及胍鹽,洗滌液中含有乙醇,在提取過程中裂解液吸棄不徹底,洗液沒有充分晾干導致的,殘留的鹽及有機溶劑對后續(xù)的逆轉錄和PCR均存在不同程度的壓制作用,因此在提取過程中應充分去除組織裂解液,洗滌時應充分,使管壁四周均能被洗滌到,另外管子空離和吹風是必須的步驟,會進一步降低有機物殘留。金華成都RNA提取試劑