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浙江正規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)基生產(chǎn)產(chǎn)家

來源: 發(fā)布時(shí)間:2024-07-11

    動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)(animalcellculture)就是從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織,將它分散成單個(gè)細(xì)胞(使用胰蛋白酶或膠原蛋白酶)然后,放在適宜的培養(yǎng)基中,讓這些細(xì)胞生長和增殖。細(xì)胞培養(yǎng)基的種類有哪些?按照細(xì)胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史,細(xì)胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液、天然細(xì)胞培養(yǎng)基、合成細(xì)胞培養(yǎng)基、無血清細(xì)胞培養(yǎng)基、限定化學(xué)成分細(xì)胞培養(yǎng)基等幾大種類。DMEM(Dulbecco’smodifiedMinimalEssentialMedium)是由Dulbecco在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上改良獲得的,各成分份量加倍,分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)兩種類型。細(xì)胞生長快。附著稍差的腫瘤細(xì)胞、克隆培養(yǎng)用高糖效果較好,常用于雜交瘤的骨髓瘤細(xì)胞和DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)。2.神經(jīng)元基礎(chǔ)培養(yǎng)基可為神經(jīng)元生長提供基礎(chǔ)營養(yǎng)物質(zhì)。IPL-41昆蟲培養(yǎng)基(IPL-41InsectMedium)旨在用于大規(guī)模擴(kuò)增草地貪夜蛾(Spodopterafrugiperda)細(xì)胞系,也常用于通過桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)(BEVS)進(jìn)行蛋白表達(dá)。IPL-41培養(yǎng)基是對(duì)原始IPL配方的改良,由美國農(nóng)業(yè)部昆蟲病理實(shí)驗(yàn)室Weiss等人開發(fā),用于大規(guī)模擴(kuò)增草地貪夜蛾衍生細(xì)胞系。Weiss向基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入了胎牛血清和TPB培養(yǎng)基(TryptosePhosphateBroth),成功地實(shí)現(xiàn)了IPL-21AE。MEM α 培養(yǎng)基不含核苷和脫氧核苷的MEM α培養(yǎng)基常常用作DG44和其他DHFR-缺陷型細(xì)胞的篩選培養(yǎng)基。浙江正規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)基生產(chǎn)產(chǎn)家

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    1.細(xì)胞培養(yǎng)基的種類按照細(xì)胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史,細(xì)胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液、天然細(xì)胞培養(yǎng)基、合成細(xì)胞培養(yǎng)基、無血清細(xì)胞培養(yǎng)基、限定化學(xué)成分細(xì)胞培養(yǎng)基等幾大種類。(balancedsaltsolution,BSS)BSS主要是由無機(jī)鹽、葡萄糖組成,它的作用是維持細(xì)胞滲透壓平衡,保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng)。其主要用于細(xì)胞的漂洗、配制其他試劑等。幾種常用的BSS配方如下(表1-1)。D-Hank's與Hank's的一個(gè)主要區(qū)別是前者不含有Ca2+和Mg2+,因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。因?yàn)镃a2+、Mg2+是細(xì)胞膜的重要組成成份,參與細(xì)胞粘附等功能,使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免細(xì)胞結(jié)團(tuán)。此外,Hanks液和Earle液是常用的BSS基礎(chǔ)溶液,前者緩沖能力較弱,適合于密閉培養(yǎng);后者緩沖能力較強(qiáng),適合于5%CO2的培養(yǎng)條件。天然培養(yǎng)基指來自動(dòng)物體液或利用組織分離提取的一類培養(yǎng)基,如血漿、血清、雞胚浸出液等。其優(yōu)點(diǎn)是營養(yǎng)成分豐富,培養(yǎng)效果良好,但缺點(diǎn)是成分復(fù)雜,來源受限且制作過程復(fù)雜、批間差異大。目前使用的天然培養(yǎng)基是血清,另外各種組織提取液、促進(jìn)細(xì)胞貼壁的膠原類物質(zhì)在培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也是必不可少。水解乳蛋白是乳白蛋白經(jīng)蛋白酶和肽酶水解的產(chǎn)物。海南昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)基源頭直供L-谷氨酰胺是細(xì)胞培養(yǎng)中所必需的一種營養(yǎng)元素,但其在溶液中不穩(wěn)定,會(huì)自發(fā)降解,不含L-谷氨酰胺的培養(yǎng)基。

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    Leibovitz’sL-15培養(yǎng)基的緩沖系統(tǒng)由磷酸鹽和游離堿基氨基酸組成,代替了傳統(tǒng)的碳酸氫鈉緩沖系統(tǒng),同時(shí),用半乳糖和**酸鈉代替葡萄糖可以防止酸性代謝副產(chǎn)物的形成,有助于維持培養(yǎng)液PH的穩(wěn)定,適合用于非CO2平衡環(huán)境的細(xì)胞培養(yǎng)。Leibovitz’sL-15培養(yǎng)基適用于猴腎細(xì)胞和HEP-2的培養(yǎng)、原代(如胚胎和成人組織)細(xì)胞分離、多種病毒的培養(yǎng)以及神經(jīng)元的培養(yǎng)等。L-谷氨酰胺(Glutamine)是細(xì)胞培養(yǎng)中所必需的一種營養(yǎng)元素,但其在溶液中不穩(wěn)定,會(huì)自發(fā)降解,不含L-谷氨酰胺的培養(yǎng)基,可以根據(jù)研究需要任意調(diào)整L-谷氨酰胺的用量,在使用時(shí)添加新鮮的L-谷氨酰胺或其替代物更利于細(xì)胞的生長。

BME培養(yǎng)基全稱BasalMediumEagle,由HarryEagle于1955年設(shè)計(jì)的,**初用于Hela細(xì)胞和小鼠成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)。BME培養(yǎng)基以BSS為基礎(chǔ),添加8種維生素,13種氨基酸,成分簡單,適用于各種細(xì)胞系和特殊研究,是細(xì)胞培養(yǎng)中**常用的培養(yǎng)基之一。此外,BME培養(yǎng)基還是其他許多培養(yǎng)基的基礎(chǔ),如MEM、DMEM、Glasgow’s等均是在BME基礎(chǔ)上改良的培養(yǎng)基。本產(chǎn)品含有多類細(xì)胞培養(yǎng)所需的氨基酸、維生素、無機(jī)鹽等多種成分,但不含蛋白質(zhì)、脂類或任何生長因子,故此產(chǎn)品需搭配血清或無血清添加物使用。

注意事項(xiàng)

本產(chǎn)品經(jīng)過濾除菌,使用時(shí)應(yīng)注意無菌操作,避免污染;

為保持本產(chǎn)品的比較好使用效果,請(qǐng)勿進(jìn)行凍融處理;

本產(chǎn)品用于科研或進(jìn)一步研究使用,不用于診斷。 MCDB131是MCDB培養(yǎng)基的一種,是由Knedler和Ham設(shè)計(jì)開發(fā)出來的,初用于培養(yǎng)人微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HMVEC)。

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    培養(yǎng)液的滲透壓是一個(gè)非常重要的因素,細(xì)胞通常可耐受260mOsm/kg~320mOsm/kg。標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)液的滲透壓在此范圍內(nèi)波動(dòng)。特別注意:向培養(yǎng)液中加入其它物質(zhì)有可能會(huì)明顯改變培養(yǎng)液的滲透壓,特別是溶于強(qiáng)酸或強(qiáng)堿中的物質(zhì)。向培養(yǎng)液中添加HEPES時(shí)需按以下方法調(diào)節(jié)鈉離子濃度。緩沖系統(tǒng)大多數(shù)細(xì)胞所需pH在-。但是,細(xì)胞培養(yǎng)適pH值隨培養(yǎng)的細(xì)胞種類不同而不同。成纖維細(xì)胞喜歡較高pH(-),而傳代轉(zhuǎn)化細(xì)胞系則需要偏酸pH(-)。由于多數(shù)培養(yǎng)液靠碳酸氫鈉(NaHCO3)與CO2體系進(jìn)行緩沖,因此,氣相中的CO2濃度應(yīng)與培養(yǎng)液中碳酸氫鈉濃度相平衡。如果氣相或培養(yǎng)箱空氣中CO2濃度設(shè)定在5%,培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量為;如果CO2濃度維持在10%,培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量為。細(xì)胞培養(yǎng)瓶蓋不應(yīng)擰得太緊,以保證氣體交換。HEPES是一種非離子緩沖液,在pH-范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力,但是非常昂貴,在高濃度時(shí)對(duì)一些細(xì)胞可能有毒。HEPES緩沖液可與低水平的碳酸鈉()共用,以抵消因額外加入HEPES引起的滲透壓增加。在這種培養(yǎng)條件下,細(xì)胞培養(yǎng)瓶的蓋子應(yīng)擰緊,以防止培養(yǎng)液中所需的少量碳酸鹽散入空氣中。大多數(shù)培養(yǎng)液中含有酚紅作為pH指示劑,酸性培養(yǎng)液呈橙黃色,堿性培養(yǎng)液呈深紅色。MEM培養(yǎng)基含有12種必需氨基酸、谷氨酰胺和8種維生素,主用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),修改后也可用于其他細(xì)胞培養(yǎng)。海南昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)基源頭直供

Dulbecco’s 改良培養(yǎng)基與MEM培養(yǎng)基相比,氨基酸的含量增加了2倍,維生素的含量增加了4倍。浙江正規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)基生產(chǎn)產(chǎn)家

    Dulbecco’s改良培養(yǎng)基–DMEM(Dulbecco’sModifiedEagleMedium)是在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上研制的,與MEM培養(yǎng)基相比,氨基酸的含量增加了2倍,維生素的含量增加了4倍,同時(shí)還增加了非必須氨基酸、微量鐵離子以及**酸鈉。DMEM培養(yǎng)基初設(shè)計(jì)葡萄糖含量為1000mg/L(低糖型),后來又發(fā)展出葡萄糖含量為4500mg/L(高糖型),現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于各種細(xì)胞的培養(yǎng)。HEPES是一種優(yōu)良的生物緩沖劑,對(duì)細(xì)胞無毒性作用,添加HEPES的培養(yǎng)基能夠較長時(shí)間保持恒定的PH范圍,可以有效的防止培養(yǎng)液PH波動(dòng)較大對(duì)細(xì)胞生長產(chǎn)生不利的影響。可用于無CO2培養(yǎng)箱。酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值的指示劑,用以持續(xù)監(jiān)測培養(yǎng)液的酸堿度,在低PH值時(shí)酚紅使培養(yǎng)液呈黃色,而較高的PH值時(shí)使培養(yǎng)液呈紫色,PH值~,適合細(xì)胞培養(yǎng)。但酚紅也有一些缺點(diǎn),研究表明酚紅可以模擬固醇類***(特別是雌***)的作用,因此在用到雌***敏感的細(xì)胞時(shí)(如乳腺組織),較好使用不含酚紅的培養(yǎng)基。酚紅會(huì)干擾流式細(xì)胞分析時(shí)候的檢測。此外,一些無血清培養(yǎng)基的配方中若存在酚紅會(huì)干擾鈉-鉀平衡。 浙江正規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)基生產(chǎn)產(chǎn)家

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