細胞轉染操作方法:轉染,是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入,轉染目前已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例;化學介導方法很多,如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術;生物介導方法,有較為原始的原生質體轉染,和現在比較多見的各種細菌介導的轉染技術。理想細胞轉染方法,應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優點。細菌介導的轉染技術,是目前轉染效率較高的方法,同時具有細胞毒性很低的優勢。由于脂質體對細胞有一定的毒性,所以轉染時間一般不超...
細胞轉染效率低下的幾個大坑:1.不注意細節在轉染之前更換一次37℃預溫的培養基,可提高轉染效率。脂質體和DNA/RNA混合物應當一滴一滴地滴下來,從培養皿一邊滴到另一邊,邊滴邊輕搖培養皿,以確保均勻分布和避免局部高濃度。這些都是一些細枝末節,但是,如果不注意的話,也會造成轉染效率低下。2.細胞狀態不好細胞狀態不好,會導致轉染效率低下。一般進行轉染的細胞應該處于對數生長期。如果是貼壁細胞的話,貼壁率應該在70-80%;如果是懸浮細胞的話,應該是6X105個/孔(24孔板),一般是轉染前現在換液,轉染前用無血清培養基或PBS洗細胞一次。轉染的整個過程都不應該有物品。再通過融合或細胞內吞進入細胞。天...
細胞轉染實驗簡介:實驗原理外源基因進入細胞主要有四種方法:電擊法、磷酸鈣法和脂質體介導法和細菌介導法。電擊法是在細胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質粒進入;磷酸鈣法和脂質體法是利用不同的載體物質攜帶質粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進入細胞;細菌法是利用包裝了外源基因的細菌傳染細胞的方法使得其進入細胞。但是由于電擊法和磷酸鈣法的實驗條件控制較嚴、難度較大;細菌法的前期準備較復雜、而且可能對于細胞有較大影響;所以現在對于很多普通細胞系,一般的瞬時轉染方法多采用脂質體法~在現生命可續研究中,大部分的工作是利用基因功能研究來探索生命過程。上海廣州細胞高效轉染試劑細胞轉染簡介:轉染,是將外源性基...
細胞轉染的注意事項:1.細胞鋪板密度用于轉染的較佳細胞密度根據不同的細胞類型或應用而異。因轉染試劑對細胞有毒害作用,細胞太少,容易死。一般轉染時,貼壁細胞密度為70%-90%,懸浮細胞密度為2-4×106細胞/ml,確保轉染時細胞沒有長滿或處于靜止期。因為轉染效率對細胞密度很敏感,所以在不同實驗間保持一個基本的傳代步驟很重要。鋪板細胞數目的增加可以增加轉染活性和細胞產量。細胞的融合度必須要達到90%才能做啟動子的選擇獲得高轉染活性所需選擇的啟動子依賴于選用的細胞系和要表達的蛋白。CMV啟動子在大多數細胞類型中可以獲得高表達活性。同其他啟動子,如SV40和RSV(勞斯肉瘤細菌)相比,在BHK-2...
如何提高細胞轉染實驗效率:優化細胞生長狀態密切觀察您的細胞;確保它們狀態良好。在開始轉染細胞之前,先制定一個適當的種板方案,使細胞密度從轉染開始到結束都保持較佳狀態。增加成功幾率—細胞是轉染過程中的一個關鍵元素,它可以是影響結果的一致性和質量的較重要的變量。此外,還常用促有絲分裂刺激物(如,細菌轉化,生長因子,條件培養基,以及滋養細胞)來活化原代培養細胞。貼壁細胞相比較懸浮細胞—在轉染效率方面貼壁細胞和懸浮細胞之間的差異明顯。天生趨于懸浮的細胞(如HL60,Jurkat)非常難以轉染。相反,天生為貼壁的細胞(如HEK,CHO)則可適應懸浮生長的條件。蛋白表達和培養基的選擇哺乳動物細胞系合成可溶...
DNA細胞轉染步驟:1.提前現在細胞鋪板提前現在將細胞種植在24孔板中,以轉染時細胞密度在60%左右為宜。2.轉染過程⑴將0.8μg的DNA用25μl無血清稀釋液稀釋,充分混勻,制成DNA稀釋液。注意:無血清稀釋液建議采用OPTI-MEM、無血清DMEM或1640。⑵將2μlEntransterTM-H4000用25μl無血清稀釋液體稀釋,充分混勻,制成EntransterTM-H4000稀釋液。室溫靜置5分鐘。⑶將EntransterTM-H4000稀釋液分別加入到DNA稀釋液中,充分混勻(可用振蕩器振蕩或用加樣器吹吸10次以上),室溫靜置15分鐘。轉染復合物制備完成。⑷將轉染復合物加入到含...
細胞轉染簡介:轉染,是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入,轉染目前已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例;化學介導方法很多,如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術;生物介導方法,有較為原始的原生質體轉染,和現在比較多見的各種細菌介導的轉染技術。理想細胞轉染方法,應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優點。細菌介導的轉染技術,是目前轉染效率較高的方法,同時具有細胞毒性很低的優勢。但是,細菌轉染方法的準備程序復雜,常常對細胞類型有很強...
細胞轉染操作方法:轉染,是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入,轉染目前已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例;化學介導方法很多,如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術;生物介導方法,有較為原始的原生質體轉染,和現在比較多見的各種細菌介導的轉染技術。理想細胞轉染方法,應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優點。細菌介導的轉染技術,是目前轉染效率較高的方法,同時具有細胞毒性很低的優勢。但是,細菌轉染方法的準備程序復雜,常常對細胞類型有...
細胞轉染操作方法:轉染,是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入,轉染目前已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例;化學介導方法很多,如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術;生物介導方法,有較為原始的原生質體轉染,和現在比較多見的各種細菌介導的轉染技術。理想細胞轉染方法,應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優點。細菌介導的轉染技術,是目前轉染效率較高的方法,同時具有細胞毒性很低的優勢。但是,細菌轉染方法的準備程序復雜,常常對細胞類型有...
細胞轉染效率低下的幾個大坑:1.試劑過期有時候轉染效率低下,還要考慮會不會存在試劑過期的情況。毛博當年做轉染整整半年,百思不得其解。較后發現,原來是Lipofectamine2000過期了。換了之后,立馬成功。根據我的經驗,盡量使用開封半年內的,因為過了半年后,就算沒有過失效期,但是細胞毒性較大增加,而轉染效率卻較大下降。千萬不要為了省錢,影響實驗進度哈。2.未加血清轉染后未及時加入血清,會導致細胞大量死亡。一般要在轉染后的4-6小時換液且換為有血清的培養基。根據毛博的經驗,其實也可以在原來的無血清培養基里面滴加血清。這個時候,較好不要換液,不要打擾細胞,讓它安安靜靜地休息。但是也不能過早加入...
細胞轉染的常用方法:磷酸鈣共沉淀原理:該法可用于瞬時或穩定轉染。然而因其對pH、溫度和緩沖液鹽濃度的微小變化十分敏感,所得結果容易出現差異,且對許多類型的細胞培養物(尤其是原代細胞)具有細胞毒性,轉染效率較差。實驗步驟:將核酸與氯化鈣在磷酸鹽緩沖液中混合,同時控制好pH、溫度等條件→室溫孵育,生成濃縮DNA的極小不溶性顆粒沉淀→將顆粒型沉淀分散到細胞中,促進DNA粘附在細胞表面→共沉淀通過內吞作用進入胞漿→分析細胞瞬時基因表達或者選擇穩定性傳染。瞬時表達分析檢測未重組質粒DNA上基因的表達。太原細胞高效轉染試劑細胞轉染之PEI轉染法:1.細胞分盤:通過胰酶消化收集細胞,用適當的完全培養基以1×...
細胞轉染效率低下的幾個大坑:1.不注意細節在轉染之前更換一次37℃預溫的培養基,可提高轉染效率。脂質體和DNA/RNA混合物應當一滴一滴地滴下來,從培養皿一邊滴到另一邊,邊滴邊輕搖培養皿,以確保均勻分布和避免局部高濃度。這些都是一些細枝末節,但是,如果不注意的話,也會造成轉染效率低下。2.細胞狀態不好細胞狀態不好,會導致轉染效率低下。一般進行轉染的細胞應該處于對數生長期。如果是貼壁細胞的話,貼壁率應該在70-80%;如果是懸浮細胞的話,應該是6X105個/孔(24孔板),一般是轉染前現在換液,轉染前用無血清培養基或PBS洗細胞一次。轉染的整個過程都不應該有物品。在轉染過程中是可以使用血清的。濟...
細胞轉染的常用方法:磷酸鈣共沉淀原理:該法可用于瞬時或穩定轉染。然而因其對pH、溫度和緩沖液鹽濃度的微小變化十分敏感,所得結果容易出現差異,且對許多類型的細胞培養物(尤其是原代細胞)具有細胞毒性,轉染效率較差。實驗步驟:將核酸與氯化鈣在磷酸鹽緩沖液中混合,同時控制好pH、溫度等條件→室溫孵育,生成濃縮DNA的極小不溶性顆粒沉淀→將顆粒型沉淀分散到細胞中,促進DNA粘附在細胞表面→共沉淀通過內吞作用進入胞漿→分析細胞瞬時基因表達或者選擇穩定性傳染。細胞易于生長到高密度并合成更多蛋白。杭州正規細胞高效轉染試劑銷售廠家細胞轉染的注意事項:轉染是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。分為物理介導方法:...
細胞轉染之PEI轉染法:1.細胞分盤:通過胰酶消化收集細胞,用適當的完全培養基以1×105至4×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于35mm培養皿上(根據實驗需要選擇培養皿,使細胞貼壁后所占面積達到培養皿總面積的70-90%)。將細胞置于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當細胞貼壁完全后即可開始轉染。轉染前2h換液(用1.5ml無血清培養基置換舊的培養基)。注:PEI轉染法對細胞生長有克制作用,在換液前細胞幾乎不生長,所以需要密度比較大時做轉染。2.制備PEI-DNA混合物以35mm組織培養皿用240μl反應總體積為例。先在無菌EP管中加入120μl1×HBS,再加入質粒DNA(總量1-...
轉染的注意事項:培養基中的物品物品,比如青霉素和鏈霉素,是影響轉染的培養基添加物。這些物品一般對于真核細胞無毒,但陽離子脂質體試劑增加了細胞的通透性,使物品可以進入細胞。這降低了細胞的活性,導致轉染效率低。所以,在轉染培養基中不能使用物品,甚至在準備轉染前進行細胞鋪板時也要避免使用物品。這樣,在轉染前也不必潤洗細胞。對于穩定轉染,不要在選擇性培養基中使用青霉素和鏈霉素,因為這些物品是GENETICIN選擇性物品的競爭性克制劑。另外,為了保證無血清培養基中細胞的健康生長,使用比含血清培養基更少的物品量。大多數已建立的細胞系都是非整倍體,原代培養包括了表達不同基因組合的細胞的混合物。細胞培養在實驗...
細胞轉染簡介:轉染,是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入,轉染目前已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例;化學介導方法很多,如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術;生物介導方法,有較為原始的原生質體轉染,和現在比較多見的各種細菌介導的轉染技術。理想細胞轉染方法,應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優點。細菌介導的轉染技術,是目前轉染效率較高的方法,同時具有細胞毒性很低的優勢。但是,細菌轉染方法的準備程序復雜,常常對細胞類型有很強...
細胞轉染為什么不能加血清:不同的細胞及轉染試劑要求轉染的條件是不同的。較好是在靠前次實驗前做一個預實驗,比如:HeLa,293,CHO,COS7,MCF-7,HepG2等細胞,是否加血清,對不同的細胞是有不同的影響的,有些細胞是可以有血清的,有些加血清就會受影響。轉染后在6小時左右較好換液且換為有血清的培養基,其一因為普通轉染試劑對細胞的毒性作用大,其二可降低因血清的缺乏引起的細胞的死亡。轉染時不加血清是防止血清的干擾作用,轉染后可適時加入。加入過早會引起未轉染細胞的優勢生長,過晚會引起較多細胞死亡??蓪崟r觀察1/5細胞變圓的時候加入血清在現生命可續研究中,大部分的工作是利用基因功能研究來探索...
具有細胞毒性極低、轉染后細胞存活率高,生成可信任的生理學相關數據。2.操作簡便、節省時間,只需對X-tremeGENE9DNA轉染試劑進行簡單稀釋,再與質粒DNA共同孵育,即可直接向細胞添加反應混合物(有無血清均可)。3.對于常用細胞無需進行費時費力的優化工作。X-tremeGENEHPDNA轉染試劑簡介:X-tremeGENEHPDNA轉染試劑是一種高效的無動物源成分的低毒轉染試劑,兼容含血清或不含血清的培養基,可用于轉染各類真核細胞(包括昆蟲細胞)以及多種難轉染細胞系。優勢:轉染技術轉染是將外源遺傳物質導入真核細胞的過程,是細胞和分子生物學研究的重要工具。唐山細胞高效轉染試劑哪家好細胞轉染...
細胞轉染簡介:轉染,是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入,轉染目前已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例;化學介導方法很多,如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術;生物介導方法,有較為原始的原生質體轉染,和現在比較多見的各種細菌介導的轉染技術。理想細胞轉染方法,應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優點。細菌介導的轉染技術,是目前轉染效率較高的方法,同時具有細胞毒性很低的優勢。是目前實驗室較方便的轉染方法之一,其轉染率較高,優于磷...
轉染技術:國際上推出了一些陽離子聚合物基因轉染技術,以其適用宿主范圍廣,操作簡便,對細胞毒性小,轉染效率高受到研究者們的青睞。其中樹枝狀聚合物(Dendrimers)和聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)的轉染性能較佳,但樹枝狀聚合物的結構不易于進一步改性,且其合成工藝復雜。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子,每相隔二個碳個原子,即每“第三個原子都是質子化的氨基氮原子,使得聚合物網絡在任何pH下都能充當有效的“質子海綿”(protonsponge)體。這種聚陽離子能將各種報告基因轉入各種種屬細胞,其效果好于脂質聚酰胺,經進一步的改性后,其轉染性能好于樹枝狀聚...
細胞轉染的原理、操作步驟以及小技巧:一、脂質體(Liposome)轉染方法原理脂質體作為體內和體外輸送載體的工具,已經研究的十分普遍,中性脂質體是利用脂質膜包裹DNA,借助脂質膜將DNA導入細胞膜內。帶正電的陽離子脂質體,DNA并沒有預先包埋在脂質體中,而是帶負電的DNA自動結合到帶正電的脂質體上,形成DNA-陽離子脂質體復合物,從而吸附到帶負電的細胞膜表面,經過內吞被導入細胞。優點:與其它方法相比,有較高的效率和較好的重復性,它適用于把DNA轉染入懸浮或貼壁培養細胞中,是目前條件下較方便的轉染方法之一。操作簡便,對細胞毒性小,轉染效率高受到研究者們的青睞。蕪湖細胞高效轉染試劑產品介紹細胞轉染...
細胞轉染操作方法:轉染,是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入,轉染目前已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例;化學介導方法很多,如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術;生物介導方法,有較為原始的原生質體轉染,和現在比較多見的各種細菌介導的轉染技術。理想細胞轉染方法,應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優點。細菌介導的轉染技術,是目前轉染效率較高的方法,同時具有細胞毒性很低的優勢。但是,細菌轉染方法的準備程序復雜,常常對細胞類型有...
細胞轉染的常用方法:磷酸鈣共沉淀原理:該法可用于瞬時或穩定轉染。然而因其對pH、溫度和緩沖液鹽濃度的微小變化十分敏感,所得結果容易出現差異,且對許多類型的細胞培養物(尤其是原代細胞)具有細胞毒性,轉染效率較差。實驗步驟:將核酸與氯化鈣在磷酸鹽緩沖液中混合,同時控制好pH、溫度等條件→室溫孵育,生成濃縮DNA的極小不溶性顆粒沉淀→將顆粒型沉淀分散到細胞中,促進DNA粘附在細胞表面→共沉淀通過內吞作用進入胞漿→分析細胞瞬時基因表達或者選擇穩定性傳染。一般的瞬時轉染 方法多采用脂質體法。蕪湖細胞高效轉染試劑供應商細胞轉染之PEI轉染法:1.細胞分盤:通過胰酶消化收集細胞,用適當的完全培養基以1×10...
細胞轉染的注意事項:細胞狀態這點非常重要,不要急于求成,一定要讓細胞處于較佳的生長狀態再做。有文獻說傳代不要超過17代。細胞復蘇后的3代左右時細胞狀態較好,不要用傳了很多代的細胞去做,細胞的形態都會發生變化。大多數已建立的細胞系都是非整倍體,原代培養包括了表達不同基因組合的細胞的混合物。細胞培養在實驗室中保存數月和數年后會經歷突變,總染色體重組或基因調控變化等而演化。這會導致和轉染相關的細胞行為的變化。如果隨時間發現這種變化,融化一管新鮮的細胞可能會恢復原先的轉染活性。因此,如果觀察到轉染效率降低,可以試著轉染新鮮培養的細胞以恢復較佳結果?;蛘?,幾種來源于經篩選,轉染效率較高細胞亞系的細胞系現...
細胞轉染實驗注意事項:1.如為貼壁生長細胞,一般要求在轉染前一日,必須應用胰酶處理成單細胞懸液,重新接種于培養皿或瓶,轉染當日的細胞密度以70-90%(貼壁細胞)或2×106-4×106細胞/ml(懸浮細胞)為宜,較好在轉染前4h換一次新鮮培養液。2.用于轉染的質粒DNA必須無蛋白質,無RNA和其他化學物質的污染,OD260/280比值應在1.8以上。3.培養基中的血清在開始準備DNA和陽離子脂質體試劑稀釋液時要使用無血清的培養基,因為血清會影響復合物的形成。其實,只要在DNA-陽離子脂質體復合物形成時不含血清,在轉染過程中是可以使用血清的。瞬時表達分析檢測未重組質粒DNA上基因的表達。無錫細...
轉染的注意事項:培養基中的物品物品,比如青霉素和鏈霉素,是影響轉染的培養基添加物。這些物品一般對于真核細胞無毒,但陽離子脂質體試劑增加了細胞的通透性,使物品可以進入細胞。這降低了細胞的活性,導致轉染效率低。所以,在轉染培養基中不能使用物品,甚至在準備轉染前進行細胞鋪板時也要避免使用物品。這樣,在轉染前也不必潤洗細胞。對于穩定轉染,不要在選擇性培養基中使用青霉素和鏈霉素,因為這些物品是GENETICIN選擇性物品的競爭性克制劑。瞬時表達分析檢測未重組質粒DNA上基因的表達。上海正規細胞高效轉染試劑推薦廠家細胞轉染效率低下的幾個大坑:1.試劑過期有時候轉染效率低下,還要考慮會不會存在試劑過期的情況...
細胞電轉染實驗的幾點建議:1.電場強度要合適合適的電場強度對于電轉染實驗非常重要,電場強度不能過高,過高會增加細胞的死亡率;也不能過低,過低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同細胞系具有不同的較佳場強值,實驗前應測定所轉染細胞系的較佳電場強度。2.細胞狀態要好用于電轉的細胞一般選取處于對數生長期的細胞(15代以內,傳代后2d)。因為處于對數生長期的細胞分裂旺盛,表面結構致密比穩定期的細胞差,電轉后,細胞膜的恢復能力強,而且處于有絲分裂期的細胞更容易接受外源DNA.細胞密度以及轉染的時間長短和培養基中血清的含量都是影響轉染效率的重要因素。溫州正規細胞高效轉染試劑廠家現貨細胞轉染效率低下的幾個...
細胞轉染實驗簡介:實驗原理外源基因進入細胞主要有四種方法:電擊法、磷酸鈣法和脂質體介導法和細菌介導法。電擊法是在細胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質粒進入;磷酸鈣法和脂質體法是利用不同的載體物質攜帶質粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進入細胞;細菌法是利用包裝了外源基因的細菌傳染細胞的方法使得其進入細胞。但是由于電擊法和磷酸鈣法的實驗條件控制較嚴、難度較大;細菌法的前期準備較復雜、而且可能對于細胞有較大影響;所以現在對于很多普通細胞系,一般的瞬時轉染方法多采用脂質體法。瞬時和穩定表達DNA轉染后,轉入基因的表達可以在1-4天內檢測到。唐山正規細胞高效轉染試劑產品介紹細胞轉染,你至少要掌握以...
細胞轉染為什么不能加血清:不同的細胞及轉染試劑要求轉染的條件是不同的。較好是在靠前次實驗前做一個預實驗,比如:HeLa,293,CHO,COS7,MCF-7,HepG2等細胞,是否加血清,對不同的細胞是有不同的影響的,有些細胞是可以有血清的,有些加血清就會受影響。轉染后在6小時左右較好換液且換為有血清的培養基,其一因為普通轉染試劑對細胞的毒性作用大,其二可降低因血清的缺乏引起的細胞的死亡。轉染時不加血清是防止血清的干擾作用,轉染后可適時加入。加入過早會引起未轉染細胞的優勢生長,過晚會引起較多細胞死亡??蓪崟r觀察1/5細胞變圓的時候加入血清在轉染過程中是可以使用血清的。寧波廣州細胞高效轉染試劑細...
細胞轉染效率低下的幾個大坑:1.準備不足做脂質體轉染的時候,在開展正式實驗前要多做預試驗,優化轉染條件。優化轉染條件包括:脂質體的用量、DNA密度、細胞密度、脂質體和DNA混合孵育時間等等。2.電壓過大做電轉的時候,如果電壓太大,往往會發生細胞大量死亡的情況。不同的細胞,需要的電壓是不一樣的。這就要求我們多做預實驗,多摸索條件。對于大多數細胞來說,其較佳電壓位于250-1250v/cm。另外,就是進行轉染的細胞應該處于對數生長期。處于對數生長期的細胞的抗損傷能力是較強的。細胞濃度應該處于5x106到1x107/mL之間。每次轉染的質粒應該控制在4-6μg,如果﹥10μg,轉染效率也較大降低。細...