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江蘇分子檢測(cè)PCR熒光探針法

來源: 發(fā)布時(shí)間:2024-05-28

PCR的工作原理:在TaqDNA聚合酶(熱穩(wěn)定DNA聚合酶)的作用下,由一對(duì)特異性引物經(jīng)熱變性-退火-延伸反應(yīng),三個(gè)不同溫度的循環(huán)處理使得DNA由少量擴(kuò)增到多量的一種體外DNA擴(kuò)增技術(shù)。在反應(yīng)體系內(nèi),以一對(duì)人工合成的寡核苷酸作為擴(kuò)增引物,第一步,模板DNA變性,以構(gòu)成脫氧核糖核酸的四種脫氧核苷酸為底物,目的基因作為模板,在DNA聚合酶的作用下模板DNA經(jīng)過80-90℃高溫變性,使模板DNA雙鏈經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈解離成單鏈。第二步,模板DNA與引物退火(復(fù)性),模板DNA解離成單鏈后溫度降至50-60℃,引物與模板DNA單鏈互補(bǔ)配對(duì)。第三步,引物的延伸,DNA模板-引物結(jié)合物在DNA聚合酶作用下,70-75℃以dNTP為反應(yīng)原料半保留復(fù)制合成一條新的模板DNA鏈。這三個(gè)步驟為一個(gè)循環(huán),2-4分鐘即可完成一個(gè)循環(huán),2-3小時(shí)就能使極微量的DNA、片段、甚至單拷貝基因復(fù)制到幾百萬倍,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)靶DNA的放大。由于擴(kuò)增堿基序列按照靶DNA復(fù)制,因此PCR反應(yīng)具有高度特異性。傳染性疾病在寵物中比較常見,由多種病原體如寄生蟲,細(xì)菌,病毒等引起,且多具有傳染性,死亡率也較高。江蘇分子檢測(cè)PCR熒光探針法

目前市面上有很多PCR儀器,一時(shí)間讓獸醫(yī)師無從選擇,但大多數(shù)都是PCR擴(kuò)增儀,即需要人工進(jìn)行核酸提取和純化。他們都有以下痛點(diǎn):1、核酸提取和純化的操作麻煩并且需要專業(yè)的技術(shù)人員和場(chǎng)地,有些還需要配置高速離心機(jī),人工核酸提取需要30~40分鐘并容易導(dǎo)致污染。2、人工反復(fù)開蓋加入或倒出試劑,容易導(dǎo)致人為和氣溶膠污染,導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確。因此針對(duì)寵物醫(yī)院來說,需要一臺(tái)集核酸提取、純化和擴(kuò)增為一體的全自動(dòng)核酸檢測(cè)儀。能更好的控制人工成本及試劑成本。巧亦捷PCR擴(kuò)增巧亦捷采用的薄膜微流控技術(shù)與核酸檢測(cè)技術(shù)相結(jié)合,特別適用于基因表達(dá)和病原體檢測(cè)等領(lǐng)域。

在寵物醫(yī)療中,目前病毒檢測(cè)主要包括膠體金檢測(cè)(試紙)和PCR檢測(cè)。兩者的區(qū)別:膠體金是針對(duì)病毒蛋白質(zhì)的檢測(cè),PCR檢測(cè)是針對(duì)病毒核酸的檢測(cè)。病毒蛋白質(zhì)和病毒核酸對(duì)于病毒來說都是獨(dú)特的,因此它們都可以確定病毒的身份。但目前醫(yī)學(xué)上無法進(jìn)行病毒蛋白質(zhì)的擴(kuò)增,因此當(dāng)樣本中病毒量少的情況下,就有可能無法找到病毒;而PCR病毒核酸檢測(cè)的關(guān)鍵就在于可以將核酸進(jìn)行不斷地復(fù)制和擴(kuò)增,所以PCR檢測(cè)的靈敏度就更高,更容易在樣本病毒量相對(duì)少的情況下更早地確認(rèn)病毒。假設(shè)一個(gè)樣本病毒量在10萬以上,膠體金技術(shù)和PCR技術(shù)可以同時(shí)檢測(cè)確診陽性;但如果樣本病毒量低于10萬,則只能依靠PCR技術(shù)。

傳統(tǒng)PCR檢測(cè)系統(tǒng)常見的痛點(diǎn):“一是“繁”,即操作繁瑣,需要手動(dòng)進(jìn)行核損提取、純化;二是“專”,即需要專業(yè)操作人員和**的操作臺(tái),耗費(fèi)人力、物力;三是“污”,即因PCR系統(tǒng)靈敏性和特異性高,人員操作,容易污染,導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)。四是“半”,即市面上幾乎所有的PCR儀都是半自動(dòng)。”于是瞄準(zhǔn)這一痛點(diǎn),巧亦捷快速核酸檢測(cè)一體機(jī)正式面世。相較于傳統(tǒng)PCR檢測(cè)系統(tǒng),我們擁有三大特色:一是全自動(dòng):自動(dòng)完成繁瑣的核酸提取+PCR擴(kuò)增,全自動(dòng)核酸提取,手工操作時(shí)間少于1分鐘,至少節(jié)省一個(gè)專業(yè)操作人員。二是全封閉:避免人為干擾,消除人和實(shí)驗(yàn)室的污染,降低對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的高要求。三是可檢測(cè):貓皰疹病毒、貓杯狀病毒、貓冠狀病毒、貓瘟熱病毒、犬瘟熱病毒、犬細(xì)小病毒等多種病原體。巧亦捷是翊新診斷全力打造的、服務(wù)于動(dòng)物體外診斷的產(chǎn)品品牌。

PCR(PolymeraseChainReaction)是一種復(fù)制核酸片段并提高DNA產(chǎn)量的技術(shù),即所謂的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),這種技術(shù)可以在數(shù)小時(shí)內(nèi)大量復(fù)制特定的基因片段。由于其高敏感性和高特異性的特點(diǎn),PCR技術(shù)被應(yīng)用在寵物疾病分子的診斷上,將從疑似患病寵物(血液、眼鼻分泌物、糞便,尿液或腹水)中采樣的極微量病原(細(xì)菌、病毒或寄生蟲)特定核酸片段樣本,透過PCR的方式大量被復(fù)制,再以核酸電泳的方式判讀結(jié)果,從而獲得早期、快速、穩(wěn)定和準(zhǔn)確的診斷結(jié)果.在準(zhǔn)確的前提下,高效顯得尤為重要。江蘇分子檢測(cè)PCR熒光探針法

巧亦捷核酸檢測(cè)一體機(jī)操作非常簡(jiǎn)單,只需要放入樣本就可以了,不需要手工進(jìn)行核酸提取,也避免了樣本污染。江蘇分子檢測(cè)PCR熒光探針法

巧亦捷全自動(dòng)薄膜微流控核酸檢測(cè)儀器擁有多種重技術(shù),保障結(jié)果準(zhǔn)確:其采用Taqman熒光探針和經(jīng)典PCR擴(kuò)增技術(shù),能夠?qū)⑸飿?biāo)志物精確定量,同時(shí)輸出Ct值和擴(kuò)增曲線,結(jié)果判讀簡(jiǎn)潔明了;質(zhì)控更全1面,結(jié)果更可靠,設(shè)備體積小巧,便于搬運(yùn)和攜帶,可在多種場(chǎng)景下隨心使用,且薄膜微流控芯片為封閉系統(tǒng)操作,可很大程度避免人為和環(huán)境的污染,降低對(duì)檢測(cè)環(huán)境的要求,以及對(duì)檢測(cè)人員的要求。更適合寵物醫(yī)院、獸醫(yī)站、養(yǎng)殖場(chǎng)等多種使用場(chǎng)景。江蘇分子檢測(cè)PCR熒光探針法

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