eProteinDiscovery系統：一種將無細胞蛋白合成與數字微流控相結合的快速蛋白質原型系統傳統的蛋白質表達純化流程十分依賴人工操作，并且往往需要幾周甚至更久。無細胞蛋白表達的興起可將這一時間縮短至十幾個小時，但是仍需要現進行表達載體的制備，體外擴增和高通量蛋白表達然后再進行篩選等多步操作。Nuclera將這些復雜的流程ji he到eProteinDiscovery系統。該系統使用基于數字微流控的智能卡盒、無細胞蛋白質合成和熒光蛋白檢測技術，使研究人員更容易大規模獲取高質量蛋白質。只要將目標蛋白質的序列輸入配套軟件，就可以利用預設融合標簽定制DNA構建體以優化表達，然后將表達載體裝載到機器上，該系統就會通過自動化構建篩選（可同時篩24種構建體x8種無細胞混合物=192種表達條件），在48小時內，根據可溶性、可純化性和純化產量數據確定Zui Jia表達條件，然后放大規模并獲取蛋白質以供下游應用。該工作流程jin需3步，可生產18kDa~300kDa的蛋白質，還更容易地篩選和獲取同源物、直系同源物、突變和異構體。添加0.5mM PMSF將 ??體外表達蛋白的降解率??從45%壓制至<5%。gst融合蛋白表達方法

無細胞蛋白表達技術（CFPS）雖然具有快速、靈活等優勢，但仍存在一些關鍵缺點。首先，成本較高，商業化裂解物、能量試劑和酶的價格昂貴，小規模實驗單次反應成本可達數百元，大規模生產的經濟性尚未完全解決。其次，蛋白產量較低，反應通常在幾小時內終止，產量（0.1-1 mg/mL）遠低于細胞表達系統（如大腸桿菌可達10 mg/mL以上）。此外，復雜蛋白表達受限，原核裂解物缺乏真核翻譯后修飾能力（如糖基化），而真核裂解物成本更高；部分蛋白可能因折疊不完全而喪失活性。技術操作上，反應條件（pH、離子強度等）需精細調控，且線性DNA模板易降解，增加了實驗難度。CFPS目前更適合小規模應用，在超長蛋白（>100 kDa）表達和工業化連續生產方面仍面臨挑戰。未來需通過開發低成本試劑、優化能量再生系統和自動化工藝來突破這些瓶頸。目的蛋白表達系統芯片級體外蛋白表達??體現較前沿的進展。

無細胞蛋白表達技術（CFPS）的he xin優勢在于其高效性、靈活性和較廣的適用性。與傳統細胞表達系統相比，CFPS無需繁瑣的細胞培養和基因轉染步驟，可在數小時內完成蛋白質合成，速度提升5-10倍，特別適合快速研發需求。該系統采用開放的反應體系，允許直接添加非天然氨基酸、同位素標記物或翻譯調控因子，為定制化蛋白（如抗體藥物偶聯物、熒光標記蛋白）的合成提供了獨特優勢。此外，CFPS能夠高效表達傳統細胞系統難以生產的毒性蛋白、膜蛋白或易被蛋白酶降解的蛋白，解決了細胞表達中的存活率問題。由于反應條件完全可控，研究人員可實時優化溫度、pH和底物濃度等參數，明顯提高復雜蛋白的可溶性和活性。這些特點使CFPS成為藥物開發、合成生物學和蛋白質工程領域的重要工具，尤其適用于小批量、高難度蛋白的快速制備和篩選。

凋亡因子（如caspase-3）、細菌du su（如白喉du suA鏈）在細胞內表達會引發宿主死亡。體外蛋白表達系統通過無細胞環境規避毒性效應：在添加線粒體膜組分的兔網織紅細胞裂解物中，全長BAX蛋白（21kDa）表達量達0.8mg/mL，并成功模擬其介導的細胞色素C釋放過程（CellDeathDiffer.,2024）。該系統還可表達HIV蛋白酶（活性>95%），用于高通量抑制劑篩選，加速抗病毒藥物開發。真he dan白的糖基化修飾（如抗體Fc段N-糖）是zhi liao性蛋白功能的he xin。傳統體外蛋白表達因缺乏高爾基體，糖基化效率不足5%。突破性方案是在HEK293裂解物中添加重組糖基轉移酶復合體（含GnT-I、GnT-II、FUT8），使曲妥珠單抗的復雜雙觸角糖型比例升至80%（Science,2022）。結合UDP-GlcNAc底物連續補料，糖均一性（G0F:G2F=1:1.2）媲美哺乳細胞表達，為下一代抗體偶聯藥物（ADC）提供新生產路徑。不用養細胞，直接拿細胞內部的“機器”（核糖體+酶）??在試管里進行蛋白表達??。

eProtein Discovery系統：一種將無細胞蛋白合成與數字微流控相結合的快速蛋白質原型系統。

傳統的蛋白質表達純化流程十分依賴人工操作，并且往往需要幾周甚至更久。無細胞蛋白表達的興起可將這一時間縮短至十幾個小時，但是仍需要現進行表達載體的制備，體外擴增和高通量蛋白表達然后再進行篩選等多步操作。Nuclera將這些復雜的流程集成到eProtein Discovery系統。該系統使用基于數字微流控的智能卡盒、無細胞蛋白質合成和熒光蛋白檢測技術，使研究人員更容易大規模獲取高質量蛋白質。 使用T7 RNA聚合酶合成加帽mRNA，可提升??真核體外蛋白表達??效率。hek293蛋白表達系統

添加 2 mM 鎂離子可使 ??大腸桿菌體外蛋白表達??產量提高 60%。gst融合蛋白表達方法

nuclera 高通量微流控蛋白表達篩選eProtein Discovery系統

1、從DNA到106μg純化蛋白的時間不到48小時

2、Biacore檢測證實VEGF165與貝伐珠單抗結合具有功能活性，親和力達36pM通過eProteinDiscovery系統進行快速無細胞蛋白表達與純化篩選，次日即可進行蛋白放大生產，這一組合縮短了獲取高質量蛋白以在Biacore系統上進行功能驗證的時間。英國Nuclera公司由劍橋大學的博士生們于2013年創立。在撰寫論文期間，他們發現蛋白質難以獲取的問題是生物學領域的首要障礙和關鍵瓶頸。他們著手解決蛋白質難以獲取的問題，以期改善人類健康狀況。公司的愿景是打造出從DNA到蛋白質的原型設計系統，以減少在藥物發現計劃中獲得靶蛋白的時間和障礙。上海曼博生物是Nuclera品牌的官方代理商。 gst融合蛋白表達方法