小鼠aNSCs與腦類***的CERO培養(yǎng)進展優(yōu)勢

來源：發(fā)布時間：2025-12-15

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基于CERO生物反應器建立小鼠aNSC培養(yǎng)體系***將CERO 生物反應器應用于小鼠 aNSCs 培養(yǎng)、腦類***開發(fā)及腦*組裝體構建，通過與傳統(tǒng) 6 孔懸浮培養(yǎng)板、96 孔 ULA 板對比，在可擴展性（單管容量達 5000 萬細胞、支持 200 + 類***培養(yǎng)）、生長動力學（細胞傳代頻率降低 2-4 倍、類***尺寸均勻）、長期培養(yǎng)穩(wěn)定性（培養(yǎng)時長超 5 個月，較傳統(tǒng)方法延長 1.6 倍）三大維度展現(xiàn)***優(yōu)勢，還成功構建出相互連接表面積超 50% 的腦聚集體模型，人工操作減少 50%，為相關研究提供更可靠的 3D 培養(yǎng)體系。

一、項目概述

項目定位：***將CERO 生物反應器應用于小鼠成年神經干細胞（aNSCs）培養(yǎng)、腦類***開發(fā)及腦*組裝體構建，填補其在小鼠 aNSCs 培養(yǎng)中的應用空白。**背景：傳統(tǒng) 3D 培養(yǎng)方法缺乏高級研究所需的可重復性，而可重復的 3R（替代、減少、優(yōu)化）3D 培養(yǎng)系統(tǒng)需求日益迫切，項目與 OLS 合作驗證 CERO 的應用價值。

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二、**優(yōu)勢對比（CERO vs 傳統(tǒng)培養(yǎng)方法）

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三、腦聚集體培養(yǎng)的關鍵突破

l 傳統(tǒng)局限：腦類***與*細胞球體的共培養(yǎng)模型（腦聚集體）中，兩者接觸面積極低（<10%），無法模擬腦*被健康腦組織包圍的臨床實際環(huán)境。

l CERO 解決方案：成功構建相互連接表面積超過 50% 的聚集體模型，精細模擬**侵襲過程（H&E 染色顯示腦類***向**組織外側生長超半數）。

l 性能提升：Ki-67 染色顯示膠質瘤及類***組織均有增殖活性，Cas-3 染色表明細胞凋亡減少，存活率顯著提高，模型更穩(wěn)定持久。

四、操作流程概要

1. 預培養(yǎng)：將先前分化的腦類***與 GL261 膠質瘤球體（10,000 個細胞 / 孔）接種于 96 孔 ULA 板，預培養(yǎng) 3 天。

2. 共培養(yǎng)：轉移至新 96 孔 ULA 板，72 小時內形成細胞間緊密連接。

3. 分組培養(yǎng)：72 小時后，半數聚集體轉移至 CERO 管，另一半保留在 96 孔 ULA 板，繼續(xù)培養(yǎng) 48 小時（累計 120 小時）。分析：對組裝體進行固定、切片，采用 H&E、Ki-67（增殖標記物）、Cas-3（凋亡標記物）染色分析。

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五、項目價值

CERO 生物反應器***提升了類***和腦聚集體的培養(yǎng)效率與質量，減少人工操作，為腦*等相關疾病的體內研究提供了更貼近臨床實際的替代模型，開辟了新的研究途徑。

關鍵問題

問題 1：CERO 生物反應器在長期培養(yǎng)穩(wěn)定性方面，較傳統(tǒng) 6 孔懸浮培養(yǎng)板有哪些**提升？

答案：傳統(tǒng) 6 孔懸浮培養(yǎng)板*能穩(wěn)定培養(yǎng) 3 個月，之后類***存活率下降、出現(xiàn)凋亡**；CERO 可實現(xiàn)超 5 個月的穩(wěn)定培養(yǎng)（延長 1.6 倍），類***保持活性、**持續(xù)增殖，形態(tài)圓潤均勻，無需更新培養(yǎng)基，大幅提升長期研究的可行性。

問題 2：該項目在腦聚集體培養(yǎng)中，解決了傳統(tǒng)模型的什么**痛點？實現(xiàn)了怎樣的關鍵突破？

答案：傳統(tǒng)腦聚集體模型的**痛點是腦類***與*細胞球體接觸面積極低（<10%），無法模擬腦*被健康腦組織包圍的臨床微環(huán)境；CERO 的關鍵突破是構建出相互連接表面積超過 50% 的聚集體模型，精細再現(xiàn)** - 組織相互作用，且細胞凋亡減少、增殖活性提升，模型穩(wěn)定性更強。

問題 3：CERO 生物反應器在可擴展性和人工操作方面，較傳統(tǒng)培養(yǎng)方法的具體優(yōu)勢數據是什么？

答案：可擴展性上，CERO 單管培養(yǎng)容量達5000 萬細胞，支持200 + 類***培養(yǎng)，較 6 孔板（每孔 10-30 個類***）容量提升 20 倍，單位面積支持的類***數量提升 15 倍；人工操作上，較孔板培養(yǎng)減少50% 的培養(yǎng)基更換次數及操作時間，***提升培養(yǎng)效率。

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