AAV病毒滴度通常分為物理滴度和infection滴度。物理滴度一般是指基因組滴度或者衣殼滴度。在測定AAV的含量時,通常采用基因組滴度或者衣殼滴度作為單位,其中基因組滴度為攜帶基因組的AAV的濃度,衣殼滴度為AAV物理顆粒的濃度。基因組滴度一般采用qPCR、ddPCR、染料法、UV/Vis等方法來測定;衣殼滴度主要是通過ELISA、HPLC等方法來測定。AAV基因組滴度檢測的關鍵在于盡可能徹底去除AAV衣殼外的HCD殘留,減少污染核酸對qPCR或ddPCR的影響。經典方法是加入常規核酸酶(如Dnase I、Benzonase等)消化AAV衣殼外的HCD殘留,然后加入Proteinase K破碎病毒衣殼,進行后續檢測。經過對比發現,用SAN HQ高鹽核酸酶替代常規核酸酶處理AAV病毒,能夠更高效去除衣殼外的核酸殘留,qPCR或ddPCR結果重復性更高、更穩定。一個美國客戶對SAN HQ高鹽核酸酶純化病毒載體的效率進行了評估。江蘇70960-001高鹽核酸酶聯系方式

細胞基因藥物的基因遞送有病毒及非病毒兩種方式,其中病毒遞送更為常用。在病毒遞送路徑中,腺相關病毒(AAV)和慢病毒(Lentivirus)是常用的兩種載體;差別是病毒基因組的存在形式,AAV的基因組一般不整合到染色體中,以游離形式存在于染色體之外,且一般會表達數年之久;而慢病毒的基因組則會整合到染色體達到長期持續表達的目的。此外,其它用于基因藥物的病毒載體有單純皰疹病毒(HSV)、痘苗病毒(Vaccina Virus)、痘病毒(Poxviruses)。河北倍篤生物高鹽核酸酶銷售電話衢州高鹽核酸酶售后服務哪家好呢,歡迎咨詢上海倍篤生物 。

在不同的鹽濃度條件下,AAV病毒載體的存在形式不同。低鹽濃度條件下,AAV病毒顆粒表面會通過電荷作用等非特異結合到HCD上,從而產生病毒顆粒團聚現象。隨著溶液鹽濃度上升,AAV病毒顆粒與HCD的離子相互作用會被破壞,AAV病毒顆粒會逐漸解離。當鹽濃度升到更高范圍(>400mM左右),AAV病毒顆粒與HCD的結合更弱,AAV顆粒更穩定。因此,在高鹽濃度溶液中,AAV顆粒更加穩定,且有數據表明高鹽濃度不會削弱AAV的侵染能力。所以,我們推薦提高AAV病毒生產中的鹽濃度。
在生物工藝流程中,需要使用核酸酶去除終產品中的核酸污染,而核酸酶作為外源成份,也需要在生產流程中去除。核酸酶去除工藝包括熱滅活法、酶抑制劑、離子交換和親合層析法等。AAV衣殼亞種之間因表面電荷的差異導致不同的的等電點,——空衣殼pI在6.3左右,包裝了完整基因組DNA后的病毒顆粒pI大致為5.9。而來自于S.marcescens的全能核酸酶pI 6.85左右,SAN HQ高鹽核酸酶pI 9.6左右。因此,在同樣的條件下,從AAV溶液中去除SAN HQ高鹽核酸酶比去除Benzonase全能核酸酶更容易、更徹底。東臺高鹽核酸酶服務哪家好呢,歡迎咨詢上海倍篤生物 。

一個美國客戶做了對照實驗,比較Benzonase和SAN HQ高鹽核酸酶純化病毒載體的效率。實驗設計如下,HEK293細胞轉染及培養后,分別取了150Million的293細胞進行裂解,分別在各自適宜的條件下(即SAN HQ組反應條件為500mM鹽濃度,而Benzonase組反應條件是150mM鹽濃度)加入等量的酶(0、2kU、3kU、4kU、5kU、6kU),37°孵育1hr,加入Picogreen染料后檢測DNA的殘留量。結果發現,SAN HQ高基因療法制造商面臨的挑戰與抗體療法剛出現時單克隆抗體制造商面臨的挑戰相似。例如,在生產、儲存和處理過程中,單克隆抗體也會受到低滴度、產品和工藝相關雜質和降解的挑戰。盡管與重組單克隆抗體相比,單劑量AAV產品與工藝相關雜質相關的風險可能更低(取決于雜質的類型、劑量和給藥途徑),但這也不能忽視。由于這些相似性,制藥商、化學品和輔料供應商有機會進行合作,并開發創新的解決方案,以實現穩健和成本效益高的AAV產品生產。鹽核酸酶組用更少的酶得到了更好的去除效果(即2kU的SAN HQ消化結果明顯優于6kU的Benzonase),且SAN HQ的高純化效率是非血清型依賴的。江蘇高鹽核酸酶服務哪家好呢,歡迎咨詢上海倍篤生物 。山西基因藥物生產用高鹽核酸酶70921-160
ArcticZymes Technologies成立于20世紀80年代后期,總部位于挪威北部的特羅姆瑟(Troms?)。江蘇70960-001高鹽核酸酶聯系方式
ArcticZymes Technologies有兩條產品線,分別針對分子診斷和生物藥物生產兩個領域。在分子診斷領域,產品有蝦堿酶(SAP)、UNG酶、等溫擴增酶(IsoPol)、連接酶、蛋白酶、內切核酸酶及外切核酸酶等,涉及核酸抽提、擴增及測序等應用。在生物藥物生產領域,全球創新的鹽活性核酸酶(Salt Active Nucleases, SANs)系列產品以其獨特優勢,在細胞基因藥物及RNA藥物生產中表現出更好的性能。其中,鹽活性核酸酶SANs系列產品包含兩款產品,分別是SAN HQ高鹽核酸酶和M-SAN HQ中鹽核酸酶;兩款酶的差別在于發揮酶活的鹽濃度范圍分別是生理鹽濃度范圍和400-600mM高鹽濃度范圍。江蘇70960-001高鹽核酸酶聯系方式