在傳染病診斷領(lǐng)域,均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)主要用于開發(fā)高靈敏的抗原或抗體檢測方法。例如,針對病毒抗原,可以設(shè)計雙抗體夾心法的Alpha檢測,實現(xiàn)快速、高靈敏的定量。在病毒學(xué)基礎(chǔ)研究中,其應(yīng)用更為普遍:假病毒中和試驗(檢測熒光素酶報告基因信號以評估抗體中和能力)、病毒進入抑制篩選、病毒復(fù)制周期關(guān)鍵酶(如蛋白酶、聚合酶)抑制劑篩選等。特別是在COVID-19大流行期間,基于均相化學(xué)發(fā)光原理的高通量中和抗體檢測平臺,為疫苗評價和康復(fù)者血漿篩查提供了關(guān)鍵工具。均相化學(xué)發(fā)光的信號放大機制是怎樣的?浦光生物均相發(fā)光技術(shù)

均相化學(xué)發(fā)光(Homogeneous Chemiluminescence)是將化學(xué)發(fā)光檢測技術(shù)與均相分析理念相結(jié)合的高階檢測范式。其關(guān)鍵在于,生物識別事件(如抗原-抗體結(jié)合、核酸雜交、酶-底物反應(yīng))在完全均勻的液相中發(fā)生,并通過與之偶聯(lián)的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)直接產(chǎn)生光信號,全程無需任何固相分離步驟(如洗滌、離心)。化學(xué)發(fā)光本身是通過化學(xué)反應(yīng)(通常是氧化還原反應(yīng))產(chǎn)生激發(fā)態(tài)中間體,當(dāng)其返回基態(tài)時釋放光子。將這一過程與均相分析結(jié)合,其價值在于實現(xiàn)了檢測的“加法原則”:只需按順序加入樣本和試劑,混合孵育后即可直接測量。這徹底消除了傳統(tǒng)異相分析中復(fù)雜的分離過程,使檢測流程得到變革性簡化,為生命科學(xué)研究和臨床診斷帶來了前所未有的高通量、自動化與操作便捷性。天津技術(shù)升級均相發(fā)光免疫診斷試劑均相化學(xué)發(fā)光在全球體外診斷市場的競爭態(tài)勢如何?

研究蛋白-蛋白相互作用(PPI)對于理解細胞信號網(wǎng)絡(luò)至關(guān)重要。傳統(tǒng)的酵母雙雜交、免疫共沉淀等方法操作復(fù)雜、通量低。以Alpha技術(shù)為表示的均相發(fā)光方法徹底改變了這一局面。將靶蛋白A與供體珠偶聯(lián),互作蛋白B與受體珠偶聯(lián)。當(dāng)A和B在溶液中相互作用時,拉近兩珠產(chǎn)生信號。該方法可在純化蛋白、細胞裂解液甚至活細胞培養(yǎng)基中進行,不只能驗證已知互作,更能用于高通量篩選破壞或促進特定PPI的小分子化合物。其均相特性使得可以實時監(jiān)測互作動力學(xué),研究互作強度,為藥物發(fā)現(xiàn)和基礎(chǔ)生物學(xué)提供了強大工具。
報告基因(如熒光素酶、β-半乳糖苷酶)是研究基因表達調(diào)控的常用工具。傳統(tǒng)的報告基因檢測通常需要細胞裂解和底物孵育多步操作。均相發(fā)光報告基因檢測系統(tǒng)通過使用具有細胞膜滲透性的“前底物”(pro-substrate)或優(yōu)化反應(yīng)條件,實現(xiàn)了“一步加樣”檢測。例如,某些熒光素酶底物配方穩(wěn)定,可直接加入含有細胞的培養(yǎng)液中,細胞裂解和酶反應(yīng)同時發(fā)生,化學(xué)發(fā)光信號在數(shù)分鐘內(nèi)達到平臺期并穩(wěn)定數(shù)小時,便于在微孔板中連續(xù)或批量讀取。這極大簡化了基于報告基因的高通量藥物篩選和信號通路研究流程。均相化學(xué)發(fā)光的檢測速度如何,能否滿足快速診斷需求?

外泌體等細胞外囊泡(EVs)是疾病診斷的潛在生物標(biāo)志物來源。其分離和表征通常繁瑣。均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)提供了快速分析方案。利用EVs表面普遍或特異性表達的膜蛋白(如CD9、CD63、CD81或相關(guān)抗原),將針對不同蛋白的抗體分別偶聯(lián)Alpha供體珠和受體珠。當(dāng)EVs存在時,多個抗體結(jié)合到同一個EV上,拉近微珠產(chǎn)光信號,從而實現(xiàn)EVs的定量。通過使用不同抗體組合,還可以對EVs進行亞群分型分析。這種方法無需超速離心,操作簡單,有望用于臨床樣本的快速篩查。25-羥基維生素D(25 OH-VD)檢測試劑盒(均相化學(xué)發(fā)光法)。吉林診斷試劑均相發(fā)光與普通發(fā)光的區(qū)別
均相化學(xué)發(fā)光在體外診斷領(lǐng)域的應(yīng)用范圍有多廣?浦光生物均相發(fā)光技術(shù)
蛋白質(zhì)錯誤折疊和聚集與阿爾茨海默病、帕金森病等密切相關(guān)。均相化學(xué)發(fā)光方法可用于監(jiān)測聚集過程。例如,將待研究的蛋白(如β-淀粉樣蛋白、α-突觸蛋白)分別與化學(xué)發(fā)光供體(如魯米諾衍生物)和受體(如熒光染料或淬滅劑)標(biāo)記。當(dāng)?shù)鞍滋幱趩误w狀態(tài)時,兩者距離較遠,信號弱;當(dāng)發(fā)生聚集時,不同標(biāo)記的分子被納入同一聚集體,供體與受體靠近,通過CRET或淬滅效應(yīng)導(dǎo)致信號特征改變。該方法可實時監(jiān)測聚集動力學(xué),并用于篩選能抑制聚集的小分子化合物。浦光生物均相發(fā)光技術(shù)