盡管優(yōu)勢明顯,均相發(fā)光技術也存在一些挑戰(zhàn)和局限性。首先,某些技術(如FRET)可能受到樣本自身顏色(如血紅蛋白)、濁度或某些化合物(如具有強熒光或淬滅特性的藥物)的光學干擾。其次,均相檢測通常對試劑的特異性和純度要求極高,任何非特異性結合或聚集都可能導致假陽性信號。第三,開發(fā)均相檢測方法需要進行復雜的探針設計和標記優(yōu)化,前期開發(fā)成本較高。比較后,對于某些極低豐度的靶標,其靈敏度有時可能仍低于經(jīng)過多步洗滌和信號放大的異相方法(如化學發(fā)光免疫分析CLIA)。均相化學發(fā)光在傳染病診斷中的應用效果如何?上海均相化學發(fā)光均相發(fā)光臨床檢驗醫(yī)學中的應用研究

相較于熒光或比色法,化學發(fā)光作為均相檢測的信號系統(tǒng)具有多重獨特優(yōu)勢。首先,它無需外部激發(fā)光源,從而完全避免了光源不穩(wěn)定、樣本自發(fā)熒光及光散射所帶來的背景干擾,理論上能獲得極高的信噪比和靈敏度。其次,化學發(fā)光反應產(chǎn)生的光子信號強度在一定范圍內(nèi)與反應物濃度直接相關,動態(tài)范圍寬,可跨越數(shù)個數(shù)量級。再者,化學發(fā)光體系(如魯米諾、吖啶酯)的反應動力學多樣,可滿足從快速閃光到持久輝光的不同檢測需求。比較后,化學發(fā)光反應的啟動通常由單一試劑(如過氧化氫、堿)觸發(fā),易于控制,非常適合自動化儀器上的順序注射和即時讀數(shù)。這些特性使其成為實現(xiàn)超靈敏、高穩(wěn)健性均相檢測的理想信號輸出模式。湖南均相化學發(fā)光均相發(fā)光技術告別繁瑣操作,均相化學發(fā)光來了!

單核苷酸多態(tài)性(SNP)分型和DNA甲基化分析是個體化醫(yī)療和表觀遺傳學研究的重要部分。均相化學發(fā)光技術為此提供了高通量解決方案。對于SNP分型,可采用等位基因特異性引物延伸或連接反應,將不同的堿基延伸或連接事件與不同的化學發(fā)光報告系統(tǒng)(如不同顏色的Alpha受體珠)關聯(lián),通過檢測特異性發(fā)光信號來判斷基因型。對于甲基化分析,可在亞硫酸氫鹽處理DNA后,使用針對甲基化與非甲基化序列的特異性引物和探針,通過均相PCR或連接酶反應結合化學發(fā)光檢測,定量特定CpG位點的甲基化水平。這些方法易于實現(xiàn)自動化和多重分析。
適配體是通過SELEX技術篩選得到的單鏈DNA或RNA分子,能高親和力、高特異性結合靶標。將適配體與均相發(fā)光技術結合,產(chǎn)生了新型生物傳感器。例如,可以設計一個分子信標式適配體:其兩端分別標記熒光供體和淬滅基團,在沒有靶標時結構閉合,F(xiàn)RET發(fā)生,信號淬滅;結合靶標后構象打開,熒光恢復。或者,將適配體與發(fā)光酶(如熒光素酶)融合,靶標結合引起構象變化,從而活化或抑制酶活性。這類均相適配體傳感器在生物小分子、離子甚至細胞檢測中展現(xiàn)出巨大潛力。浦光生物均相化學發(fā)光新技術!

自身免疫病的診斷常依賴于檢測患者血清中的特異性自身抗體。均相化學發(fā)光技術為此提供了高通量、自動化的解決方案。例如,可以將已知的自身抗原(如dsDNA、ENA蛋白)包被在供體微珠上,患者血清中的自身抗體如果存在,則會與抗原結合。然后加入標記有受體(如熒光標記的抗人IgG抗體)的受體微珠或試劑,形成“抗原-自身抗體-抗人IgG”復合物,從而拉近供受體產(chǎn)生信號。這種方法可以實現(xiàn)多種自身抗體的同步檢測,快速輔助臨床診斷。均相化學發(fā)光的反應機制是怎樣的,有哪些關鍵步驟?山西體外診斷均相發(fā)光優(yōu)點
均相化學發(fā)光的檢測速度如何,能否滿足快速診斷需求?上海均相化學發(fā)光均相發(fā)光臨床檢驗醫(yī)學中的應用研究
均相化學發(fā)光技術的實現(xiàn),主要依賴于兩種設計哲學。第一種是直接能量轉移路徑,表示技術為AlphaLISA/AlphaScreen。其關鍵是使用能產(chǎn)生單線態(tài)氧的供體微珠和含有化學發(fā)光劑的受體微珠。只有當生物識別事件將兩者拉近至200納米以內(nèi)時,供體產(chǎn)生的單線態(tài)氧才能有效觸發(fā)受體珠內(nèi)的化學發(fā)光反應。未結合的微珠因距離過遠,單線態(tài)氧在擴散途中淬滅,不產(chǎn)生信號。第二種是活性調控路徑,即生物識別事件直接調控化學發(fā)光反應的效率或速率。例如,將化學發(fā)光反應的催化劑(如酶)或其抑制劑/共反應物與生物分子偶聯(lián),當目標分子存在導致它們接近或分離時,化學發(fā)光信號被開啟或關閉。這兩種路徑均巧妙地利用“臨近”或“調控”將特異性識別與信號產(chǎn)生直接耦合。上海均相化學發(fā)光均相發(fā)光臨床檢驗醫(yī)學中的應用研究