盡管優(yōu)勢明顯,均相發(fā)光技術(shù)也存在一些挑戰(zhàn)和局限性。首先,某些技術(shù)(如FRET)可能受到樣本自身顏色(如血紅蛋白)、濁度或某些化合物(如具有強(qiáng)熒光或淬滅特性的藥物)的光學(xué)干擾。其次,均相檢測通常對試劑的特異性和純度要求極高,任何非特異性結(jié)合或聚集都可能導(dǎo)致假陽性信號。第三,開發(fā)均相檢測方法需要進(jìn)行復(fù)雜的探針設(shè)計和標(biāo)記優(yōu)化,前期開發(fā)成本較高。比較后,對于某些極低豐度的靶標(biāo),其靈敏度有時可能仍低于經(jīng)過多步洗滌和信號放大的異相方法(如化學(xué)發(fā)光免疫分析CLIA)。與傳統(tǒng)化學(xué)發(fā)光技術(shù)相比,均相化學(xué)發(fā)光的優(yōu)勢體現(xiàn)在?廣西第五代化學(xué)發(fā)光均相發(fā)光免疫分析

環(huán)境水樣和食品中的微量污染物(如農(nóng)藥殘留、獸藥、、重金屬離子)檢測需要快速、高通量的篩查手段。均相化學(xué)發(fā)光免疫分析(CLIA)非常適合這一角色。通過制備針對特定污染物的高親和力抗體,并建立競爭性或間接的均相化學(xué)發(fā)光檢測模式,可以在樣本簡單前處理甚至直接稀釋后進(jìn)行分析。例如,樣本中的小分子污染物與化學(xué)發(fā)光標(biāo)記的類似物競爭結(jié)合有限量的抗體,信號強(qiáng)度與污染物濃度成反比。這種方法通量高、成本相對較低,可作為色譜-質(zhì)譜等確證方法的有力前篩工具,廣泛應(yīng)用于海關(guān)、質(zhì)檢和環(huán)保部門的日常監(jiān)控。湖南均相發(fā)光與普通發(fā)光的區(qū)別醫(yī)療新時代!均相發(fā)光,助力疾病早篩早診!

在傳染病診斷領(lǐng)域,均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)主要用于開發(fā)高靈敏的抗原或抗體檢測方法。例如,針對病毒抗原,可以設(shè)計雙抗體夾心法的Alpha檢測,實現(xiàn)快速、高靈敏的定量。在病毒學(xué)基礎(chǔ)研究中,其應(yīng)用更為普遍:假病毒中和試驗(檢測熒光素酶報告基因信號以評估抗體中和能力)、病毒進(jìn)入抑制篩選、病毒復(fù)制周期關(guān)鍵酶(如蛋白酶、聚合酶)抑制劑篩選等。特別是在COVID-19大流行期間,基于均相化學(xué)發(fā)光原理的高通量中和抗體檢測平臺,為疫苗評價和康復(fù)者血漿篩查提供了關(guān)鍵工具。
均相發(fā)光是一種先進(jìn)的生物化學(xué)檢測技術(shù),其關(guān)鍵特征在于整個檢測反應(yīng)過程均在均一的液相中進(jìn)行,無需任何固相分離步驟(如洗滌、離心)。 它通過巧妙的設(shè)計,將待測物的特異性識別事件(如抗原-抗體結(jié)合、酶-底物反應(yīng))直接轉(zhuǎn)化為可檢測的光信號。 實現(xiàn)這一目標(biāo)的關(guān)鍵在于依賴能量轉(zhuǎn)移、空間位阻改變或化學(xué)環(huán)境變化等機(jī)制,使信號分子(供體)與淬滅分子(受體)或發(fā)光底物在結(jié)合事件發(fā)生前后,其相互作用效率發(fā)生明顯改變,從而導(dǎo)致發(fā)光信號的增強(qiáng)或猝滅。與傳統(tǒng)的異相免疫分析(如ELISA)相比,均相發(fā)光技術(shù)具有操作簡便、通量高、易于自動化、試劑消耗少、檢測速度快等突出優(yōu)點,極大地推動了高通量藥物篩選、臨床診斷和基礎(chǔ)生命科學(xué)研究的發(fā)展。均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)怎樣提高檢測的靈敏度和特異性?

研究蛋白-蛋白相互作用(PPI)對于理解細(xì)胞信號網(wǎng)絡(luò)至關(guān)重要。傳統(tǒng)的酵母雙雜交、免疫共沉淀等方法操作復(fù)雜、通量低。以Alpha技術(shù)為表示的均相發(fā)光方法徹底改變了這一局面。將靶蛋白A與供體珠偶聯(lián),互作蛋白B與受體珠偶聯(lián)。當(dāng)A和B在溶液中相互作用時,拉近兩珠產(chǎn)生信號。該方法可在純化蛋白、細(xì)胞裂解液甚至活細(xì)胞培養(yǎng)基中進(jìn)行,不只能驗證已知互作,更能用于高通量篩選破壞或促進(jìn)特定PPI的小分子化合物。其均相特性使得可以實時監(jiān)測互作動力學(xué),研究互作強(qiáng)度,為藥物發(fā)現(xiàn)和基礎(chǔ)生物學(xué)提供了強(qiáng)大工具。浦光生物均相化學(xué)發(fā)光,一步到位!廣西第五代化學(xué)發(fā)光均相發(fā)光臨床檢驗醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用研究
均相化學(xué)發(fā)光在 POCT(即時檢驗)領(lǐng)域的應(yīng)用現(xiàn)狀?廣西第五代化學(xué)發(fā)光均相發(fā)光免疫分析
組蛋白修飾酶(如甲基轉(zhuǎn)移酶、去甲基酶、乙酰轉(zhuǎn)移酶、去乙酰化酶)是**、神經(jīng)疾病等領(lǐng)域的熱門靶點。均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)為這些酶活性的檢測和抑制劑篩選建立了成熟平臺。以組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶為例,通常使用生物素標(biāo)記的S-腺苷甲硫氨酸(SAM)類似物作為甲基供體。酶反應(yīng)后,生物素標(biāo)記的甲基被轉(zhuǎn)移到組蛋白底物上。然后,使用針對甲基化位點的抗體(偶聯(lián)供體珠)和鏈霉親和素(偶聯(lián)受體珠)通過Alpha技術(shù)檢測,信號強(qiáng)度與酶活性成正比。這種方法靈敏度高,抗干擾能力強(qiáng),可直接在含有化合物和輔因子的混合體系中進(jìn)行篩選。廣西第五代化學(xué)發(fā)光均相發(fā)光免疫分析