研究細(xì)胞內(nèi)信號通路的動態(tài)變化,需要能在細(xì)胞裂解液甚至活細(xì)胞背景下進(jìn)行快速、多通路的分析。均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)完美契合這一需求。例如,使用基于Alpha或類似技術(shù)的磷酸化特異性免疫檢測,可以在同一塊板中,從細(xì)胞裂解液中直接定量多種信號蛋白(如Akt、ERK、STAT)在不同刺激條件下的磷酸化水平。整個(gè)過程無需Western Blot的凝膠電泳、轉(zhuǎn)膜和繁瑣的封閉孵育洗滌步驟,通量提高數(shù)百倍,且能實(shí)現(xiàn)精確定量。此外,基于化學(xué)發(fā)光的報(bào)告基因檢測(如熒光素酶)也被普遍用于監(jiān)測特定信號通路(如Wnt、Hedgehog、NF-κB)的轉(zhuǎn)錄活性,用于功能性篩選和機(jī)理研究。浦光均相發(fā)光檢測試劑盒,操作簡便,快速獲得可靠結(jié)果!吉林CRET技術(shù)均相發(fā)光

熱遷移分析(Cellular Thermal Shift Assay, CETSA)是一種研究靶點(diǎn)與藥物在細(xì)胞水平結(jié)合情況的技術(shù)。其原理是藥物結(jié)合會改變靶蛋白的熱穩(wěn)定性。傳統(tǒng)的CETSA依賴蛋白質(zhì)印跡法檢測,通量低。現(xiàn)在,通過與均相發(fā)光免疫檢測(如Alpha)結(jié)合,開發(fā)出了均相CETSA(簡稱CETSA® HT)。該方法將細(xì)胞在不同溫度下加熱后裂解,使用針對目標(biāo)蛋白的抗體對(偶聯(lián)Alpha供體/受體珠)檢測溶液中剩余的未聚集的天然蛋白量。通過比較藥物處理組與對照組的蛋白熱穩(wěn)定性曲線偏移,即可高通量地確認(rèn)化合物是否與細(xì)胞內(nèi)靶點(diǎn)結(jié)合,并評估結(jié)合強(qiáng)度。湖南POCT產(chǎn)品均相發(fā)光廠家有哪些精確檢測,一步到位!均相化學(xué)發(fā)光,助您輕松獲得可靠結(jié)果!

單核苷酸多態(tài)性(SNP)分型和DNA甲基化分析是個(gè)體化醫(yī)療和表觀遺傳學(xué)研究的重要部分。均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)為此提供了高通量解決方案。對于SNP分型,可采用等位基因特異性引物延伸或連接反應(yīng),將不同的堿基延伸或連接事件與不同的化學(xué)發(fā)光報(bào)告系統(tǒng)(如不同顏色的Alpha受體珠)關(guān)聯(lián),通過檢測特異性發(fā)光信號來判斷基因型。對于甲基化分析,可在亞硫酸氫鹽處理DNA后,使用針對甲基化與非甲基化序列的特異性引物和探針,通過均相PCR或連接酶反應(yīng)結(jié)合化學(xué)發(fā)光檢測,定量特定CpG位點(diǎn)的甲基化水平。這些方法易于實(shí)現(xiàn)自動化和多重分析。
化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移(CRET)是另一種重要的均相信號產(chǎn)生機(jī)制。它本質(zhì)上是一種無需外部光激發(fā)的內(nèi)源性FRET。在CRET中,供體是化學(xué)發(fā)光反應(yīng)產(chǎn)生的激發(fā)態(tài)分子(如氧化的魯米諾或吖啶酯),其發(fā)射的光子能量直接傳遞給鄰近的熒光受體(如熒光染料、量子點(diǎn)或納米材料),促使受體發(fā)射出波長紅移的熒光。在均相檢測設(shè)計(jì)中,可將化學(xué)發(fā)光分子與受體分別標(biāo)記在相互作用的生物分子對上。只有當(dāng)目標(biāo)分子存在并促使兩者結(jié)合時(shí),供體與受體才能充分靠近,發(fā)生有效的CRET,產(chǎn)生特征性的受體熒光信號。通過檢測受體熒光,可以避免直接化學(xué)發(fā)光可能存在的背景干擾,并獲得更佳的光譜分辨能力,利于多重檢測。均相化學(xué)發(fā)光在 POCT(即時(shí)檢驗(yàn))領(lǐng)域的應(yīng)用現(xiàn)狀?

均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)的實(shí)現(xiàn),主要依賴于兩種設(shè)計(jì)哲學(xué)。第一種是直接能量轉(zhuǎn)移路徑,表示技術(shù)為AlphaLISA/AlphaScreen。其關(guān)鍵是使用能產(chǎn)生單線態(tài)氧的供體微珠和含有化學(xué)發(fā)光劑的受體微珠。只有當(dāng)生物識別事件將兩者拉近至200納米以內(nèi)時(shí),供體產(chǎn)生的單線態(tài)氧才能有效觸發(fā)受體珠內(nèi)的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。未結(jié)合的微珠因距離過遠(yuǎn),單線態(tài)氧在擴(kuò)散途中淬滅,不產(chǎn)生信號。第二種是活性調(diào)控路徑,即生物識別事件直接調(diào)控化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的效率或速率。例如,將化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的催化劑(如酶)或其抑制劑/共反應(yīng)物與生物分子偶聯(lián),當(dāng)目標(biāo)分子存在導(dǎo)致它們接近或分離時(shí),化學(xué)發(fā)光信號被開啟或關(guān)閉。這兩種路徑均巧妙地利用“臨近”或“調(diào)控”將特異性識別與信號產(chǎn)生直接耦合。均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)的未來發(fā)展趨勢是什么?安徽診斷試劑均相發(fā)光廠家有哪些
均相化學(xué)發(fā)光與熒光免疫技術(shù)相比,優(yōu)勢在哪?吉林CRET技術(shù)均相發(fā)光
環(huán)境水樣和食品中的微量污染物(如農(nóng)藥殘留、獸藥、、重金屬離子)檢測需要快速、高通量的篩查手段。均相化學(xué)發(fā)光免疫分析(CLIA)非常適合這一角色。通過制備針對特定污染物的高親和力抗體,并建立競爭性或間接的均相化學(xué)發(fā)光檢測模式,可以在樣本簡單前處理甚至直接稀釋后進(jìn)行分析。例如,樣本中的小分子污染物與化學(xué)發(fā)光標(biāo)記的類似物競爭結(jié)合有限量的抗體,信號強(qiáng)度與污染物濃度成反比。這種方法通量高、成本相對較低,可作為色譜-質(zhì)譜等確證方法的有力前篩工具,廣泛應(yīng)用于海關(guān)、質(zhì)檢和環(huán)保部門的日常監(jiān)控。吉林CRET技術(shù)均相發(fā)光