熱遷移分析(Cellular Thermal Shift Assay, CETSA)是一種研究靶點(diǎn)與藥物在細(xì)胞水平結(jié)合情況的技術(shù)。其原理是藥物結(jié)合會改變靶蛋白的熱穩(wěn)定性。傳統(tǒng)的CETSA依賴蛋白質(zhì)印跡法檢測,通量低。現(xiàn)在,通過與均相發(fā)光免疫檢測(如Alpha)結(jié)合,開發(fā)出了均相CETSA(簡稱CETSA® HT)。該方法將細(xì)胞在不同溫度下加熱后裂解,使用針對目標(biāo)蛋白的抗體對(偶聯(lián)Alpha供體/受體珠)檢測溶液中剩余的未聚集的天然蛋白量。通過比較藥物處理組與對照組的蛋白熱穩(wěn)定性曲線偏移,即可高通量地確認(rèn)化合物是否與細(xì)胞內(nèi)靶點(diǎn)結(jié)合,并評估結(jié)合強(qiáng)度。體外診斷新機(jī)遇!均相發(fā)光新產(chǎn)品,助您搶占先機(jī)!安徽干式化學(xué)發(fā)光均相發(fā)光生產(chǎn)廠家

盡管優(yōu)勢明顯,均相發(fā)光技術(shù)也存在一些挑戰(zhàn)和局限性。首先,某些技術(shù)(如FRET)可能受到樣本自身顏色(如血紅蛋白)、濁度或某些化合物(如具有強(qiáng)熒光或淬滅特性的藥物)的光學(xué)干擾。其次,均相檢測通常對試劑的特異性和純度要求極高,任何非特異性結(jié)合或聚集都可能導(dǎo)致假陽性信號。第三,開發(fā)均相檢測方法需要進(jìn)行復(fù)雜的探針設(shè)計和標(biāo)記優(yōu)化,前期開發(fā)成本較高。比較后,對于某些極低豐度的靶標(biāo),其靈敏度有時可能仍低于經(jīng)過多步洗滌和信號放大的異相方法(如化學(xué)發(fā)光免疫分析CLIA)。安徽POCT產(chǎn)品均相發(fā)光與普通發(fā)光的區(qū)別均相發(fā)光技術(shù)研究進(jìn)展,浦光生物為您提供前沿資訊!

激酶是重要的藥物靶點(diǎn),其活性檢測是藥物篩選的關(guān)鍵。均相發(fā)光技術(shù),尤其是TR-FRET和Alpha技術(shù),為此提供了理想平臺。以TR-FRET為例:將待測激酶、底物肽、ATP與待篩選化合物共同孵育。體系中包含兩種抗體,一種針對磷酸化底物(帶供體標(biāo)記),另一種針對底物肽的標(biāo)簽(帶受體標(biāo)記)。只有當(dāng)激酶活性正常,底物被磷酸化后,兩個抗體才能同時結(jié)合到底物肽上,使供受體靠近產(chǎn)生FRET信號。若化合物能抑制激酶,則磷酸化水平下降,F(xiàn)RET信號減弱。這種方法無需分離,可直接在含有ATP、激酶和化合物的混合液中實時或終點(diǎn)法檢測,通量極高,是發(fā)現(xiàn)激酶抑制劑的主流手段。
均相發(fā)光技術(shù)正逐步應(yīng)用于食品安全和環(huán)境監(jiān)測等多應(yīng)用領(lǐng)域。例如,檢測食品中的毒(如黃曲霉素)、抵抗細(xì)菌藥物殘留或病原菌等。通過設(shè)計針對這些污染物的抗體或適配體,并將其與均相化學(xué)發(fā)光信號系統(tǒng)偶聯(lián),就可以開發(fā)出快速、高通量的篩查方法。相較于傳統(tǒng)的色譜或微生物學(xué)方法,均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)具有檢測更快捷,適合大批量樣本的初篩的特點(diǎn)。在環(huán)境監(jiān)測中,常常可用于檢測水中的重金屬離子、有機(jī)污染物等,具有現(xiàn)場快速分析的潛力。32.無需冷鏈運(yùn)輸!浦光生物均相發(fā)光凍干試劑可常溫運(yùn)輸,降低運(yùn)輸成本,輕松觸達(dá)偏遠(yuǎn)地區(qū)!

蛋白質(zhì)錯誤折疊和聚集與阿爾茨海默病、帕金森病等密切相關(guān)。均相化學(xué)發(fā)光方法可用于監(jiān)測聚集過程。例如,將待研究的蛋白(如β-淀粉樣蛋白、α-突觸蛋白)分別與化學(xué)發(fā)光供體(如魯米諾衍生物)和受體(如熒光染料或淬滅劑)標(biāo)記。當(dāng)?shù)鞍滋幱趩误w狀態(tài)時,兩者距離較遠(yuǎn),信號弱;當(dāng)發(fā)生聚集時,不同標(biāo)記的分子被納入同一聚集體,供體與受體靠近,通過CRET或淬滅效應(yīng)導(dǎo)致信號特征改變。該方法可實時監(jiān)測聚集動力學(xué),并用于篩選能抑制聚集的小分子化合物。專注體外診斷,均相化學(xué)發(fā)光凍干試劑,品質(zhì)值得信賴!福建均相化學(xué)發(fā)光均相發(fā)光
鐵蛋白(Ferr)檢測試劑盒(均相化學(xué)發(fā)光法)。安徽干式化學(xué)發(fā)光均相發(fā)光生產(chǎn)廠家
生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移(BRET)是一種天然的或工程化的均相檢測技術(shù)。它利用生物發(fā)光蛋白(如海腎熒光素酶Rluc)作為供體,催化底物(如腔腸素)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光,該能量直接轉(zhuǎn)移給鄰近的熒光蛋白(如GFP、YFP)受體,使其發(fā)出熒光。BRET無需外部光源激發(fā),完全消除了光散射和自發(fā)熒光的背景,信噪比極高。在活細(xì)胞研究中,可將Rluc和熒光蛋白分別與兩個可能相互作用的靶蛋白融合,通過監(jiān)測BRET信號來實時、動態(tài)地研究蛋白互作的空間接近性和動力學(xué),是研究GPCR二聚化、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)復(fù)合物組裝的強(qiáng)大工具。安徽干式化學(xué)發(fā)光均相發(fā)光生產(chǎn)廠家