熱遷移分析(Cellular Thermal Shift Assay, CETSA)是一種研究靶點與藥物在細(xì)胞水平結(jié)合情況的技術(shù)。其原理是藥物結(jié)合會改變靶蛋白的熱穩(wěn)定性。傳統(tǒng)的CETSA依賴蛋白質(zhì)印跡法檢測,通量低?,F(xiàn)在,通過與均相發(fā)光免疫檢測(如Alpha)結(jié)合,開發(fā)出了均相CETSA(簡稱CETSA® HT)。該方法將細(xì)胞在不同溫度下加熱后裂解,使用針對目標(biāo)蛋白的抗體對(偶聯(lián)Alpha供體/受體珠)檢測溶液中剩余的未聚集的天然蛋白量。通過比較藥物處理組與對照組的蛋白熱穩(wěn)定性曲線偏移,即可高通量地確認(rèn)化合物是否與細(xì)胞內(nèi)靶點結(jié)合,并評估結(jié)合強度。均相化學(xué)發(fā)光與熒光免疫技術(shù)相比,優(yōu)勢在哪?安徽診斷試劑均相發(fā)光優(yōu)點

在藥物安全性評價早期,評估化合物的遺傳毒性至關(guān)重要。傳統(tǒng)的細(xì)菌回復(fù)突變試驗(Ames試驗)周期較長。一些基于哺乳動物細(xì)胞的均相化學(xué)發(fā)光遺傳毒性篩選方法被開發(fā)出來。例如,使用工程細(xì)胞系,其中DNA損傷響應(yīng)元件(如p53響應(yīng)元件)調(diào)控著熒光素酶報告基因的表達(dá)。當(dāng)化合物引起DNA損傷時,會活化報告基因,產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光信號。這類方法能在幾天內(nèi)完成對大量化合物的初步遺傳毒性風(fēng)險評估,作為Ames試驗的高通量預(yù)篩選工具,有助于早期淘汰有風(fēng)險的候選分子,節(jié)約研發(fā)成本。上海CRET技術(shù)均相發(fā)光臨床檢驗醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用研究浦光生物均相化學(xué)發(fā)光,一步到位!

均相發(fā)光技術(shù)正逐步應(yīng)用于食品安全和環(huán)境監(jiān)測等多應(yīng)用領(lǐng)域。例如,檢測食品中的毒(如黃曲霉素)、抵抗細(xì)菌藥物殘留或病原菌等。通過設(shè)計針對這些污染物的抗體或適配體,并將其與均相化學(xué)發(fā)光信號系統(tǒng)偶聯(lián),就可以開發(fā)出快速、高通量的篩查方法。相較于傳統(tǒng)的色譜或微生物學(xué)方法,均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)具有檢測更快捷,適合大批量樣本的初篩的特點。在環(huán)境監(jiān)測中,常常可用于檢測水中的重金屬離子、有機污染物等,具有現(xiàn)場快速分析的潛力。
組蛋白修飾酶(如甲基轉(zhuǎn)移酶、去甲基酶、乙酰轉(zhuǎn)移酶、去乙?;福┦?*、神經(jīng)疾病等領(lǐng)域的熱門靶點。均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)為這些酶活性的檢測和抑制劑篩選建立了成熟平臺。以組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶為例,通常使用生物素標(biāo)記的S-腺苷甲硫氨酸(SAM)類似物作為甲基供體。酶反應(yīng)后,生物素標(biāo)記的甲基被轉(zhuǎn)移到組蛋白底物上。然后,使用針對甲基化位點的抗體(偶聯(lián)供體珠)和鏈霉親和素(偶聯(lián)受體珠)通過Alpha技術(shù)檢測,信號強度與酶活性成正比。這種方法靈敏度高,抗干擾能力強,可直接在含有化合物和輔因子的混合體系中進行篩選。均相發(fā)光技術(shù)服務(wù)平臺,為您提供專業(yè)的技術(shù)支持和解決方案!

生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移(BRET)是一種天然的或工程化的均相檢測技術(shù)。它利用生物發(fā)光蛋白(如海腎熒光素酶Rluc)作為供體,催化底物(如腔腸素)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光,該能量直接轉(zhuǎn)移給鄰近的熒光蛋白(如GFP、YFP)受體,使其發(fā)出熒光。BRET無需外部光源激發(fā),完全消除了光散射和自發(fā)熒光的背景,信噪比極高。在活細(xì)胞研究中,可將Rluc和熒光蛋白分別與兩個可能相互作用的靶蛋白融合,通過監(jiān)測BRET信號來實時、動態(tài)地研究蛋白互作的空間接近性和動力學(xué),是研究GPCR二聚化、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)復(fù)合物組裝的強大工具。均相化學(xué)發(fā)光在個性化醫(yī)療中的應(yīng)用潛力有多大?上海診斷試劑均相發(fā)光與普通發(fā)光的區(qū)別
均相化學(xué)發(fā)光的反應(yīng)機制是怎樣的,有哪些關(guān)鍵步驟?安徽診斷試劑均相發(fā)光優(yōu)點
熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)是均相發(fā)光技術(shù)中應(yīng)用比較多方面的信號產(chǎn)生機制之一。其原理是:當(dāng)一個熒光基團(供體,Donor)的發(fā)射光譜與另一個熒光基團或淬滅基團(受體,Acceptor)的吸收光譜有足夠重疊,且兩者距離非常接近(通常1-10納米)時,供體的激發(fā)態(tài)能量會以非輻射方式轉(zhuǎn)移給受體。在均相檢測中,常將供體和受體分別標(biāo)記在相互作用的生物分子對(如一對抗體、或酶與底物肽)上。當(dāng)目標(biāo)分子存在并促使這對生物分子結(jié)合時,供體與受體被拉近,發(fā)生有效的FRET,導(dǎo)致供體熒光淬滅,受體熒光增強(如果受體是熒光團)。通過監(jiān)測供體與受體熒光強度的比率變化,即可高靈敏度、高特異性地定量目標(biāo)分析物。安徽診斷試劑均相發(fā)光優(yōu)點