干細(xì)胞的多能性維持、定向分化及其功能評(píng)估,需要可靠的檢測方法。均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)可用于:多能性標(biāo)記物檢測:通過均相免疫分析定量細(xì)胞裂解物中OCT4、SOX2、NANOG等蛋白的水平。報(bào)告基因細(xì)胞系構(gòu)建:將多能性特異性或分化特異性啟動(dòng)子與熒光素酶基因連接,通過檢測化學(xué)發(fā)光信號(hào)來無損、實(shí)時(shí)監(jiān)測干細(xì)胞狀態(tài)變化,用于篩選維持干性或誘導(dǎo)分化的因子。分化細(xì)胞功能評(píng)估:如心肌細(xì)胞分化后,可通過鈣離子敏感的化學(xué)發(fā)光染料檢測其自發(fā)搏動(dòng)引起的鈣瞬變,評(píng)估功能成熟度。這些方法為干細(xì)胞質(zhì)量控制和研究提供了有力工具。均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)的研發(fā)難點(diǎn)有哪些,如何攻克?福建均相發(fā)光技術(shù)

適配體是通過SELEX技術(shù)篩選得到的單鏈DNA或RNA分子,能高親和力、高特異性結(jié)合靶標(biāo)。將適配體與均相發(fā)光技術(shù)結(jié)合,產(chǎn)生了新型生物傳感器。例如,可以設(shè)計(jì)一個(gè)分子信標(biāo)式適配體:其兩端分別標(biāo)記熒光供體和淬滅基團(tuán),在沒有靶標(biāo)時(shí)結(jié)構(gòu)閉合,F(xiàn)RET發(fā)生,信號(hào)淬滅;結(jié)合靶標(biāo)后構(gòu)象打開,熒光恢復(fù)。或者,將適配體與發(fā)光酶(如熒光素酶)融合,靶標(biāo)結(jié)合引起構(gòu)象變化,從而活化或抑制酶活性。這類均相適配體傳感器在生物小分子、離子甚至細(xì)胞檢測中展現(xiàn)出巨大潛力。江西第五代化學(xué)發(fā)光均相發(fā)光臨床檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用研究均相化學(xué)發(fā)光在疾病早期篩查中能發(fā)揮怎樣的作用?

外泌體等細(xì)胞外囊泡(EVs)是疾病診斷的潛在生物標(biāo)志物來源。其分離和表征通常繁瑣。均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)提供了快速分析方案。利用EVs表面普遍或特異性表達(dá)的膜蛋白(如CD9、CD63、CD81或相關(guān)抗原),將針對不同蛋白的抗體分別偶聯(lián)Alpha供體珠和受體珠。當(dāng)EVs存在時(shí),多個(gè)抗體結(jié)合到同一個(gè)EV上,拉近微珠產(chǎn)光信號(hào),從而實(shí)現(xiàn)EVs的定量。通過使用不同抗體組合,還可以對EVs進(jìn)行亞群分型分析。這種方法無需超速離心,操作簡單,有望用于臨床樣本的快速篩查。
在分子診斷領(lǐng)域,均相發(fā)光技術(shù)的應(yīng)用遠(yuǎn)不止于基礎(chǔ)的實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)。它正推動(dòng)該領(lǐng)域向著更高靈敏度、更強(qiáng)特異性和更便捷的操作模式演進(jìn)。例如,在數(shù)字PCR(dPCR)這一定量技術(shù)中,雖然目前主流依賴熒光檢測,但基于化學(xué)發(fā)光的均相檢測方案正在探索中。其設(shè)想是將PCR反應(yīng)體系分割成數(shù)萬個(gè)微滴后,利用化學(xué)發(fā)光探針(如基于魯米諾或吖啶酯的體系)進(jìn)行檢測:在擴(kuò)增陽性微滴中,探針被切割或構(gòu)象改變觸發(fā)化學(xué)發(fā)光反應(yīng),通過計(jì)數(shù)發(fā)光的微滴數(shù)目即可實(shí)現(xiàn)核酸分子的定量。這種方法可能免除對復(fù)雜激發(fā)光學(xué)系統(tǒng)的依賴,并有望利用某些化學(xué)發(fā)光體系更高的信噪比特性,進(jìn)一步提升對極低豐度靶標(biāo)的檢出能力。均相化學(xué)發(fā)光對檢測環(huán)境有什么特殊要求?

評(píng)估疫苗免疫效果或康復(fù)者血清中和能力的關(guān)鍵是病毒中和抗體檢測。傳統(tǒng)的空斑減少中和試驗(yàn)(PRNT)耗時(shí)費(fèi)力。基于假病毒系統(tǒng)的均相發(fā)光中和試驗(yàn)已成為高通量替代方案。將表達(dá)熒光素酶的報(bào)告基因包裝進(jìn)假病毒顆粒(攜帶目標(biāo)病毒的囊膜蛋白)。當(dāng)假病毒炎癥細(xì)胞時(shí),會(huì)驅(qū)動(dòng)熒光素酶表達(dá)。如果樣本中存在中和抗體,則會(huì)阻斷炎癥,導(dǎo)致熒光素酶信號(hào)下降。檢測時(shí)只需在炎癥后裂解細(xì)胞并加入發(fā)光底物,即可實(shí)現(xiàn)快速、定量、高通量的中和抗體滴度測定,在COVID-19等疫病中發(fā)揮了重要作用。均相發(fā)光試劑定制服務(wù),根據(jù)您的需求提供個(gè)性化解決方案!江蘇體外診斷均相發(fā)光
告別磁珠反應(yīng),均相化學(xué)發(fā)光,操作更簡便,實(shí)驗(yàn)效率大幅提升!福建均相發(fā)光技術(shù)
適配體是通過體外篩選得到的單鏈DNA/RNA分子,能特異性結(jié)合小分子、蛋白質(zhì)甚至細(xì)胞。將適配體的高特異性與均相化學(xué)發(fā)光的高靈敏度結(jié)合,催生了新型生物傳感器。設(shè)計(jì)策略包括:構(gòu)象開關(guān)型:適配體與化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物(如吖啶酯)和淬滅基團(tuán)相連,結(jié)合靶標(biāo)后構(gòu)象變化,改變發(fā)光效率。分裂型:將化學(xué)發(fā)光酶或催化其反應(yīng)的組分分割,分別與分裂的適配體序列連接,靶標(biāo)存在時(shí)適配體重組,恢復(fù)發(fā)光活性。鄰近連接型:兩個(gè)適配體分別結(jié)合靶標(biāo)的不同部位,拉近其攜帶的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)組分(如供體/受體珠),觸發(fā)信號(hào)。這些傳感器在環(huán)境監(jiān)測、食品安全和生物標(biāo)志物檢測中潛力巨大。福建均相發(fā)光技術(shù)