在免疫學(xué)和學(xué)研究,常需同時(shí)監(jiān)測(cè)多個(gè)細(xì)胞因子或信號(hào)蛋白的磷酸化狀態(tài)。基于微珠的多重均相發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)(如Luminex xMAP技術(shù)結(jié)合化學(xué)發(fā)光檢測(cè))應(yīng)運(yùn)而生。該系統(tǒng)使用不同顏色編碼的微球作為固相載體,每種微球包被一種特異性捕獲抗體。樣本中的多種靶標(biāo)被各自捕獲后,再用生物素化檢測(cè)抗體和鏈霉親和素-熒光/發(fā)光報(bào)告分子進(jìn)行檢測(cè)。雖然微球是固相,但整個(gè)反應(yīng)在懸浮液中進(jìn)行,讀數(shù)前無(wú)需洗滌,本質(zhì)上也是一種高效的“液相”或“懸浮芯片”式多重均相檢測(cè)。降本增效新方案,為您節(jié)省實(shí)驗(yàn)成本!山東CRET技術(shù)均相發(fā)光生產(chǎn)廠家

外泌體等細(xì)胞外囊泡(EVs)是疾病診斷的潛在生物標(biāo)志物來(lái)源。其分離和表征通常繁瑣。均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)提供了快速分析方案。利用EVs表面普遍或特異性表達(dá)的膜蛋白(如CD9、CD63、CD81或相關(guān)抗原),將針對(duì)不同蛋白的抗體分別偶聯(lián)Alpha供體珠和受體珠。當(dāng)EVs存在時(shí),多個(gè)抗體結(jié)合到同一個(gè)EV上,拉近微珠產(chǎn)光信號(hào),從而實(shí)現(xiàn)EVs的定量。通過(guò)使用不同抗體組合,還可以對(duì)EVs進(jìn)行亞群分型分析。這種方法無(wú)需超速離心,操作簡(jiǎn)單,有望用于臨床樣本的快速篩查。湖南診斷試劑均相發(fā)光與普通發(fā)光的區(qū)別均相化學(xué)發(fā)光在醫(yī)學(xué)中的作用和地位如何?

Alpha技術(shù),又稱均相臨近化學(xué)發(fā)光檢測(cè),是均相發(fā)光領(lǐng)域的一項(xiàng)變革性突破。該技術(shù)基于兩種特殊的微珠:供體珠(Donor Bead)和受體珠(Acceptor Bead)。供體珠內(nèi)包裹了光敏劑,當(dāng)被680nm激光激發(fā)時(shí),可將周圍環(huán)境中的氧氣轉(zhuǎn)化為高能態(tài)的單線態(tài)氧。單線態(tài)氧在溶液中擴(kuò)散距離極短(約200納米)。只有當(dāng)供體珠和受體珠因同時(shí)結(jié)合到一個(gè)目標(biāo)分子(如抗原、蛋白互作對(duì))上而彼此靠近時(shí),單線態(tài)氧才能有效擴(kuò)散至受體珠,觸發(fā)其內(nèi)部的化學(xué)發(fā)光劑產(chǎn)生520-620nm的強(qiáng)光。若兩珠未靠近,單線態(tài)氧則淬滅在溶劑中。Alpha技術(shù)結(jié)合了臨近誘導(dǎo)的高特異性和化學(xué)發(fā)光的高靈敏度,且不受樣本顏色淬滅影響,在蛋白-蛋白相互作用、激酶活性、GPCR功能等研究中成為金標(biāo)準(zhǔn)。
均相發(fā)光技術(shù)也普遍用于細(xì)胞水平的分析,如細(xì)胞活力、凋亡和化合物毒性篩選。例如,基于ATP含量的細(xì)胞活力檢測(cè):活細(xì)胞含有豐富的ATP,細(xì)胞裂解后釋放的ATP可與熒光素酶反應(yīng)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光,發(fā)光強(qiáng)度與活細(xì)胞數(shù)量成正比。整個(gè)過(guò)程在同一個(gè)孔中加入裂解/檢測(cè)試劑即可完成,是均相操作的典范。對(duì)于細(xì)胞凋亡,可通過(guò)檢測(cè)caspase酶活性(使用熒光底物或發(fā)光底物)來(lái)實(shí)現(xiàn)均相分析。細(xì)胞毒性檢測(cè)則可測(cè)量因細(xì)胞膜損傷而釋放的胞內(nèi)酶(如乳酸脫氫酶LDH)活性,通過(guò)偶聯(lián)的發(fā)光反應(yīng)來(lái)定量。這些方法實(shí)現(xiàn)了對(duì)細(xì)胞狀態(tài)的快速、高通量、自動(dòng)化評(píng)估。均相化學(xué)發(fā)光在心血管疾病診斷中的應(yīng)用價(jià)值是什么?

在生物制藥(如單克隆抗體、重組蛋白)的生產(chǎn)過(guò)程中,均相發(fā)光技術(shù)被普遍用于工藝開(kāi)發(fā)和質(zhì)量控制。例如,使用基于Protein A或抗原的均相免疫分析,快速定量細(xì)胞培養(yǎng)上清或純化過(guò)程中的抗體滴度。也可以使用針對(duì)特定宿主細(xì)胞蛋白(HCP)或Protein A殘留的均相檢測(cè)方法,監(jiān)測(cè)純化工藝的去除效率。此外,對(duì)于抗體藥物的生物學(xué)活性(如ADCC、CDC效應(yīng)),也有相應(yīng)的基于細(xì)胞報(bào)告的均相發(fā)光檢測(cè)方法。這些應(yīng)用幫助實(shí)現(xiàn)了生物工藝的快速優(yōu)化和產(chǎn)品質(zhì)量的嚴(yán)格監(jiān)控。POCT市場(chǎng)新機(jī)遇,浦光干式均相化學(xué)發(fā)光助您把握未來(lái)!上海POCT產(chǎn)品均相發(fā)光優(yōu)點(diǎn)
均相化學(xué)發(fā)光的檢測(cè)速度如何,能否滿足快速診斷需求?山東CRET技術(shù)均相發(fā)光生產(chǎn)廠家
在傳染病診斷領(lǐng)域,均相發(fā)光技術(shù)主要用于抗原或抗體的高靈敏檢測(cè)。例如,利用TR-FRET原理,可以設(shè)計(jì)檢測(cè)病毒抗原的均相免疫分析。將針對(duì)病毒抗原不同表位的兩種抗體分別標(biāo)記供體和受體,樣本中若存在病毒抗原,則形成免疫復(fù)合物并產(chǎn)生FRET信號(hào)。該方法快速,可用于病原體篩查。在病毒學(xué)研究中,均相發(fā)光可用于評(píng)估病毒進(jìn)入(如基于熒光素酶的報(bào)告病毒)、病毒復(fù)制或抗病毒藥物的效果。其高通量特性有助于快速篩選廣譜抗病毒化合物。山東CRET技術(shù)均相發(fā)光生產(chǎn)廠家