環(huán)境水樣和食品中的微量污染物（如農(nóng)藥殘留、獸藥、、重金屬離子）檢測需要快速、高通量的篩查手段。均相化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）非常適合這一角色。通過制備針對特定污染物的高親和力抗體，并建立競爭性或間接的均相化學(xué)發(fā)光檢測模式，可以在樣本簡單前處理甚至直接稀釋后進(jìn)行分析。例如，樣本中的小分子污染物與化學(xué)發(fā)光標(biāo)記的類似物競爭結(jié)合有限量的抗體，信號強(qiáng)度與污染物濃度成反比。這種方法通量高、成本相對較低，可作為色譜-質(zhì)譜等確證方法的有力前篩工具，廣泛應(yīng)用于海關(guān)、質(zhì)檢和環(huán)保部門的日常監(jiān)控。25-羥基維生素D（25 OH-VD）檢測試劑盒（均相化學(xué)發(fā)光法)。湖南CRET技術(shù)均相發(fā)光免疫分析

熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）是均相發(fā)光技術(shù)中應(yīng)用比較多方面的信號產(chǎn)生機(jī)制之一。其原理是：當(dāng)一個熒光基團(tuán)（供體，Donor）的發(fā)射光譜與另一個熒光基團(tuán)或淬滅基團(tuán)（受體，Acceptor）的吸收光譜有足夠重疊，且兩者距離非常接近（通常1-10納米）時，供體的激發(fā)態(tài)能量會以非輻射方式轉(zhuǎn)移給受體。在均相檢測中，常將供體和受體分別標(biāo)記在相互作用的生物分子對（如一對抗體、或酶與底物肽）上。當(dāng)目標(biāo)分子存在并促使這對生物分子結(jié)合時，供體與受體被拉近，發(fā)生有效的FRET，導(dǎo)致供體熒光淬滅，受體熒光增強(qiáng)（如果受體是熒光團(tuán)）。通過監(jiān)測供體與受體熒光強(qiáng)度的比率變化，即可高靈敏度、高特異性地定量目標(biāo)分析物。天津干式化學(xué)發(fā)光均相發(fā)光的原理均相化學(xué)發(fā)光與電化學(xué)發(fā)光相比，有什么不同？

適配體是通過SELEX技術(shù)篩選得到的單鏈DNA或RNA分子，能高親和力、高特異性結(jié)合靶標(biāo)。將適配體與均相發(fā)光技術(shù)結(jié)合，產(chǎn)生了新型生物傳感器。例如，可以設(shè)計(jì)一個分子信標(biāo)式適配體：其兩端分別標(biāo)記熒光供體和淬滅基團(tuán)，在沒有靶標(biāo)時結(jié)構(gòu)閉合，F(xiàn)RET發(fā)生，信號淬滅；結(jié)合靶標(biāo)后構(gòu)象打開，熒光恢復(fù)。或者，將適配體與發(fā)光酶（如熒光素酶）融合，靶標(biāo)結(jié)合引起構(gòu)象變化，從而活化或抑制酶活性。這類均相適配體傳感器在生物小分子、離子甚至細(xì)胞檢測中展現(xiàn)出巨大潛力。

GPCR是比較大的藥物靶點(diǎn)家族，其功能研究涉及配體結(jié)合、第二信使產(chǎn)生、下游信號通路活化等多個層面。均相發(fā)光技術(shù)多方面滲透于此領(lǐng)域。對于配體結(jié)合競爭實(shí)驗(yàn)，可采用TR-FRET，將受體標(biāo)記供體，配體標(biāo)記受體。對于GPCR活化后比較關(guān)鍵的cAMP積累或IP3/DAG產(chǎn)生，均有成熟的均相檢測試劑盒。例如，cAMP檢測常采用基于抗體競爭原理的均相發(fā)光免疫分析。細(xì)胞裂解后，內(nèi)源性cAMP與加入的標(biāo)記cAMP競爭結(jié)合有限量的抗cAMP抗體。抗體結(jié)合事件通過FRET或Alpha技術(shù)被檢測，信號強(qiáng)度與內(nèi)源性cAMP濃度成反比。這類方法直接在細(xì)胞裂解液中進(jìn)行，快速、靈敏，完美契合GPCR激動劑/拮抗劑的高通量篩選。均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)在臨床檢驗(yàn)中的普及程度。

在分子診斷領(lǐng)域，均相發(fā)光技術(shù)的應(yīng)用遠(yuǎn)不止于基礎(chǔ)的實(shí)時熒光定量PCR（qPCR）。它正推動該領(lǐng)域向著更高靈敏度、更強(qiáng)特異性和更便捷的操作模式演進(jìn)。例如，在數(shù)字PCR（dPCR）這一定量技術(shù)中，雖然目前主流依賴熒光檢測，但基于化學(xué)發(fā)光的均相檢測方案正在探索中。其設(shè)想是將PCR反應(yīng)體系分割成數(shù)萬個微滴后，利用化學(xué)發(fā)光探針（如基于魯米諾或吖啶酯的體系）進(jìn)行檢測：在擴(kuò)增陽性微滴中，探針被切割或構(gòu)象改變觸發(fā)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，通過計(jì)數(shù)發(fā)光的微滴數(shù)目即可實(shí)現(xiàn)核酸分子的定量。這種方法可能免除對復(fù)雜激發(fā)光學(xué)系統(tǒng)的依賴，并有望利用某些化學(xué)發(fā)光體系更高的信噪比特性，進(jìn)一步提升對極低豐度靶標(biāo)的檢出能力。體外診斷新機(jī)遇！均相發(fā)光新產(chǎn)品，助您搶占先機(jī)！天津干式化學(xué)發(fā)光均相發(fā)光的原理

均相化學(xué)發(fā)光，國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室檢測平臺，領(lǐng)航醫(yī)療新時代！湖南CRET技術(shù)均相發(fā)光免疫分析

適配體是通過體外篩選得到的單鏈DNA/RNA分子，能特異性結(jié)合小分子、蛋白質(zhì)甚至細(xì)胞。將適配體的高特異性與均相化學(xué)發(fā)光的高靈敏度結(jié)合，催生了新型生物傳感器。設(shè)計(jì)策略包括：構(gòu)象開關(guān)型：適配體與化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物（如吖啶酯）和淬滅基團(tuán)相連，結(jié)合靶標(biāo)后構(gòu)象變化，改變發(fā)光效率。分裂型：將化學(xué)發(fā)光酶或催化其反應(yīng)的組分分割，分別與分裂的適配體序列連接，靶標(biāo)存在時適配體重組，恢復(fù)發(fā)光活性。鄰近連接型：兩個適配體分別結(jié)合靶標(biāo)的不同部位，拉近其攜帶的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)組分（如供體/受體珠），觸發(fā)信號。這些傳感器在環(huán)境監(jiān)測、食品安全和生物標(biāo)志物檢測中潛力巨大。湖南CRET技術(shù)均相發(fā)光免疫分析