均相發(fā)光技術(shù)也普遍用于細(xì)胞水平的分析,如細(xì)胞活力、凋亡和化合物毒性篩選。例如,基于ATP含量的細(xì)胞活力檢測:活細(xì)胞含有豐富的ATP,細(xì)胞裂解后釋放的ATP可與熒光素酶反應(yīng)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光,發(fā)光強(qiáng)度與活細(xì)胞數(shù)量成正比。整個過程在同一個孔中加入裂解/檢測試劑即可完成,是均相操作的典范。對于細(xì)胞凋亡,可通過檢測caspase酶活性(使用熒光底物或發(fā)光底物)來實現(xiàn)均相分析。細(xì)胞毒性檢測則可測量因細(xì)胞膜損傷而釋放的胞內(nèi)酶(如乳酸脫氫酶LDH)活性,通過偶聯(lián)的發(fā)光反應(yīng)來定量。這些方法實現(xiàn)了對細(xì)胞狀態(tài)的快速、高通量、自動化評估。浦光生物均相化學(xué)發(fā)光新技術(shù)!遼寧浦光生物均相發(fā)光臨床檢驗醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用研究

蛋白質(zhì)錯誤折疊和聚集與阿爾茨海默病、帕金森病等密切相關(guān)。均相化學(xué)發(fā)光方法可用于監(jiān)測聚集過程。例如,將待研究的蛋白(如β-淀粉樣蛋白、α-突觸蛋白)分別與化學(xué)發(fā)光供體(如魯米諾衍生物)和受體(如熒光染料或淬滅劑)標(biāo)記。當(dāng)?shù)鞍滋幱趩误w狀態(tài)時,兩者距離較遠(yuǎn),信號弱;當(dāng)發(fā)生聚集時,不同標(biāo)記的分子被納入同一聚集體,供體與受體靠近,通過CRET或淬滅效應(yīng)導(dǎo)致信號特征改變。該方法可實時監(jiān)測聚集動力學(xué),并用于篩選能抑制聚集的小分子化合物。遼寧浦光生物均相發(fā)光臨床檢驗醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用研究均相化學(xué)發(fā)光的檢測速度如何,能否滿足快速診斷需求?

離子通道和轉(zhuǎn)運體是重要的藥物靶點,但傳統(tǒng)電生理方法通量極低。基于化學(xué)發(fā)光的離子敏炎癥料或蛋白,為高通量篩選提供了可能。例如,使用對鈣離子敏感的水母發(fā)光蛋白(Aequorin)或基于熒光素酶的鈣指示劑(如Photina)。當(dāng)離子通道開放引起離子內(nèi)流時,會觸發(fā)這些蛋白的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。將穩(wěn)定表達(dá)該報告系統(tǒng)和目標(biāo)離子通道的細(xì)胞系用于篩選,加入化合物后直接測量發(fā)光信號變化,即可高通量地發(fā)現(xiàn)通道的激動劑或阻斷劑。類似原理也可用于鈉、鉀等離子通道或某些轉(zhuǎn)運體的功能研究。
li'ru進(jìn)行均相發(fā)光檢測需要專門應(yīng)用的多功能微孔板檢測儀。這類儀器通常集成了多種功能,例如:能夠提供特定波長的光激發(fā)(用于熒光、TR-FRET),或具備注射器以添加化學(xué)發(fā)光/電化學(xué)發(fā)光觸發(fā)試劑;比較關(guān)鍵的是,擁有高靈敏度的光電倍增管(PMT)或CCD檢測器來捕獲微弱的光信號。先進(jìn)的儀器還具備溫控功能,并能同時或依次進(jìn)行不同模式的檢測(如熒光強(qiáng)度、時間分辨熒光、化學(xué)發(fā)光)。儀器的性能直接決定了檢測的靈敏度、動態(tài)范圍和通量。均相化學(xué)發(fā)光新突破!凍干試劑來了,靈敏度更高,結(jié)果更準(zhǔn)確!

細(xì)胞水平的功能性檢測是藥物篩選和生物學(xué)研究的基礎(chǔ)。均相化學(xué)發(fā)光為此提供了多種穩(wěn)健的檢測方案。比較經(jīng)典的是基于ATP含量的細(xì)胞活力/增殖/毒性檢測?;罴?xì)胞內(nèi)的ATP與熒光素酶-熒光素反應(yīng)直接偶聯(lián),產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光信號,其強(qiáng)度與活細(xì)胞數(shù)成正比。該方法操作簡單(一步加樣裂解/檢測),靈敏度高,線性范圍寬。此外,針對細(xì)胞凋亡,可通過檢測Caspase酶活性(使用化學(xué)發(fā)光的Caspase底物)或膜磷脂酰絲氨酸外露(使用與化學(xué)發(fā)光檢測偶聯(lián)的Annexin V類似物)來進(jìn)行均相分析。這些方法均實現(xiàn)了在微孔板中對細(xì)胞狀態(tài)的快速、定量評估。浦光生物均相化學(xué)發(fā)光,一步到位!北京浦光生物均相發(fā)光生產(chǎn)廠家
均相化學(xué)發(fā)光的反應(yīng)機(jī)制是怎樣的,有哪些關(guān)鍵步驟?遼寧浦光生物均相發(fā)光臨床檢驗醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用研究
微流控技術(shù)通過縱微尺度流體,能夠?qū)崿F(xiàn)多種試劑的精確混合、反應(yīng)和檢測的集成。將均相發(fā)光檢測整合到微流控芯片中,有望進(jìn)一步實現(xiàn)“芯片實驗室”(Lab-on-a-Chip)的愿景。例如,在芯片微通道內(nèi)完成細(xì)胞的裂解、目標(biāo)蛋白的免疫識別和均相發(fā)光反應(yīng),并通過集成的微型光學(xué)元件檢測信號。這種結(jié)合可以極大減少試劑用量(降至納升級)、縮短反應(yīng)時間、提高分析速度,并實現(xiàn)便攜化,為床邊診斷(POCT)和現(xiàn)場檢測提供新的解決方案。Duo'z遼寧浦光生物均相發(fā)光臨床檢驗醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用研究