均相發光技術也普遍用于細胞水平的分析,如細胞活力、凋亡和化合物毒性篩選。例如,基于ATP含量的細胞活力檢測:活細胞含有豐富的ATP,細胞裂解后釋放的ATP可與熒光素酶反應產生化學發光,發光強度與活細胞數量成正比。整個過程在同一個孔中加入裂解/檢測試劑即可完成,是均相操作的典范。對于細胞凋亡,可通過檢測caspase酶活性(使用熒光底物或發光底物)來實現均相分析。細胞毒性檢測則可測量因細胞膜損傷而釋放的胞內酶(如乳酸脫氫酶LDH)活性,通過偶聯的發光反應來定量。這些方法實現了對細胞狀態的快速、高通量、自動化評估。均相化學發光新突破!凍干試劑來了,靈敏度更高,結果更準確!黑龍江技術升級均相發光

離子通道和轉運體是重要的藥物靶點,但傳統電生理方法通量極低。基于化學發光的離子敏炎癥料或蛋白,為高通量篩選提供了可能。例如,使用對鈣離子敏感的水母發光蛋白(Aequorin)或基于熒光素酶的鈣指示劑(如Photina)。當離子通道開放引起離子內流時,會觸發這些蛋白的化學發光反應。將穩定表達該報告系統和目標離子通道的細胞系用于篩選,加入化合物后直接測量發光信號變化,即可高通量地發現通道的激動劑或阻斷劑。類似原理也可用于鈉、鉀等離子通道或某些轉運體的功能研究。黑龍江技術升級均相發光均相化學發光在傳染病診斷中的應用效果如何?

均相化學發光技術因其超高的通量、靈敏度和易于自動化的特性,已成為現代藥物發現高通量篩選(HTS)的支柱技術。在靶點導向的篩選中,它廣泛應用于:激酶/磷酸酶抑制劑篩選(通過檢測磷酸化底物的量)、GPCR功能分析(檢測cAMP、IP3或β-arrestin招募)、核受體轉錄活性篩選(報告基因檢測)、蛋白-蛋白相互作用抑制劑篩選(如使用Alpha技術)、以及酶活性分析(蛋白酶、去乙酰化酶等)。其“混合-讀數”的模式允許在1536孔甚至更高密度板中進行超大規模化合物庫(數十萬至上百萬)的篩選,每天可產生海量數據,極大加速了先導化合物的發現進程。
激酶是重要的藥物靶點,其活性檢測是藥物篩選的關鍵。均相發光技術,尤其是TR-FRET和Alpha技術,為此提供了理想平臺。以TR-FRET為例:將待測激酶、底物肽、ATP與待篩選化合物共同孵育。體系中包含兩種抗體,一種針對磷酸化底物(帶供體標記),另一種針對底物肽的標簽(帶受體標記)。只有當激酶活性正常,底物被磷酸化后,兩個抗體才能同時結合到底物肽上,使供受體靠近產生FRET信號。若化合物能抑制激酶,則磷酸化水平下降,FRET信號減弱。這種方法無需分離,可直接在含有ATP、激酶和化合物的混合液中實時或終點法檢測,通量極高,是發現激酶抑制劑的主流手段。均相化學發光在 POCT(即時檢驗)領域的應用現狀?

熒光共振能量轉移(FRET)是均相發光技術中應用比較多方面的信號產生機制之一。其原理是:當一個熒光基團(供體,Donor)的發射光譜與另一個熒光基團或淬滅基團(受體,Acceptor)的吸收光譜有足夠重疊,且兩者距離非常接近(通常1-10納米)時,供體的激發態能量會以非輻射方式轉移給受體。在均相檢測中,常將供體和受體分別標記在相互作用的生物分子對(如一對抗體、或酶與底物肽)上。當目標分子存在并促使這對生物分子結合時,供體與受體被拉近,發生有效的FRET,導致供體熒光淬滅,受體熒光增強(如果受體是熒光團)。通過監測供體與受體熒光強度的比率變化,即可高靈敏度、高特異性地定量目標分析物。均相化學發光在心血管疾病診斷中的應用價值是什么?黑龍江技術升級均相發光
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GPCR是比較大的藥物靶點家族,其功能研究涉及配體結合、第二信使產生、下游信號通路活化等多個層面。均相發光技術多方面滲透于此領域。對于配體結合競爭實驗,可采用TR-FRET,將受體標記供體,配體標記受體。對于GPCR活化后比較關鍵的cAMP積累或IP3/DAG產生,均有成熟的均相檢測試劑盒。例如,cAMP檢測常采用基于抗體競爭原理的均相發光免疫分析。細胞裂解后,內源性cAMP與加入的標記cAMP競爭結合有限量的抗cAMP抗體。抗體結合事件通過FRET或Alpha技術被檢測,信號強度與內源性cAMP濃度成反比。這類方法直接在細胞裂解液中進行,快速、靈敏,完美契合GPCR激動劑/拮抗劑的高通量篩選。黑龍江技術升級均相發光