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血漿提取試劑盒成分

來源: 發布時間:2023-04-17

酶聯免疫吸附測定(ELISA):將其中一種針對外泌體表面抗原的抗體固定在微孔板的表面上,將外泌體樣品暴露于含有固定抗體的孔中,由于抗體-抗原相互作用,表達抗原的外泌體將被捕獲固定在板上。將未捕獲的樣品內容物洗掉,并使用另一種抗體檢測固定的外泌體。ELISA已用于從尿液、血漿和血清中分離出外泌體,當使用標準液(已知外泌體的量)創建標準曲線時,甚至可以進行定量。但是,此方法需要通過超速離心或超濾對樣品進行預處理。同樣,流場-流分離與紫外線分析儀和光散射檢測器相結合已被用于分析外泌體的大小和純度。外泌體較有用的特性之一是它們穿過屏障(如細胞質膜和血/腦屏障)的能力。血漿提取試劑盒成分

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外泌體發現于1986年,是一種直徑約30~100nm的雙層膜囊泡狀結構小體,可由機體內多種細胞如免疫細胞、干細胞、心血管細胞、網織紅細胞、血小板、神經細胞和肉瘤細胞等主動分泌產生,普遍分布于外周血、尿液、唾液、乳汁、腹水、羊水等體液中。外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(如細胞因子、生長因子)以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質,在體內參與細胞通訊、細胞遷移、促血管新生和抗肉瘤免疫等生理過程,與多種疾病的發生和進程密切相關。由于外泌體的特殊結構和功能,使得它具有潛在的應用價值,一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標,另一方面也可以作為診療手段,未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床診療。細胞提取試劑盒服務外泌體可以包含不同類型的細胞表面蛋白、細胞內蛋白、RNA、DNA、氨基酸和代謝物。

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流式細胞技術是細胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法,其用于外泌體定量檢測的準確性也在不斷上升。將外泌體表面特異性標志物CD63、CD81等相應抗體進行標記,可用流式細胞儀檢測到陽性表達,從而實現對外泌體的定量。但流式細胞技術檢測時需要單顆粒懸浮液,當外泌體濃度高或分離過程中發生外泌體囊泡聚集時將導致一次觀察到多個顆粒,從而導致數據不準確。因此,為了通過流式細胞儀觀察,需要將外泌體通過免疫捕獲或共價結合固定在磁珠表面上,從而便于將外泌體囊泡暴露于已知或者預期在外泌體表面表達的抗原的熒光偶聯抗體中。在流式細胞術之前,可在落射熒光顯微鏡(EPI)下觀察與磁珠和熒光抗體偶聯的外泌體囊泡。當樣品通過流式細胞儀時采集熒光信號,不只可以對外泌體進行高通量分析,還可以基于抗原表達對外泌體進行定量或分類。

人體內多種細胞及體液均可分泌外泌體,包括內皮細胞、免疫細胞、血小板、平滑肌細胞等。當其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時,外泌體可通過其攜帶的蛋白質、核酸、脂類等來調節受體細胞的生物學活性。外泌體介導的細胞間通訊主要通過以下三種方式:一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結合,進而活躍靶細胞細胞內的信號通路。二是在細胞外基質中,外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結合,從而活躍細胞內的信號通路。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出。三是外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合,非選擇性的釋放其所含的蛋白質、mRNA以及microRNA。度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高。

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細胞外囊泡是蛋白質、mRNA、miRNA和脂質運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介,根據它們的大小和發生分為三類,包括外泌體、微泡和凋亡小體。其中,外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,由多種細胞分泌,內含有特定的蛋白質、脂質、細胞因子或遺傳物質。來源于不同的組織的外泌體不只具有其特異性蛋白分子,而且還包含其行使功能的關鍵分子。近年來,隨著外泌體研究的不斷深入,它的應用已經涉及瘤子診療領域、醫學基礎和免疫領域、寄生蟲領域;臨床研究上已涉及心血管系統、內分泌代謝系統等。外泌體提取在短時間(一周之內)使用,可以放在4度保存,如果長時間保存可以放在-20度或-80度保存。江西干細胞外泌體

外泌體的提取分離方法:PEG-base沉淀法。血漿提取試劑盒成分

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