密度梯度離心是基于差速超高速離心的改良技術(shù)。該方法需預(yù)先利用常用的梯度液介質(zhì)如蔗糖、碘克沙醇和氯化銫等，在離心管中構(gòu)筑從底部到頂部密度逐漸降低的密度梯度帶。根據(jù)密度梯度構(gòu)建和沉降方式的不同,又可以分為速率區(qū)帶離心法和等密度梯度離心法,前者主要根據(jù)顆粒的沉降速率分離,介質(zhì)密度均小于外泌體密度,離心時(shí)樣品在向超速離心管底部移動(dòng)時(shí),會(huì)通過(guò)密度不斷增加的密度梯度區(qū)帶,密度大的顆粒更容易穿過(guò)密度更高的梯度層,更快地到達(dá)管底,因此控制離心的時(shí)間很重要;等密度梯度離心法中的密度梯度區(qū)帶,則會(huì)根據(jù)樣品液中各種溶質(zhì)成分來(lái)進(jìn)行組合,離心過(guò)程中,無(wú)論離心時(shí)間多久,不同密度顆粒jin會(huì)富集到具有相同密度的梯度區(qū)帶,而不會(huì)沉淀到底部。外泌體中含有豐富的蛋白質(zhì)和遺傳物質(zhì)DNA以及RNA等。吉林外泌體Dil

外泌體(exosomes)是一類由細(xì)胞分泌到胞外的囊泡。與其他兩種胞外囊泡(微囊泡和凋亡小體)相比，外泌體在產(chǎn)生方式、尺寸、密度和內(nèi)容物等方面存在明顯差異。不同于微囊泡“出芽”的形成方式，外泌體主要通過(guò)胞吐過(guò)程釋放至細(xì)胞外:首先細(xì)胞膜向內(nèi)凹陷形成早期核內(nèi)體(earlyendosomes)，早期核內(nèi)體進(jìn)一步內(nèi)陷形成多泡體(multivesicularbodies，MVBs)，其中一部分多泡體與溶酶體(lysosome)融合，進(jìn)而降解;另一部分與細(xì)胞膜融合，將其內(nèi)部所包含的囊泡釋放至胞外，即為外泌體。外泌體具有獨(dú)特的物理化學(xué)性質(zhì)，其直徑為30～200nm，密度為1.13～1.19g/mL，組成包括細(xì)胞來(lái)源相關(guān)的脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、RNA、DNA等物質(zhì)，在其表面連接有大量的糖鏈，如甘露糖、聚乳糖胺和α2，6-唾液酸等。胸水外泌體lncRNA芯片外泌體可通過(guò)其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來(lái)調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性。

基于免疫細(xì)胞來(lái)源的外泌體能夠介導(dǎo)和調(diào)節(jié)機(jī)體對(duì)中流的免疫反應(yīng)，外泌體在中流免疫zhiliao方面的潛力受到廣fan關(guān)注。其中樹(shù)枝狀細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體包含大量的MHC-多肽復(fù)合物和免疫刺激相關(guān)的分子，能夠激huo相關(guān)的T細(xì)胞，介導(dǎo)體內(nèi)抗中流應(yīng)答，在多個(gè)臨床試驗(yàn)中表現(xiàn)出良好的抗中流療效。Morse等考察了樹(shù)枝狀細(xì)胞外泌體對(duì)非小細(xì)胞肺ai患者的療效。結(jié)果表明，患者對(duì)樹(shù)枝狀細(xì)胞外泌體耐受性良好，1/3患者表現(xiàn)出了對(duì)樹(shù)枝狀細(xì)胞外泌體的T細(xì)胞響應(yīng)，2/4患者自然殺傷細(xì)胞活性得以激huo。

外泌體與免疫反應(yīng)、病毒致病性、妊娠、心血管疾病、中樞的神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病和病癥進(jìn)展相關(guān)。由外泌體傳遞到受體細(xì)胞的蛋白質(zhì)、代謝物和核酸有效地改變了它們的生物反應(yīng)。這種外泌體介導(dǎo)的反應(yīng)可以促進(jìn)或阻止疾病。外泌體在調(diào)節(jié)復(fù)雜的細(xì)胞內(nèi)通路方面的固有特性使其在許多疾病的診療控制方面具有潛在的用途，主要包括神經(jīng)退行性疾病和病癥。外泌體可被設(shè)計(jì)用于遞送不同的診療有效載荷，包括短干擾、反義寡核苷酸、化療藥物和免疫調(diào)節(jié)劑，并具有將其遞送到預(yù)期目標(biāo)的能力。度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高。

一類外泌體中常見(jiàn)的細(xì)胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白，是鳥苷酸三磷酸酶(GTPases,)家族的一種。它可以調(diào)節(jié)外泌體膜與受體細(xì)胞的融合，有文獻(xiàn)報(bào)道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現(xiàn)于早期以及回收的核內(nèi)體中，RAB7和RAB9主要出現(xiàn)于晚期的核內(nèi)體。現(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白。除了RAB蛋白，外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯(lián)蛋白（包括膜聯(lián)蛋白1、2、4、5、6、7、11等）。外泌體膜上富含參與外泌體運(yùn)輸?shù)乃目缒さ鞍准易濉嵝菘说鞍准易濉Ｆ渌恍┩饷隗w中的蛋白包括多種的代謝類的酶、核糖體蛋白（RPS3）、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)因子（黑色素瘤分化相關(guān)因子,ARF1,CDC42,人類紅細(xì)胞膜整合蛋白,SLC9A3R1）、粘附因子、細(xì)胞骨架蛋白以及泛素等。外泌體鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物，多角度進(jìn)行鑒定。外泌體綜述

在研究和評(píng)估外泌體的副作用和功效時(shí)，必須考慮到肉瘤細(xì)胞來(lái)源的外泌體可能增強(qiáng)肉瘤生長(zhǎng)的潛在風(fēng)險(xiǎn)。吉林外泌體Dil

外泌體的相關(guān)成分：1、外泌體的膜同細(xì)胞一樣，是磷脂雙分子層。2、外泌體膜含有MHC-1/2蛋白，能綁定特異性的肽鏈。3、外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2。4、外泌體膜中有膜轉(zhuǎn)運(yùn)融合蛋白annexins、RAN、GTPases。5、外泌體膜上有脂質(zhì)筏Chol、ceramide、SM、PC，限制膜流動(dòng)，參與包括跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、物質(zhì)內(nèi)吞、脂質(zhì)及蛋白定向分選的多種功能。6、外泌體中含有核酸，包括miRNA、DNA、lncRNA、mRNA；同時(shí)還有一些蛋白、脂類也能被包裹到外泌體中。7、與外泌體產(chǎn)生相關(guān)的重要分子：Ral、ARF6、PLD2、RAB家族。8、一些物質(zhì)進(jìn)行外泌體中是特異性的：如hnRNPA2B1能結(jié)合lncRNA或miRNA特異性的序列（GGAG/CCCU），進(jìn)行主動(dòng)包埋。超速離心是目前分離外泌體的主要技術(shù)。吉林外泌體Dil

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