7)蓋好培養(yǎng)瓶的蓋子，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細胞分布均勻。若需要氣體交換可打開蓋子。(8)將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱中（37℃，5%CO2，95%空氣）(9)放入培養(yǎng)箱后第6-16小時更換一次培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細胞。5、細胞培養(yǎng)過程中，多久更換一次培養(yǎng)基？這取決于細胞生長的速度。一般而言2-3天更換一次培養(yǎng)基，許多細胞培養(yǎng)實驗室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。注意：凍存細胞復蘇后，在6-16小時內更換培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和死亡的細胞。6、我能擴增培養(yǎng)和再次凍存原代正常人類細胞嗎？這取決于細胞的類型。一些細胞類型像神經細胞，神經膠質細胞和一些生長緩慢的上皮細胞，不推薦擴增培養(yǎng)和再次凍存。其它的細胞類型像成纖維細胞、星形細胞、腎系膜細胞、星形膠質細胞等等，可以擴增培養(yǎng)和再次凍存。然而，需要注意的是再次凍存的過程可能導致細胞生長性能的改變。7、培養(yǎng)瓶中應該加入多少體積的培養(yǎng)基？我們推薦的用量為：T-25培養(yǎng)瓶5ml，T-75培養(yǎng)瓶15ml，T-150培養(yǎng)瓶30ml。產品名稱：人臍間充質干細胞，Human Umbilical cord mesenchymal stem Cells 貨號：PC-H-18105。云南裸鼠原代細胞培養(yǎng)

    使得初學者或不熟練的實驗人員在用爬片法制備原代細胞時，會造成污染或實驗器材(實驗動物)的浪費，損失人力，物力，財力。這就急需一個出色的一體式原代細胞爬片培養(yǎng)瓶來滿足上述實驗需求。申請人根據多年的提取原代背根神經節(jié)膠質細胞和血管平滑肌細胞的經驗,創(chuàng)造性、開拓性的設計了一種一體式原代細胞爬片培養(yǎng)瓶。技術實現要素：本發(fā)明的目的為了解決現有培養(yǎng)瓶(皿)進行原代細胞爬片培養(yǎng)存在的許多不便和不足之處，故提出一種操作方便，結構設計合理，有助于爬片法制備原代細胞的培養(yǎng)瓶。為實現上述目的，本發(fā)明采用的技術方案：一種一體式原代細胞爬片培養(yǎng)瓶，包括瓶身，所述瓶身的其中一側端部設有爬片瓶頸和加樣口，瓶身的上端部設有外接圓柱，所述外接圓柱的頂端封閉、下端與瓶身連通，并且外接圓柱內設有活動圓盤和纖維圓盤，所述活動圓盤位于纖維圓盤的上方，活動圓盤的四周外壁與外接圓柱的內壁可滑動接觸，并且在外接圓柱內壁上設有用于限制活動圓盤向上活動的阻隔環(huán)，同時在外接圓柱位于活動圓盤上方的柱體上設有正壓口，所述纖維圓盤固定設置，并且在纖維圓盤內可活動穿插有連接桿，所述連接桿上端與活動圓盤固定連接。上海乳鼠原代細胞購買HUVSMC(人臍靜脈血管平滑肌細胞)。

    使得每個內箱盒2都處于密封的狀態(tài)，防止外部污染因素的干擾。如圖5所示，，為方便使用者鎖緊或打開內箱盒2，所述鎖扣24包括鎖環(huán)241及鎖塊242，所述鎖環(huán)241與上蓋22活動連接，所述鎖塊242設于底盒21外部，所述鎖環(huán)241套設于鎖塊242上。當需要鎖緊內箱盒2時，只需將鎖環(huán)241活動轉動，然后套設在鎖塊242上即可，簡單方便。如圖1所示，進一步的，為方便使用者移動外箱體1，所述外箱體1的底部還設有若干萬向腳輪12。本實施例中，外箱體1的底部設有4個萬向腳輪12，各萬向腳輪12分別設于外箱體1底部的四個角上。如圖1所示，更進一步的，為方便推拉外移動外箱體1，所述外箱體1的側部還設有方便推拉的扶手13。使用者手持扶手13，利用萬向腳輪12移動外箱體1的位置，簡單方便。采用上述各個技術方案，本實用新型通過將細胞培養(yǎng)皿存放在內箱盒內，在外箱體的矩形槽設置若干層對稱的滑槽，各內箱盒可從滑槽的正面或背面存放于內，提高了細胞培養(yǎng)箱的空間利用率；在內箱盒內設有紫外燈，紫外燈單獨照射于內箱盒，使得細胞培養(yǎng)皿處于無菌無毒的環(huán)境，提高細胞培養(yǎng)的存活率；在內箱盒的兩側分別設有滑輪及滑塊，滑輪的設置使得用戶可方便存取內箱盒內的細胞培養(yǎng)皿。

    下端伸入瓶身13并與設于瓶身13內的纖維板8固定連接，并且在活動圓盤11和纖維圓盤12之間的連接桿5上套裝有彈簧4。本實施例中，所述活動圓盤11的四周設有密封圈，或活動圓盤11可采用類似注射器的密封橡膠塞，兼具密封和可活動的性能本實施例中，所述彈簧4處于自然狀態(tài)或輕微壓縮狀態(tài)時，活動圓盤11與阻隔環(huán)3相接觸；在活動圓盤11受壓時，活動圓盤11向下運動，彈簧4壓縮，連接桿5向下并帶動纖維板8一起向下，待壓力解除后，彈簧4伸張恢復并帶動活動圓盤11復位。本實施例中，所述纖維板8采用具有阻隔和透氣特性的柔性網格纖維材料制作；纖維板8整體被網格狀的纖維覆蓋，可根據需要定制不同目數的網格纖維。本實施例中，所述外接圓柱1的直徑為2cm，正壓口2的直徑為5mm，并可采用肝素帽封閉；活動圓盤11和纖維圓盤12的直徑為。本實施例中，所述加樣口6為直徑，該開口可通過螺紋連接透氣瓶蓋，爬片瓶頸7為類棱柱狀，根據爬片組織大小可定制25cm2和75cm2底面積，所述瓶身13底部的四個角還設置有8個直角三角支架10。本一體式原代細胞爬片培養(yǎng)瓶的實驗操作流程如下：一、器材準備無菌鑷，無菌剪，胎牛血清，細胞培養(yǎng)基，胰蛋白酶，膠原酶(根據需求選用)，70％醫(yī)用酒精，燒杯，無菌pbs。血管疾病發(fā)生和發(fā)展的一個主要因素是由于血管平滑肌細胞轉變成為了具有繁殖能力的表型。

    ⑦實驗完畢及時收拾，保持工作區(qū)域清潔整齊，用75%酒精清潔臺面。（3）細胞污染的預防①實驗用品防止污染。細胞培養(yǎng)所用試劑、耗材、器材的清洗、消毒要徹底，各種溶液滅菌要仔細，并在無菌實驗檢測陰性后才能使用。操作室及剩余的無菌器材要定期清潔、消毒、滅菌。②操作過程防止污染。③穿著容易起靜電或吸附灰塵的衣物必須更換為白大褂后才能進入細胞間。④實驗開始前需要確定戴的手套沒有問題，只要接觸過生物安全柜之外的物品，必須及時對手套進行消毒。⑤進入細胞培養(yǎng)間后關好門，坐下來盡量少走動以免影響生物安全柜的風簾。工作開始前要先用75%酒精棉球擦手和瓶蓋。事先要嚴格檢查所用的器材、溶液和細胞，不要把污染品或未經消毒的物品帶入無菌室內，更不能隨便使用，以免造成大規(guī)模污染。⑥細胞操作時動作要輕，必須在火焰周圍無菌區(qū)內打開瓶口，并將瓶口放在火焰周圍簡單轉動燒灼，注意不要讓火焰把塑料瓶口燒化。⑦實驗操作時生物安全柜的隔板要盡可能放低，盡量減少談話，打噴嚏或咳嗽時不能對著工作區(qū)，以免造成不必要的污染。⑧瓶蓋應當倒放在遠離自己的地方，以避免瓶蓋被誤操作所污染。⑨不要從敞開的容器口上方經過。臍帶是哺乳類連接胎兒和胎盤的管狀結構。湖南乳鼠原代細胞實驗

多數細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長。云南裸鼠原代細胞培養(yǎng)

    易操作原代細胞和細胞系的比較3.原代細胞的應用由于原代細胞生物學特性未發(fā)生很大改變，接近和反映體內生長特性，因此是：(1)研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的工具；(2)更好實現醫(yī)療的診治模式，實現個體化用藥的目的。第二部分：原代細胞分離和培養(yǎng)技術原代培養(yǎng)的原理將動物機體的各種組織從機體中取出，經各種酶(常用胰蛋白酶/膠原酶)、螯合劑(常用EDTA)或機械方法處理，分散成單細胞，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細胞得以生存、生長和繁殖，這一過程稱原代培養(yǎng)。主要包括取材——分離——培養(yǎng)等3部分；在原代細胞應用較多的包括：組織（如實體瘤、皮膚等）、懸浮細胞的取材等。下面依次介紹：一、組織的取材病人自體的原代細胞由于更接近臨床患者標本，可以更好實現醫(yī)療的診治模式，實現個體化用藥的目的。所以對病人自體細胞體外分離與培養(yǎng)十分必要。基本過程如下圖所示：原代細胞的分離步驟備注：上圖細胞為肉瘤患者的原代細胞具體步驟如下：1.在無菌條件下的冰上對新鮮離體的組織，剔除包膜及壞死組織，無菌PBS清洗3-5次；切成約1mm3組織塊；2.加入2mmol的EDTA，搖勻后放置冰上約30-60min；3.離心，并加入膠原酶消化（含蛋白酶）；4.消化期間。云南裸鼠原代細胞培養(yǎng)