年連續(xù)三年成為新賽美全產(chǎn)品線中“受客戶喜歡的科研產(chǎn)品”“無血清細(xì)胞凍存液關(guān)鍵技術(shù)及產(chǎn)業(yè)化”項(xiàng)目成功入圍“2017年東吳科技創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)人才計(jì)劃“3優(yōu)勢分析傳統(tǒng)凍存液CELLSAVING成分“血清+培養(yǎng)基+dmso”四大類，成分明確，不含血清安全性1、微生物污染風(fēng)險(xiǎn)2、批次不穩(wěn)定1、無微生物污染風(fēng)險(xiǎn)險(xiǎn)2、批次穩(wěn)定操作1、4℃(40min)→20℃(30min)→80℃→液氮2、程序性降溫盒（多人共用；異丙醇）直接凍于-80℃冰箱，長期保存效果活率偏低，批次有差異，不適用無血清細(xì)胞凍存90%以上，復(fù)蘇后幾乎看不到死細(xì)胞無血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品性能：用包括人白蛋白等蛋白組分替代血清的用途，無動(dòng)物源組分。唐山無血清細(xì)胞凍存液推薦廠家

無血清細(xì)胞凍存液細(xì)胞凍存步驟：1.常規(guī)方法收集對(duì)數(shù)期的貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞于試管中。2.確認(rèn)所需凍存的細(xì)胞數(shù)量。3.將所需凍存細(xì)胞收集于離心管中，1000rpm，5min離心，收集細(xì)胞沉淀，并棄掉上清液。4.加入適量的凍存液于離心管中，加入量按照細(xì)胞保存濃度為5X105至1X107/ml密度，輕柔的混勻細(xì)胞，獲取細(xì)胞混合液。5.將獲取的細(xì)胞混合液按照1~1.5ml/管，分裝于凍存管中。6.將凍存管直接放入-80℃保存，可長期保存。無血清細(xì)胞凍存液，通用于各種動(dòng)物細(xì)胞系及tumour細(xì)胞系。特別的配方能有效提高細(xì)胞存活率和復(fù)蘇能力。不含血清，無病毒、霉菌和支原體等微生物污染，確保凍存細(xì)胞安全。非常適用于無血清細(xì)胞培養(yǎng)和蛋白表達(dá)細(xì)胞的凍存。北京正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液供應(yīng)商可以在冰晶形成之前，優(yōu)先結(jié)合細(xì)胞外的水分子。

凍存細(xì)胞復(fù)蘇方法：1.從冰箱里取出細(xì)胞冷凍保存管，立即放入37℃振動(dòng)水浴槽中快速解凍。2.待凍存管中細(xì)胞混合液完全融化后，立即加入1ml細(xì)胞培養(yǎng)基于該冷凍管中與細(xì)胞混合，再將細(xì)胞混合液從凍存管中移入含有9ml該細(xì)胞培養(yǎng)基的試管中，混合均勻。3.離心收集培養(yǎng)細(xì)胞（參考離心條件：1,000~2,000rpm，4℃，3~5min），移去上清液。4.清洗細(xì)胞，充分洗凈殘留凍存液。5.加入適量的新鮮細(xì)胞培養(yǎng)基，使用移液管緩緩地均勻細(xì)胞混合液。適量地稀釋后，將細(xì)胞混合液移至事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)瓶中。6.鏡檢后，研究者可根據(jù)各自方法和需要來進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。

胞冷凍保存方法：選擇凍存處于對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞有助于提高復(fù)蘇細(xì)胞存活率。1.按照常用方法收集懸浮細(xì)胞或貼壁細(xì)胞于試管中。2.按照培養(yǎng)細(xì)胞密度和所用細(xì)胞凍存管的尺寸計(jì)算所需凍存細(xì)胞數(shù)。（參考：5×105至5×106cells/ml）。3.取相當(dāng)于所需細(xì)胞數(shù)的細(xì)胞懸浮液量，置于離心管中，離心收集培養(yǎng)細(xì)胞（參考離心條件：1,000~2,000rpm，4℃，3~5min）。移去離心管中的上清液。4.加入適量的無血清型細(xì)胞凍存液于離心管中，使細(xì)胞濃度為5×105至5×106cells/ml。緩慢地混合均勻，制成細(xì)胞混合液。5.將離心管中的細(xì)胞混合液分裝于已標(biāo)示完全的冷凍保存管中。6.直接將含細(xì)胞混合液的凍存管放入-80℃冰箱，長期冷凍保存。7.若研究者需要液氮保存時(shí)，可將完全凍結(jié)的凍存管（放入-80℃冰箱后至少一晝夜）移至-196℃液氮罐。當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí)，可增至-5 ℃～-10℃/min。之前。

細(xì)胞凍存和復(fù)蘇的原則是：慢凍速融，這樣更加有利于保持細(xì)胞的活力。凍存細(xì)胞不加任何保護(hù)劑，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)冰晶的產(chǎn)生，從而使細(xì)胞產(chǎn)生內(nèi)源性的機(jī)械損傷，引起細(xì)胞內(nèi)環(huán)境滲透壓，PH，電解質(zhì)等的改變，進(jìn)而促使細(xì)胞死亡。在過去的幾十年中，科研工作者將培養(yǎng)基、血清和DMSO按照一定的比例配制成凍存液，并配合手工使細(xì)胞從4℃，-20℃，-80℃到液氮中逐步轉(zhuǎn)移使其達(dá)到“慢凍”的效果。但這種自制的凍存液儲(chǔ)存時(shí)間一般比較短，不能滿足時(shí)間跨度大的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的需求。且這樣人力和時(shí)間成本大，人手操作的誤差和血清制品的批間差也給實(shí)驗(yàn)結(jié)果帶來了不穩(wěn)定性。無血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品特色：可直接存放于-80℃冰箱凍存，無需經(jīng)過費(fèi)時(shí)的程序降溫過程（省時(shí)、省錢）。濟(jì)南無血清細(xì)胞凍存液銷售廠家

無血清凍存液使用方法：加入適量的細(xì)胞凍存液，重懸細(xì)胞，調(diào)節(jié)密度至1-5x10*↑/mL。唐山無血清細(xì)胞凍存液推薦廠家

復(fù)蘇方：法1）從冰箱里取出細(xì)胞冷凍保存管，立即放入37℃振動(dòng)水浴槽中快速解凍。2）待凍存管中細(xì)胞混合液完全融化后，立即加入1ml細(xì)胞培養(yǎng)基于該冷凍管中與細(xì)胞混合，再將細(xì)胞混合液從凍存管中移入含有9ml該細(xì)胞培養(yǎng)基的試管中，混合均勻。3）離心收集培養(yǎng)細(xì)胞（參考離心條件：1,000~2,000rpm，4℃，3~5min），移去上清液。4）清洗細(xì)胞，充分洗凈殘留凍存液。5）加入適量的新鮮細(xì)胞培養(yǎng)基，使用移液管緩緩地均勻細(xì)胞混合液。適量地稀釋后，將細(xì)胞混合液移至事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)瓶中。6）鏡檢后，研究者可根據(jù)各自方法和需要來進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。唐山無血清細(xì)胞凍存液推薦廠家