GPCR是比較大的藥物靶點(diǎn)家族,其功能研究涉及配體結(jié)合、第二信使產(chǎn)生、下游信號(hào)通路活化等多個(gè)層面。均相發(fā)光技術(shù)多方面滲透于此領(lǐng)域。對(duì)于配體結(jié)合競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn),可采用TR-FRET,將受體標(biāo)記供體,配體標(biāo)記受體。對(duì)于GPCR活化后比較關(guān)鍵的cAMP積累或IP3/DAG產(chǎn)生,均有成熟的均相檢測(cè)試劑盒。例如,cAMP檢測(cè)常采用基于抗體競(jìng)爭(zhēng)原理的均相發(fā)光免疫分析。細(xì)胞裂解后,內(nèi)源性cAMP與加入的標(biāo)記cAMP競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合有限量的抗cAMP抗體。抗體結(jié)合事件通過FRET或Alpha技術(shù)被檢測(cè),信號(hào)強(qiáng)度與內(nèi)源性cAMP濃度成反比。這類方法直接在細(xì)胞裂解液中進(jìn)行,快速、靈敏,完美契合GPCR激動(dòng)劑/拮抗劑的高通量篩選。均相發(fā)光技術(shù)服務(wù)平臺(tái),為您提供專業(yè)的技術(shù)支持和解決方案!湖北診斷試劑均相發(fā)光免疫診斷試劑

自身免疫病的診斷常依賴于檢測(cè)患者血清中的特異性自身抗體。均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)為此提供了高通量、自動(dòng)化的解決方案。例如,可以將已知的自身抗原(如dsDNA、ENA蛋白)包被在供體微珠上,患者血清中的自身抗體如果存在,則會(huì)與抗原結(jié)合。然后加入標(biāo)記有受體(如熒光標(biāo)記的抗人IgG抗體)的受體微珠或試劑,形成“抗原-自身抗體-抗人IgG”復(fù)合物,從而拉近供受體產(chǎn)生信號(hào)。這種方法可以實(shí)現(xiàn)多種自身抗體的同步檢測(cè),快速輔助臨床診斷。遼寧均相化學(xué)發(fā)光均相發(fā)光優(yōu)點(diǎn)鐵蛋白(Ferr)檢測(cè)試劑盒(均相化學(xué)發(fā)光法)。

均相發(fā)光技術(shù)比較明顯的優(yōu)勢(shì)是其操作的極度簡(jiǎn)便性所帶來的高通量檢測(cè)能力。由于摒棄了所有分離步驟,典型的均相發(fā)光檢測(cè)只需將樣本、識(shí)別元件(如抗體)和發(fā)光試劑依次加入微孔板中,混合孵育后即可直接讀數(shù)。這種“加樣-孵育-檢測(cè)”的模式,將復(fù)雜的多步流程簡(jiǎn)化為一步或兩步,不僅大幅縮短了檢測(cè)時(shí)間(通常可在幾分鐘到一小時(shí)內(nèi)完成),還大限度地減少了人為操作誤差和交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)。這一特性使其完美適配現(xiàn)代自動(dòng)化液體處理系統(tǒng)和多通道檢測(cè)儀,能夠輕松實(shí)現(xiàn)每天處理數(shù)萬(wàn)甚至數(shù)十萬(wàn)個(gè)樣本的超高通量篩選,在藥物發(fā)現(xiàn)、功能基因組學(xué)等需要海量數(shù)據(jù)積累的領(lǐng)域具有不可替代的價(jià)值。
離子通道和轉(zhuǎn)運(yùn)體是重要的藥物靶點(diǎn),但傳統(tǒng)電生理方法通量極低。基于化學(xué)發(fā)光的離子敏炎癥料或蛋白,為高通量篩選提供了可能。例如,使用對(duì)鈣離子敏感的水母發(fā)光蛋白(Aequorin)或基于熒光素酶的鈣指示劑(如Photina)。當(dāng)離子通道開放引起離子內(nèi)流時(shí),會(huì)觸發(fā)這些蛋白的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。將穩(wěn)定表達(dá)該報(bào)告系統(tǒng)和目標(biāo)離子通道的細(xì)胞系用于篩選,加入化合物后直接測(cè)量發(fā)光信號(hào)變化,即可高通量地發(fā)現(xiàn)通道的激動(dòng)劑或阻斷劑。類似原理也可用于鈉、鉀等離子通道或某些轉(zhuǎn)運(yùn)體的功能研究。均相化學(xué)發(fā)光的反應(yīng)機(jī)制是怎樣的,有哪些關(guān)鍵步驟?

Alpha(Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay)技術(shù)是均相化學(xué)發(fā)光的典范。其供體珠中裝載光敏劑,在680nm激光激發(fā)下,將周圍環(huán)境中的氧分子轉(zhuǎn)化為高能量、短壽命(約4微秒)的單線態(tài)氧。單線態(tài)氧在溶液中的擴(kuò)散半徑只約200納米。受體珠中則裝載了化學(xué)發(fā)光劑(通常是噻吩衍生物)和熒光接收體。當(dāng)單線態(tài)氧擴(kuò)散進(jìn)入鄰近的受體珠,會(huì)觸發(fā)一系列級(jí)聯(lián)反應(yīng):化學(xué)發(fā)光劑被氧化并發(fā)光,該能量隨即傳遞給熒光接收體,比較終發(fā)射出波長(zhǎng)更長(zhǎng)(520-620nm)、特征更明顯的熒光。這個(gè)能量轉(zhuǎn)移和放大的過程,使得一個(gè)單線態(tài)氧分子能引發(fā)大量發(fā)光分子的發(fā)射,實(shí)現(xiàn)了信號(hào)的有效放大,因此靈敏度極高。醫(yī)療新時(shí)代!均相發(fā)光,助力疾病早篩早診!遼寧化學(xué)發(fā)光均相發(fā)光與普通發(fā)光的區(qū)別
均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)的檢測(cè)流程是怎樣的,復(fù)雜嗎?湖北診斷試劑均相發(fā)光免疫診斷試劑
均相發(fā)光技術(shù)通過其“免分離”的關(guān)鍵設(shè)計(jì)理念,徹底變革了生物檢測(cè)的模式。從基礎(chǔ)的蛋白互作、酶活性分析,到復(fù)雜的細(xì)胞信號(hào)通路研究、高通量藥物篩選,再到臨床診斷和生物工藝監(jiān)控,其足跡已遍布生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)的各個(gè)角落。以FRET、TR-FRET、Alpha、BRET等為表示的各種均相發(fā)光方法,提供了靈活、強(qiáng)大且多樣化的解決方案。它不只明顯提升了檢測(cè)效率和通量,降低了人力物力成本,更推動(dòng)了科學(xué)發(fā)現(xiàn)和藥物研發(fā)的進(jìn)程。隨著技術(shù)的不斷迭代和創(chuàng)新應(yīng)用的拓展,均相發(fā)光必將在未來精確醫(yī)學(xué)和生物技術(shù)發(fā)展中持續(xù)扮演不可或缺的關(guān)鍵角色。湖北診斷試劑均相發(fā)光免疫診斷試劑