激酶是重要的藥物靶點,其活性檢測是藥物篩選的關鍵。均相發光技術,尤其是TR-FRET和Alpha技術,為此提供了理想平臺。以TR-FRET為例:將待測激酶、底物肽、ATP與待篩選化合物共同孵育。體系中包含兩種抗體,一種針對磷酸化底物(帶供體標記),另一種針對底物肽的標簽(帶受體標記)。只有當激酶活性正常,底物被磷酸化后,兩個抗體才能同時結合到底物肽上,使供受體靠近產生FRET信號。若化合物能抑制激酶,則磷酸化水平下降,FRET信號減弱。這種方法無需分離,可直接在含有ATP、激酶和化合物的混合液中實時或終點法檢測,通量極高,是發現激酶抑制劑的主流手段。均相發光試劑定制服務,根據您的需求提供個性化解決方案!江蘇第五代化學發光均相發光免疫分析

均相化學發光技術因其超高的通量、靈敏度和易于自動化的特性,已成為現代藥物發現高通量篩選(HTS)的支柱技術。在靶點導向的篩選中,它廣泛應用于:激酶/磷酸酶抑制劑篩選(通過檢測磷酸化底物的量)、GPCR功能分析(檢測cAMP、IP3或β-arrestin招募)、核受體轉錄活性篩選(報告基因檢測)、蛋白-蛋白相互作用抑制劑篩選(如使用Alpha技術)、以及酶活性分析(蛋白酶、去乙酰化酶等)。其“混合-讀數”的模式允許在1536孔甚至更高密度板中進行超大規模化合物庫(數十萬至上百萬)的篩選,每天可產生海量數據,極大加速了先導化合物的發現進程。北京均相發光應用領域均相化學發光在 POCT(即時檢驗)領域的應用現狀?

除了基于熒光的能量轉移,均相檢測也可利用化學發光能量轉移(CRET)。在CRET中,供體是化學發光反應(如魯米諾-過氧化物酶反應)產生的激發態分子,其發出的光能直接激發鄰近的熒光受體發出更長波長的光。通過設計使受體標記在結合事件的另一方,即可實現均相檢測。電化學發光(ECL)也可用于均相模式。例如,將三聯吡啶釕標記在一方,另一方標記上能夠在其電極氧化還原循環中起共反應物作用的物質(如三丙胺)。當兩者因生物識別事件靠近時,電化學觸發的高效ECL反應得以發生,產生強信號。這些方法進一步拓展了均相發光的技術邊界,提供了更多樣化的信號輸出選擇。
組蛋白修飾酶(如甲基轉移酶、去甲基酶、乙酰轉移酶、去乙酰化酶)是**、神經疾病等領域的熱門靶點。均相化學發光技術為這些酶活性的檢測和抑制劑篩選建立了成熟平臺。以組蛋白甲基轉移酶為例,通常使用生物素標記的S-腺苷甲硫氨酸(SAM)類似物作為甲基供體。酶反應后,生物素標記的甲基被轉移到組蛋白底物上。然后,使用針對甲基化位點的抗體(偶聯供體珠)和鏈霉親和素(偶聯受體珠)通過Alpha技術檢測,信號強度與酶活性成正比。這種方法靈敏度高,抗干擾能力強,可直接在含有化合物和輔因子的混合體系中進行篩選。浦光生物均相化學發光技術在免疫檢測中的應用有哪些創新點?

熒光共振能量轉移(FRET)是均相發光技術中應用比較多方面的信號產生機制之一。其原理是:當一個熒光基團(供體,Donor)的發射光譜與另一個熒光基團或淬滅基團(受體,Acceptor)的吸收光譜有足夠重疊,且兩者距離非常接近(通常1-10納米)時,供體的激發態能量會以非輻射方式轉移給受體。在均相檢測中,常將供體和受體分別標記在相互作用的生物分子對(如一對抗體、或酶與底物肽)上。當目標分子存在并促使這對生物分子結合時,供體與受體被拉近,發生有效的FRET,導致供體熒光淬滅,受體熒光增強(如果受體是熒光團)。通過監測供體與受體熒光強度的比率變化,即可高靈敏度、高特異性地定量目標分析物。均相發光技術研究進展,浦光生物為您提供前沿資訊!上海均相發光優點
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研究蛋白-蛋白相互作用(PPI)對于理解細胞信號網絡至關重要。傳統的酵母雙雜交、免疫共沉淀等方法操作復雜、通量低。以Alpha技術為表示的均相發光方法徹底改變了這一局面。將靶蛋白A與供體珠偶聯,互作蛋白B與受體珠偶聯。當A和B在溶液中相互作用時,拉近兩珠產生信號。該方法可在純化蛋白、細胞裂解液甚至活細胞培養基中進行,不只能驗證已知互作,更能用于高通量篩選破壞或促進特定PPI的小分子化合物。其均相特性使得可以實時監測互作動力學,研究互作強度,為藥物發現和基礎生物學提供了強大工具。江蘇第五代化學發光均相發光免疫分析