熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)是均相發(fā)光技術(shù)中應(yīng)用比較多方面的信號產(chǎn)生機制之一。其原理是:當一個熒光基團(供體,Donor)的發(fā)射光譜與另一個熒光基團或淬滅基團(受體,Acceptor)的吸收光譜有足夠重疊,且兩者距離非常接近(通常1-10納米)時,供體的激發(fā)態(tài)能量會以非輻射方式轉(zhuǎn)移給受體。在均相檢測中,常將供體和受體分別標記在相互作用的生物分子對(如一對抗體、或酶與底物肽)上。當目標分子存在并促使這對生物分子結(jié)合時,供體與受體被拉近,發(fā)生有效的FRET,導致供體熒光淬滅,受體熒光增強(如果受體是熒光團)。通過監(jiān)測供體與受體熒光強度的比率變化,即可高靈敏度、高特異性地定量目標分析物。體外診斷行業(yè)新星,均相化學發(fā)光,助力企業(yè)快速發(fā)展!吉林均相發(fā)光解決方案

環(huán)境水樣和食品中的微量污染物(如農(nóng)藥殘留、獸藥、、重金屬離子)檢測需要快速、高通量的篩查手段。均相化學發(fā)光免疫分析(CLIA)非常適合這一角色。通過制備針對特定污染物的高親和力抗體,并建立競爭性或間接的均相化學發(fā)光檢測模式,可以在樣本簡單前處理甚至直接稀釋后進行分析。例如,樣本中的小分子污染物與化學發(fā)光標記的類似物競爭結(jié)合有限量的抗體,信號強度與污染物濃度成反比。這種方法通量高、成本相對較低,可作為色譜-質(zhì)譜等確證方法的有力前篩工具,廣泛應(yīng)用于海關(guān)、質(zhì)檢和環(huán)保部門的日常監(jiān)控。江西體外診斷均相發(fā)光技術(shù)均相化學發(fā)光技術(shù)怎樣提高檢測的靈敏度和特異性?

細胞水平的功能性檢測是藥物篩選和生物學研究的基礎(chǔ)。均相化學發(fā)光為此提供了多種穩(wěn)健的檢測方案。比較經(jīng)典的是基于ATP含量的細胞活力/增殖/毒性檢測。活細胞內(nèi)的ATP與熒光素酶-熒光素反應(yīng)直接偶聯(lián),產(chǎn)生化學發(fā)光信號,其強度與活細胞數(shù)成正比。該方法操作簡單(一步加樣裂解/檢測),靈敏度高,線性范圍寬。此外,針對細胞凋亡,可通過檢測Caspase酶活性(使用化學發(fā)光的Caspase底物)或膜磷脂酰絲氨酸外露(使用與化學發(fā)光檢測偶聯(lián)的Annexin V類似物)來進行均相分析。這些方法均實現(xiàn)了在微孔板中對細胞狀態(tài)的快速、定量評估。
在傳染病診斷領(lǐng)域,均相化學發(fā)光技術(shù)主要用于開發(fā)高靈敏的抗原或抗體檢測方法。例如,針對病毒抗原,可以設(shè)計雙抗體夾心法的Alpha檢測,實現(xiàn)快速、高靈敏的定量。在病毒學基礎(chǔ)研究中,其應(yīng)用更為普遍:假病毒中和試驗(檢測熒光素酶報告基因信號以評估抗體中和能力)、病毒進入抑制篩選、病毒復制周期關(guān)鍵酶(如蛋白酶、聚合酶)抑制劑篩選等。特別是在COVID-19大流行期間,基于均相化學發(fā)光原理的高通量中和抗體檢測平臺,為疫苗評價和康復者血漿篩查提供了關(guān)鍵工具。均相化學發(fā)光在醫(yī)學中的作用和地位如何?

均相發(fā)光技術(shù)也普遍用于細胞水平的分析,如細胞活力、凋亡和化合物毒性篩選。例如,基于ATP含量的細胞活力檢測:活細胞含有豐富的ATP,細胞裂解后釋放的ATP可與熒光素酶反應(yīng)產(chǎn)生化學發(fā)光,發(fā)光強度與活細胞數(shù)量成正比。整個過程在同一個孔中加入裂解/檢測試劑即可完成,是均相操作的典范。對于細胞凋亡,可通過檢測caspase酶活性(使用熒光底物或發(fā)光底物)來實現(xiàn)均相分析。細胞毒性檢測則可測量因細胞膜損傷而釋放的胞內(nèi)酶(如乳酸脫氫酶LDH)活性,通過偶聯(lián)的發(fā)光反應(yīng)來定量。這些方法實現(xiàn)了對細胞狀態(tài)的快速、高通量、自動化評估。均相化學發(fā)光在激*類檢測方面有何突出表現(xiàn)?北京CRET技術(shù)均相發(fā)光應(yīng)用領(lǐng)域
均相化學發(fā)光在個性化醫(yī)療中的應(yīng)用潛力有多大?吉林均相發(fā)光解決方案
表面等離子體共振(SPR)是一種實時、無標記的生物分子相互作用分析技術(shù),能提供結(jié)合動力學(kon, koff)和親和力(KD)的精確數(shù)據(jù)。均相發(fā)光技術(shù)(如TR-FRET, Alpha)則是一種基于標記的高通量終點法或?qū)崟r動力學檢測。兩者具有很好的互補性:SPR常用于前期的靶點-配體相互作用的詳細表征和驗證;而基于此驗證過的相互作用對,開發(fā)出的均相發(fā)光檢測方法,則可以用于后續(xù)的大規(guī)模化合物庫篩選和功能學研究。將兩者結(jié)合,構(gòu)成了從機理研究到大規(guī)模篩選的完整工作流程。吉林均相發(fā)光解決方案